慈桃软坚胶囊对耐药肺癌大鼠的抑瘤作用和安全性观察

贾学科，胡立新，刘建国，闫 萍，王志刚

（1.保定恒兴医院 河北省中西医结合肿瘤治疗中心，河北 保定 071051；2河北大学附属医院，河北 保定 071000）

肺癌在我国是常见的恶性肿瘤，其发病率近年来有明显上升趋势。2000年我国肺癌的抽样调查显示，男性死亡率为40.1／10万，女性为13.8／10万。肺癌在我传统医学认为是积的范畴，《杂病源流犀烛》中说：“邪恶居胸中阻塞气道，气不得通，为痰为血，皆邪正相博，邪既胜，正不得制之，隧结而成块。”说明了在正气虚损的情况下邪气乘虚袭肺，郁结肺中，肺气宣降失司，积聚成痰，痰凝淤阻脉络，久而成块。对非小细胞肺癌的治疗目前多采用综合治疗，包括手术，放疗，化疗，生物免疫，中医中药等。本课题组在综合文献的基础上结合本院的临床实践，用扶助正气，化痰软坚，活血化淤等法综合组方做成“慈桃软坚胶囊”，旨在提高肿瘤患者的生存质量。现将其应用于大鼠肿瘤模型，探讨其抑瘤作用和用药的安全性。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种大鼠，雌雄各半，（200±2）g；由河北大学实验动物中心提供。SPF级大鼠，适应性喂养1周，饲养在恒温（24±1）℃、湿度0.50～0.70的饲养室内，标准饲料和自来水自行取食。

1.2 实验药品

多柔比星（大连美仑生物技术有限公司）；异长春花碱（NVB）（吉林一心制药股份有限公司）；慈桃软坚胶囊高剂量（1.2mg／10g）、慈桃软坚胶囊低剂量（0.6mg／10g），均为自制（冀药制字Z20051199）。

1.3 肿瘤大鼠模型的制备

采用支气管灌注MCA水悬液，直接诱导肺癌大鼠。抽取瘤种大鼠腹水2mL并以生理盐水1mL稀释至含细胞数1×106／mL，再以0.2mL皮下注射于无瘤大鼠腹腔内。并腹腔注射（ip）多柔比星0.5mg／kg，1次／d，连续8周。无菌抽取低剂量多柔比星诱导后的耐药大鼠S180腹水，无菌生理盐水稀释至含细胞数1×106／mL，每鼠0.2mL皮下注射于无瘤大鼠腹腔内。大鼠接种耐药S180细胞后24h，随机分为模型组（水）、慈桃软坚胶囊高剂量组（1.2mg／10g）、慈桃软坚胶囊低剂量组（0.6mg／10g）和异长春花碱（NVB）组（25mg／m2，），另选同等饲养条件下的正常大鼠作为对照组，每组10只，给予相应药物或溶剂。共给药1周。给药方式均为ig。

1.4 观测指标

给药后，观察动物的急性毒性实验及长期毒性实验结果，并检测试验药物对动物细胞凋亡率的影响：动物经处理后，每个样本收集约1×106细胞，PBS清洗2次，75%冰乙醇40℃固定24h，PI染色后，用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率 。其中对S180细胞凋亡率的计算公式为：细胞凋亡率（%）＝（实验组－模型组）÷模型组×100%。

1.5 统计学方法

用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料采用%表示，采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肿瘤模型的建立

一周后，按实体瘤大小检测，结果显示，模型组实体瘤为1.71cm，大于对照组的0cm，提示造模成功。

2.2 各组细胞凋亡率的比较

结果显示，与模型组比较，各组细胞凋亡率均升高，差异非常显著（P＜0.0001或＜0.01）；与低剂量组比较，高剂量组细胞凋亡率升高，异长春花碱（NVB）组细胞凋亡率降低，差异显著（P＜0.05），见表1。

表1 各组细胞凋亡率的比较

2.3 急性毒性实验及长期毒性实验

所有动物给予慈桃软坚胶囊（高、低剂量）治疗过程中及结束后均未出现与药物治疗有关的厌食、消化道不适、掉毛、神智异常、过敏、疼痛等副作用，大鼠生长良好，饮食正常，活动自如，尿便正常，皮毛光滑，无任何不良反应，7d后无死亡。处死后，经大体解剖检查，主要脏器无异常。药物对动物体重饮食无影响，与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）；且慈桃软坚胶囊高、低剂量组比较，无明显差异（P＞0.05）。异长春花碱（NVB）组有1只大鼠出现心脏毒副反应，2只掉毛明显。统计学统计结果显示，慈桃软坚胶囊（高、低剂量）与异长春花碱（NVB）组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

肿瘤的多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因之一。当前国内外对耐药机制的认识和逆转剂的研究主要来自体外细胞实验的研究成果，但研究对象是体外诱导的耐药细胞，并不能很好地反映活体肿瘤的情况［1］。本研究采用支气管灌注MCA诱导肺癌大鼠，并给予多柔比星建立在体耐药模型，实验方便，符合人体耐药产生机制，且该法灌注深，药物不易被排出，滞留时间常，药物集中，定位准确。造模一周后，按实体瘤大小检测，结果显示，模型组实体瘤为0.71cm，大于对照组的0cm，提示造模成功。

中医认为正气不足血淤痰凝致癌毒内生是肺癌的核心病机，扶助正气中药能提高机体免疫力提高生存时间，化痰软坚中药能抑制肿瘤生长，活血化淤中药能直接杀死细胞，抗肿瘤转移，对化疗增敏［2］。本课题组在综合文献的基础上结合本院的临床实践，用扶助正气、化痰软坚、活血化淤等法综合组方做成“慈桃软坚胶囊”，组方如下：海马、鳖甲、海藻、核桃仁、山慈菇、莪术、苡米等。其中鳖甲、海藻、山慈菇化痰软坚散结，核桃仁海马苡米补脾肾扶助正气，莪术活血化淤并使药物易达病所，诸药合奏扶正软坚散结之功。本研究观察了慈桃软坚胶囊体内给药对肿瘤细胞凋亡的促进作用，结果显示，与模型组比较，各组细胞凋亡率均升高，差异显著（P＜0.0001或＜0.01）；与低剂量组比较，高剂量组细胞凋亡率升高，异长春花碱（NVB）组细胞凋亡率降低，差异显著（P＜0.05）。提示慈桃软坚胶囊能促进细胞凋亡因子的表达，明显提高多药耐药S180细胞的凋亡率，且高剂量效果更明显。急性毒性实验及长期毒性实验显示，所有动物给予慈桃软坚胶囊（高、低剂量）治疗过程中及结束后均未出现与药物治疗有关的厌食、消化道不适、掉毛、神智异常、过敏、疼痛等副作用，大鼠生长良好，饮食正常，活动自如，尿便正常，皮毛光滑，无任何不良反应，7d后无死亡。处死后，经大体解剖检查，主要脏器无异常所见。药物对动物体重饮食无影响，与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）；且慈桃软坚胶囊高、低剂量组比较，无明显差异（P＞0.05）。异长春花碱（NVB）组有1只大鼠出现心脏毒副反应，2只掉毛明显。统计学统计结果显示，慈桃软坚胶囊（高、低剂量）与异长春花碱（NVB）组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，慈桃软坚胶囊对耐药肺癌大鼠的抑瘤作用明显，安全性好，值得推广。

［1］盛秀胜，王岚.五味子乙素对大鼠肿瘤模型多药耐药基因表达的影响［J］.浙江临床医学，2011，13（1）：4－6.

［2］李力，申明月，马蕾.康菜特注射液治疗老年晚期肿瘤患者安全性观察［J］.肿瘤防止杂志，2003，10（5）：539－540.