固肾合剂含量测定方法的验证

王淡娜，朱小帆，吴 烜，李顺浓

（1.广东众生药业股份有限公司 ，广东 东莞 523325；2.广东华南药业集团有限公司，广东 东莞 523325）

固肾合剂是遵循古代名医张景岳“人到中年当大修”指导思想研制的保健治疗药，由补肾良药左归丸、五子衍宗丸和龟龄集（龟龄——取龟长寿之意）精选淫羊藿、人参、鹿茸、海马、熟地黄、肉苁蓉、锁阳等组成。本品温肾助阳，固肾滋阴，适用于肾虚所致的精神不振，腰背酸痛，胫酸膝软，畏寒肢冷，夜尿增多。本研究根据药品生产质量管理的有关规定，参照药品标准分析方法验证指导原则［1］，对“中药中的伟哥”［2］——淫羊藿中淫羊藿苷含量的测定做了方法学验证。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UltiMate－3000液相色谱仪（德国戴安）；800离心机（常州国华电器有限公司）；AUW120D电子天平（日本岛津）。

1.2 试药

甲醇（色谱纯）、乙醇为分析纯；纯化水；淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所提供；固肾合剂由广东华南药业集团有限公司生产提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为C18（SMA，4.6mm×250mm，5μm）。流动相为：甲醇－水（65∶35），流速1mL／min，检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷计算不低于6000［3］。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品13.44mg，置20mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成672μg／mL的溶液；精密吸取0.5 mL、1mL、3mL、5m、7mL分别置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀，制 成 每 1mL 中 含 33.6μg、67.2μg、210.6μg、336μg、470.4μg和原有的672μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品的制备

取样品适量，摇匀，精密量取10mL，置25mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.2.3 阴性供试品溶液的制备

取处方中除去淫羊藿的药材制成的样品，按供试品溶液的制备即得。

2.3 色谱图的测绘及阴性干扰试验

分别精密量取上述对照品溶液（33.6μg／mL）、供试品溶液和阴性供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱见图1、图2、图3。在对照品色谱峰相应位置，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性供试品溶液在对照品溶液相同保留时间处无吸收峰，证明阴性供试品对本含量测定无影响。

图1 淫羊藿苷对照品色谱

图2 淫羊藿阴性色谱

图3 固肾合剂供试品色谱

2.4 线性关系考察

取精密吸取淫羊藿苷对照品溶液20μL，依次进样分析，计录色谱图，以进样浓样为自变量（X），淫羊藿苷峰面积为因变量（Y）进行最小二乘法线性回归方程。得回归方程：Y ＝300387.31X＋976.63，r＝0.9996。结果表明，淫羊藿苷浓度在33.6～672μg／mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度考察

用同一对照品溶液，连续进样6次测定，峰面积的RSD为0.2%。结果表明精密度良好。

2.6 重复性试验

按拟定的含量测定法对同一个样品测定5次，测定结果为：3.69mg／支 、3.73mg／支、3.76mg／支、3.73mg／支、3.68mg／支，RSD为0.89%。结果表明重现性良好。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液，分别于0、2、4、6h进样测定，峰面积的RSD为0.35%，表明供试品溶液在6h内测定结果稳定。

2.8 回收率试验

精密吸取3.72mg／支供试品10mL，置25mL量瓶中，精密加入淫羊藿苷对照品约4mg，加乙醇至刻度，振摇，离心，取上清液，依次进样分析计算，结果回收率的平均值为97.2%，RSD为1.6%。详见表1。

表1 回收试验结果

2.9 样品测定结果

取供试品照“2.2.2”制备，进样分析计算，结果分别为3.72mg／支、3.63mg／支、4.47mg／支、5.36mg／支和4.21mg／支。含量指标（不得少于1.0mg／支）符合规定。

3 讨论

固肾合剂按法定标准的处方工艺生产，按GMP要求控制质量，质量指标有外观性状、专属的薄层鉴别、装差异、微生物检查和含量测定。含量测定采用了现代科学仪器和高新技术液相色谱法，方法学考察淫羊藿苷浓度与峰面积呈线性关系，精密度、稳定性、回收率均符合要求，阴性试验无干扰，证明本法准确可靠，可作为含量测定控制产品质量。

淫羊藿苷是淫羊藿药材中主要的有效成分，具有雄性激素样作用［4］。据说嘉庆皇帝服了龟龄集，身体强健，连续生了九个儿子［5］。乾隆皇帝活至89岁，望之如60许人，精神矍铄，健康长寿的秘诀之一是常服龟龄集［6］。固肾合剂与龟龄集的组成、功效类同，如果您不了解固肾合剂，懂得龟龄集就明白固肾合剂。固肾合剂的处方含淫羊藿、鹿茸、海马、人参、巴戟天、五味子、肉苁蓉、补骨脂、锁阳等，都是传统经典的补益药，制成口服液服用方便，是肾虚及中老年的保健治疗良药。

［1］国家药典委员会.中国药典［M］.二部附录.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］王惟恒，胡顺强，强刚.家庭中医药1000问［M］.合肥：安徽科学技术出版社，2006：132.

［3］张虹，汤金城.208种中药功效及新用［M］.郑州：中原农民出版社，2009：350.

［4］常宇，李曼荻.中医是本故事书［M］.北京：化学工业出版社，2009：286.

［5］杨晓光，赵春媛.中医中药轶事珍闻［M］.北京：人民军医岀版社，2007：66.