小檗碱诱导大鼠便秘模型的初步研究

吴 迪 ，范明松 ，李志雄 ，孙兆林 ，刘井如 ，季宇彬 ，陈明苍 *

1.中国科学院上海药物研究所，上海 201203；2.哈尔滨商业大学，黑龙江 哈尔滨 150076

便秘是消化系统疾病的常见症状，是由于某种原因造成的大便次数减少和粪便干燥难解。用药不当或者药物的副作用是造成便秘的原因之一。小檗碱是治疗肠道感染和腹泻的常用药。有文献报道，小檗碱通过增加肠道Na+主动吸收和抑制Cl-主动分泌，并增加Cl-的被动吸收，可抑制豚鼠正常回肠水电解质分泌[1]。患者在用小檗碱治疗结肠炎的过程中也有排便困难的现象。因此本实验设想用小檗碱造大鼠便秘模型，为更好地研究便秘提供新的模型。而且由于小檗碱的药理作用广泛，但有导致便秘的临床现象，因此，有针对性地考察小檗碱与便秘的关系，为临床合理用药和小檗碱药理作用的开发应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 实验动物及饲养条件 SPF级雄性Wistar大鼠，由中科院上海实验动物中心供应，动物质量合格证：SCXK（沪）2007-0005号。 饲养条件：SPF 级实验饲养室， 温度：（23±1）℃，湿度：50%～70%，噪音：＜50 dB，光照：150～200 Lx，12 h 明暗交替（早 6∶00～晚 18∶00），斯莱克普通饲料喂养，自由进食与饮水。

1.1.2 盐酸小檗碱 购自龙泉高科天然药业有限公司，纯度97%以上（HPLC 检测），批号：110101。

1.1.3 试剂 墨汁的制备：阿拉伯树胶100 g，加水800 ml，煮沸至溶液透明，加入活性碳50 g，煮沸3次，加水定容至1000 ml即得，4℃保存。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药 选雄性大鼠32只，随机分成空白组和三个剂量的给药组，每组8只。3个给药组分别灌胃给予低、中、高剂量（25、50、100mg/kg）盐酸小檗碱，灌胃量为 10ml/kg，空白组给予等体积的蒸馏水，每日1次，连续14 d。期间自由饮食，每天记录各组大鼠体重变化情况。

1.2.2 大鼠排便实验 末次给药后，各组大鼠禁食16 h（饮水不限），三个剂量的给药组大鼠给予含相应受试物的墨汁，空白组大鼠给予墨汁，同时开始计时。每只大鼠单独饲养，自由饮水、摄食，观察记录每只大鼠首次排黑便所需时间、6 h内排便粒数和重量，观察结束后粪便在70℃下干燥至恒重，计算粪便含水量。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 16.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠分组的均衡性及受试物对大鼠体重的影响

各组大鼠初始体重及14 d后的体重比较结果显示，各组大鼠的初始体重与空白组比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），大鼠分组的均衡性良好。灌胃给予受试物14 d后各组大鼠体重与空白组比较，差异均无统计学意义 （均P＞0.05），即各受试剂量没有影响大鼠体重的正常增加。见表1。

表1 大鼠的初始体重及14 d后的体重

2.2 盐酸小檗碱对大鼠排便的影响

与空白组相比，盐酸小檗碱中剂量组大鼠的粪便粒数和粪便含水量均降低，差异有统计学意义（P＜0.05），盐酸小檗碱中剂量组大鼠的首次排黑便所需时间也有所延长，差异有统计学意义（P＜0.05）。表明盐酸小檗碱造大鼠便秘模型成功。见表2。

表2 盐酸小檗碱对大鼠各排便指标的影响（）

表2 盐酸小檗碱对大鼠各排便指标的影响（）

注：与空白组比较，*P＜0.05

组别 剂量（mg/kg）动物只数（只）空白组低剂量组中剂量组高剂量组-25501008888首次排黑便时间（min）311.7±62.8300.7±42.8383.3±29.6*369.4±15.36 h内排便数（粒）9.83±2.510.57±4.55.71±3.6*9.7±3.1粪便含水量（%）59.0±2.459.7±2.855.1±2.0*58.2±2.0

3 讨论

小檗碱属于异喹啉类生物碱，分子式为C20H18NO4+，摩尔质量为336.36122 g/mol。小檗碱常以季铵碱形式存在，临床常用其盐酸盐。小檗碱多集中于毛茛科黄连的干燥根茎中，还存在于小檗科、芸香科、鼠李科、防己科、罂粟科植物中[2]。临床上，小檗碱主要被应用于治疗肠道感染，近年来还发现小檗碱有治疗糖尿病、心血管疾病、抗高血脂等药理作用[3-5]。小檗碱造成便秘的作用可能与以下因素有关：乙酰胆碱可明显兴奋胃肠道，增加其收缩幅度和张力，也可增加胃肠平滑肌蠕动，并可促进胃肠分泌，产生排便症状。而小檗碱可直接拮抗胆碱受体而发挥抗胆碱作用，从而抑制胃肠道[6]；同时小檗碱通过增加肠道Na+主动吸收和抑制Cl-主动分泌，并增加Cl-的被动吸收，可抑制豚鼠正常回肠水电解质分泌[1]，从而导致了便秘。

目前，大鼠便秘模型中药物型便秘模型主要有次碳酸铋法、复方苯乙哌啶法和泻剂结肠法[7-10]。庄萍等[11]采用昆明小鼠小檗碱50 ml/kg口服给药剂量，结果显示其对胃肠运动有抑制作用。而小鼠排泄物相对于大鼠较少，不便于统计，且不便于观察。本实验中用盐酸小檗碱成功造成了大鼠便秘模型，但其导致便秘的机制还需要进一步的实验来证实。且在预实验过程中发现盐酸小檗碱的剂量过大 （500 mg/kg），可导致大鼠腹泻。再综合本实验研究结果，所以选择盐酸小檗碱造大鼠便秘模型的最佳剂量为50 mg/kg，在造模过程中没有对大鼠体重等造成影响，且造模时间较短，待明确其机制后，有望成为便秘的新模型。

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