中枢神经损伤疾病与烯醇化酶活性的相关性探讨

符晓苏 张志宇 孙 奕

目前已知烯醇化酶有 5 种形式组成 αα，ββ，γγ，αβ，αγ五种同功酶［1］。γγ型烯醇化酶特异地存在神经元细胞或神经内分泌细胞，称之为神经元特异性烯醇化酶(NSE)。对于NSE的生物学特性及其临床应用，尤其对神经元的肿瘤和肺小细胞癌的临床诊断价值，已积累了大量的文献资料［2］。本实验用全自动生化仪酶偶联速率法测定血清中的烯醇化酶活性。探讨中枢神经系统疾病与ENO活性的相关性。

1.材料与方法

1.1 材料 73例经临床确诊的脑中枢神经系统疾病住院病例中，脑出血15例，脑梗死25例，颅内肿瘤5例，中枢神经感染12例，癫痫16例。男性47例，女性26例，年龄(52～72)岁，平均年龄62±5.60岁。健康组：370名体检正常的健康者，其中男性197名，女性173名，年龄(56～75)岁，平均年龄65±8.90岁。标本来源于体检中心。

1.2 方法 用日本OLYMPUS5400全自动生化分析仪酶偶联速率法测定烯醇化酶活性。

1.2.1 缓冲液 40mmoL/L三乙醇胺，PH7.6。取三乙醇胺(含量≥78%，密度1.123～1.133，分子量149.19)6.8ml溶解于1000ml蒸馏水，pH校正至7.6。

1.2.2 底物缓冲液(R1) 称取氯化钾、硫酸镁、乙二胺四乙酸二钠、二磷酸腺苷、还原型辅酶溶于40mmol/L三乙醇胺缓冲液中，溶解后校正pH7.6，加丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶，置4℃冰箱保存。(R2)2-磷酸甘油酸溶液：2-磷酸甘油酸称量后蒸馏水溶解后，置4℃冰箱保存。(试剂R1和试剂R2成分组合配方专利申请号2010102426284)。

1.2.3 用真空管抽取空腹静脉血3ml，待血液凝固后离心分离血清待测，当天完成检测。

1.2.4 统计学方法 用SPSS 13.0软件进行统计学分析，数据以(±s)表示，比较结果用t检验。

2.结果

2.1 临床73例脑中枢神经系统疾病ENO活性结果15.52±5.27U/L，健康对照组ENO活性结果5.91±1.90U/L，见表1。

表1 脑挫伤及神经系统疾病与健康对照组ENO活性结果(±s)

表1 脑挫伤及神经系统疾病与健康对照组ENO活性结果(±s)

注：与健康对照组比*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

组 别 例数 ENO(U/L)健康对照 370 5.91±1.90脑出血 15 14.951 ±5.94＊＊脑梗死 25 15.63 ±5.88＊＊颅内肿瘤 5 16.13±5.60*中枢神经系统感染 12 11.98±2.75＊＊癫痫 16 16.54±4.03＊＊

2.2 如果以大于健康组2S(9.7U/L)为阳性，结果见表2。

表2 73例脑中枢神经系统疾病阳性结果(±s)

表2 73例脑中枢神经系统疾病阳性结果(±s)

组别 例数 阳性例数脑出血 15 11脑梗死 25 21颅内肿瘤 5 3中枢神经系统感染 12 8癫痫16 14

3.讨论

1965年科学家首次发现了一种大量存在脑组织中酸性可溶性蛋白质称为14-3-2蛋白［3］。后来人们发现该蛋白特异性地位于神经元中，并有烯醇化酶(enolase，ENO)活性。烯醇化酶广泛分布于人体各种组织细胞中是糖酵解过程中的关键酶，在正常情况下脑脊液和血清中只含有微量烯醇化酶，但在脑血管意外、脑创伤、脑肿瘤等疾病时NSE会增加，在此情况下血清ENO也会明显升高。当缺氧、缺血或中毒情况下细胞内的酶释放出来，并迅速进入细胞间隙，进而进入外周循环，血脑屏障受损程度越高释放入血的烯醇化酶越多，血清含量越高，这就为检测血中的烯醇化酶提供了依据［2，4，5］。烯醇化酶在糖代谢过程中催化2-磷酸甘油酸转变成2-磷酸烯醇式丙酮酸，在丙酮酸激酶的作用下生成丙酮酸，与还原型辅酶、乳酸脱氢酶作用生成乳酸。根据反应原理用酶偶联速率法检测烯醇化酶活性。目前国内外实验方法的研究报道很多，有用放免、电泳、酶标记及发光技术测定ENO的同工酶NSE［6～8］，本实验特点是测定血清中 ENO 活性，方法简便快速，特别在对脑神经是否有损伤具有过筛作用。

本研究结果显示73例脑中枢神经系统疾病患者血清中烯醇化酶活性与健康组比较显著增高，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。ENO活性明显升高其原因可能是在脑出血、脑梗死的情况下脑组织软化、坏死、周围组织水肿、神经元细胞膜完整性破坏，大量的烯醇化酶由神经细胞、血细胞内漏出，导致血清中ENO明显升高，其中16例患者症状轻ENO活性升高不明显。这与脑损伤后神经细胞、脑血管受损程度有关，结果显示疾病与烯醇化酶活性呈正相关。据报道［9，10］NSE与脑梗死、脑出血临床关系密切。我们实验检测的是烯醇化酶活性，NSE是烯醇化酶的同功酶，实验病例结果说明烯醇化酶活性与NSE的关系呈正相关。为神经系统疾病诊疗提供参考同样有一定意义。ENO活性与疾病的进展及愈后的关系我们将作进一步的实验探讨。

1 Fouge rousse F，Edom-vovand F，Me rkulova T，et al.The muaclespecific is an early marker of humam myogencsis［J］.muscle Res Cell，2001，22(6)：534-544.

2 Meric E，Ganduz A.Theprognostie in head trauma valueofneuronspecficenolase patients［J］.Fmergmed，2008，34：20.

3 王中原，陈光辉.神经元特异性烯醇化酶与脑损伤［J］.医学研究生学报，2000，13(4)：250-253.

4 Tracy MR，Hedges SB.Evolutionary history of the enolase genefamily［J］.Gene，2000，259(1-2)：129-38.

5 屈洪艳，彭翔，蔡润.颅脑损伤患者血清NSE的含量变化及临床意义［J］.国临床神经外科杂志，2007，12(12)：734-735.

6 季凤华，周辉，袁伯稳，等.神经元特异性烯醇化酶在小儿癫痫发作中的诊断价值［J］.江苏医学，2008，349(12)：1249-1250.

7 于雪凡，林世和，孙瑞红.神经元特异性烯醇化酶对Creutzfeldt-Jakob病的早期诊断价值［J］.中国现代医学杂志，2008，18(14)：2016-2018.

8 崔俐，林世和，赵节绪，等.神经元特异性烯醇化酶及C-100蛋白对Creutzfeldt-Jakob病诊断价值的研究［J］.临床神经病学杂志，2003，16(4)：193-195.

9 王义刚，邢永前，郑华，等.神经元特异性烯醇化酶与急性脑梗死［J］.临床神经病学杂志，2001，4(2)：74-75.

10 陈小江，邢永前，郑华，等.脑出血急性期血清神经元特异性烯醇化酶与神经功能缺损的研究［J］.现代康复杂志，2000，4(11)：1666-1337.