龙爪槐角与槐角对照药材中芦丁和槐角苷的比较研究

刘景东， 王志玲， 勾凌燕， 王 憬， 刘惠敏， 王秀卿

(第四军医大学白求恩军医学院，河北石家庄050081)

槐角Sophorae Fructus，冬季采摘自槐Sophorae L.的成熟果实，《神家本草经》列为上品，是我国传统的中药材，也是《中华人民共和国药典》历版收载品种［1］。槐角主产于我国北部，华南及西南地区亦产，以河南豫西山区品质最佳。槐树生长缓慢，木材经济价值低，农民从不把槐树作为药用经济树种，广大农村地区槐资源接近枯竭。目前有限的槐资源主要集中在城乡道路两旁。2010年元月后槐角价格节节攀升，从年初至8月价格上涨70%以上且供不应求［2］。龙爪槐Sophora japonica var.pendula Loud.是槐在自然界中受到雷击、动物的啃食、病虫伤害等外部因素刺激突然变异而形成的新品种［3］，北京已有几百年的种植历史。文献［4］对龙爪槐角与槐角对照药材中主要的黄酮苷元槲皮素、山柰酚与染料木素进行的比较研究，初步探索了龙爪槐角替代槐角使用的可行性。本实验参照王志玲等的方法［5］，考察了未水解的龙爪槐角主要黄酮苷和异黄酮苷成分，绘制了龙爪槐角与槐角对照药材在260nm HPLC色谱图，测定了龙爪槐角中的芦丁与槐角苷，进一步为龙爪槐角替代槐角使用提供理论依据，也为开发新的槐资源提供参考。

1 仪器与药品

高效液相色谱仪(美国 Waters，1525高压双泵系统，2487双波长紫外检测器，Breeze色谱数据工作站);AG135电子分析天平(d=0.01 mg/0.1 mg，瑞士);索氏提取器(天津玻璃仪器厂)。

龙爪槐角采自石家庄市不同地点(每处选10棵槐树，每树向阳面采摘一枝，去除枝叶后，混匀，常水洗净，80℃烘干备用。采摘日期:2008-12-15)。经本院药学教研室张书峰博士鉴定为龙爪槐的果实。芦丁、槐角苷对照品及槐角对照药材(中国药品生物制品检定所，批号:100080-200606、11695-200501、121214-0101);甲醇和乙腈为色谱纯级，高纯水由Millipore纯水器制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 -1%冰醋酸-乙腈(57 ∶38 ∶5，v/v);体积流量1.0 mL/min;检测波长260 nm;柱温为室温。

2.2 对照品溶液的制备 准确称取减压干燥至恒质量的芦丁和槐角苷对照品各10 mg，分别置于50 mL量瓶中，甲醇溶解后定容即为标准贮备液。取上述溶液，配成芦丁和槐角苷质量浓度均为2 μg/mL的混合溶液，作为对照品溶液。

2.3 样品溶液的制备 分别精密称取0.5 g干燥恒质量的龙爪槐角及槐角对照药材细粉，滤纸包成小包，置150 mL索氏提取器中，加甲醇90 mL，100℃水浴连续提取10 h，冷却后用甲醇定容至100 mL，0.45 μm滤膜过滤，作为样品溶液。

2.4 芦丁和槐角苷保留时间的确定 取芦丁和槐角苷对照品溶液，按2.1项条件，进样10 μL，进行色谱分析，计算芦丁与槐角苷的保留时间分别为12.540、14.881(n=3)。

2.5 方法学考察

2.5.1 回归方程的计算及线性关系考察 分别精密吸取贮备液适量，用甲醇配制成芦丁和槐角苷质量浓度分为0.08、0.1、0.125、0.25、0.50、1.0、1.5、2.0 μg/mL 的混合溶液，按2.1项下条件进样10 μL，每个质量浓度重复3次，记录色谱图。以峰面积(A)与质量浓度(C)进行线性回归，芦丁质量浓度在0.08 ～1.0 μg/mL 线性关系良好，A=144 ×102C+195，r=0.9996，槐角苷在 0.125 ～ 2.0 μg/mL 线性关系良好，A=500 ×102C+105，r=0.9999。

2.5.2 仪器精密度考察 取芦丁、槐角苷分别为0.5、1.0 μg/mL的混合溶液，按2.1项中色谱条件，在一天内不同时间分别测定5次，计算日内误差;连续5 d每天测定1次，计算日间误差，芦丁的日内和日间误差RSD分别为0.74%和1.23%，槐角苷的日内和日间误差 RSD分别为0.75%和1.65%，表明仪器精密度良好。

2.5.3 加样回收率试验 取已测定芦丁与槐角苷的龙爪槐角样品粉末(龙爪槐角-1)6份，每份0.5 g，精密称定，分别精密加入不同质量的芦丁与槐角苷对照品，按2.3项方法制备供试品溶液，按2.1项色谱条件进样测定，测定峰面积代入回归方程计算加样平均回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.6 龙爪槐角、槐角对照药材HPLC色谱图的绘制及芦丁、槐角苷的测定 精密量取样品溶液适量，用甲醇稀释，使其浓度在线性范围内，按2.1项中所述条件，进样量为10 μL作HPLC分析，每个样品重复3次，HPLC色谱图结果见图1和图2。将芦丁和槐角苷峰面积的平均值代入回归方程分别计算，结果见表2。

图1 龙爪槐角样品色谱图

图2 槐角标准药材样品色谱图

3 讨论

3.1 研究证实，槐角中的主要活性成分为黄酮与异黄酮类化合物［6］。黄酮类化合物的药理学作用涵盖抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、抗炎、抗疲劳和免疫调节等诸多方面［7-10］。槐角中的黄酮类化合物多达27种［11］，种类及含量多于银杏叶［12］，异黄酮的量远远高于大豆［13］。刘景东等以往的研究结果显示龙爪槐角中主要的黄酮苷元，槲皮素、染料木素和山柰酚分别为其干质量的 0.3%、3.04% 和 2.74%［4］。本实验结果显示龙爪槐角中主要的黄酮苷，芦丁与槐角苷的平均质量分数分别为0.45%和4.44%。两者含有量均高于银杏叶和大豆。槐角中丰富的黄酮类化合物种类以及多方面的药理学活性极大促进了槐资源的研究、开发和利用，使其具有广阔的应用前景。

表2 龙爪槐角与槐角对照药材样品中芦丁与槐角苷的测定结果

3.2 以往的研究结果［4］和本实验的研究结果均显示龙爪槐角与槐角对照药材总黄酮提取物水解前后的HPLC色谱图峰型基本一致，主要有效成分的量接近，提示两者具有极为相似的黄酮类化合物谱型，有一定的可替代性。此外，龙爪槐多种植于机关大院、大专院校、公园绿地，生态环境好，污染少，植物资源品质优于种植于道路两旁的国槐，且龙爪槐树冠低，极易采摘，资源极为丰富，具有开发利用的价值。本实验为龙爪槐角替代槐角应用提供了实验依据。龙爪槐角如能与槐角通用，将会极大丰富现有槐资源，提高槐角的质量，从根本上解决槐角资源紧张的问题。龙爪槐角能否完全替代槐角还需进一步药理学实验证实。

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