无抗生素微生物发酵饲料对仔猪免疫及抗氧化功能的影响

2011-07-12中国农业大学工学院王娟娟王顺喜

中国饲料 2011年16期

中国农业大学工学院王娟娟王顺喜＊

中国农业大学农业部饲料工业中心陆文清

北京晟亚育达生物科技有限公司胡起源

研究表明，饲料经微生物发酵后，营养价值可得到明显改善，pH明显降低，富含有益微生物和有机酸。本试验旨在应用固态发酵技术生产微生物发酵饲料，进行猪的无抗生素饲养，在前期试验基础上（陆文清和王翔，2008），进一步检测发酵饲料对断奶仔猪的免疫功能及抗氧化功能的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物及日粮试验动物选用 “杜长大”三元杂交仔猪，试验采用玉米-豆粕型基础日粮。基础日粮为对照组；基础日粮+金霉素为抗生素组；基础日粮+发酵饲料为发酵料组。参考NRC（1998）猪的营养需要，按照等能量等蛋白质的原则配制基础日粮，日粮组成及营养水平见表1。发酵饲料为北京晟亚育达生物科技有限公司研制，含有发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisae）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），预混料由北京德宝群兴科贸有限公司提供。

1.2 试验设计与饲养管理选取72头平均体重为（14.17±0.24）kg 断奶的健康“杜长大”三元杂交仔猪，按饲养试验要求随机分为3个处理，每个处理设3个重复（圈），每圈8头。按体重相近，公母各半，同一圈中每头仔猪尽可能来自不同母猪的原则，随机分成9圈。免疫消毒程序按猪场常规方法进行。

1.3 测定指标试验开始后，在第7天和第21天时，清晨前腔静脉采血10 mL。其中，2 mL注入EDTA-K2抗凝瓶中混匀，在日本产F-800型全自动血细胞分析仪进行白细胞数量和分类的测定，淋巴细胞转化率试验根据《全国临床检验操作规程》（1991）执行。余下的血液静置、离心（3000 r/min，10 min），分离血清，用于免疫球蛋白及抗氧化酶活性的测定。

表1 试验日粮组成及营养水平

血清免疫球蛋白（IgA、IgG和IgM）采用用免疫透射比浊法测定，用日本岛津CL-7200型全自动生化分析仪测定。

血清中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量，按照试剂盒说明书测定（南京建成生物工程研究所）。

1.4 统计分析数据的统计分析采用SPSS13.0 for Windows（SPSS Inc.，USA）软件进行方差分析，用Tukey法进行多重比较。P<0.05为差异显著程度。

2 结果与分析

2.1 断奶仔猪血液免疫指标结果见表2。

表2 发酵饲料对断奶仔猪免疫功能的影响

由表2可知，试验开始后的第21天与第7天相比，血液中白细胞数量和淋巴细胞转化率呈上升趋势。试验第7天白细胞数量组间无显著差异（P>0.05），但在试验期末白细胞数量组间差异显著（P<0.05），发酵料组显著高于对照组。单核细胞、嗜酸性粒细胞在试验第7天还未分化出来，试验期末二者在血液中的含量组间无显著差异，此外，在试验开始后的第7天和21天，白细胞分类的其他成分在各处理组也无显著差异（P>0.05）。在试验第7天，淋巴细胞转化率以发酵料组最高，显著高于其他两组（P<0.01）。试验期末淋巴细胞转化率以发酵料组最高，抗生素组次之，对照组最低，显著低于其他两组（P<0.001）。

由表2可见，随着试验期的增加，仔猪血清I-gA、IgG和IgM水平呈上升趋势。在试验期末，发酵料组仔猪血清IgA浓度显著高于其他两组（P<0.01）。在整个试验期内，三组仔猪血清IgG和IgM的含量无显著差异（P>0.05）。

2.2 断奶仔猪血液抗氧化指标结果见表3。

表3 发酵饲料对断奶仔猪抗氧化指标的影响

从表3可以看出，随着试验期的增加，发酵料组仔猪血液中 T-AOC、SOD、GSH-Px和 CAT水平均呈上升趋势，MDA的浓度呈下降趋势。在试验期第7天，发酵料组仔猪血液中SOD、GSH-Px和CAT的活性均显著高于对照组（P<0.01或P<0.001）。发酵料组除SOD的活性显著高于抗生素组外（P<0.01），两组间其他酶的活性均差异不显著（P>0.05）。在试验第7天，仔猪血液的MDA值在各组间差异不显著（P>0.05）。

在试验期末，发酵料组仔猪血液中T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT水平均显著高于对照组（P<0.05或P<0.01或P<0.001），MDA值显著低于对照组（P<0.05）。发酵料组除SOD的活性显著高于抗生素组外（P<0.01），两组间其他抗氧化指标均差异不显著（P>0.05）。

3 讨论

3.1 发酵饲料对断奶仔猪血液免疫指标的影响从试验结果发现，随着试验期的增加，发酵饲料组猪血液中白细胞数量高于对照组，淋巴细胞转化率也高于抗生素组和对照组。研究表明，日粮添加益生素（含酪酸菌、粪链球菌、嗜酸乳杆菌、乳链球菌、酵母菌和芽孢杆菌）可以增加血液中白细胞数量（武晶等，2009）。T淋巴细胞是体内主要的免疫活性细胞，在胸腺中发育成熟以后经血液、淋巴循环运行定居于外周免疫器官，发挥免疫细胞的功能，以植物凝集素作为促分裂因子来检测淋巴细胞的转化功能，其转化率的高低常作为衡量机体免疫水平的指标，T淋巴细胞转化率越高，意味着淋巴细胞在外来因子的刺激下增殖反应越强，机体的细胞免疫能力越强。有研究报道，断奶仔猪饲料中添加益生菌（酵母菌和乳酸菌），T淋巴细胞的转化率提高（朱元招等，2008；胡发军等，2003）。这表明，发酵饲料中益生菌有刺激免疫的作用，日粮添加发酵饲料能刺激仔猪的非特异性免疫反应，使得猪在疫病应激情况下生长性能良好。

本试验期第21天时，发酵料组仔猪血清IgA的浓度高于抗生素组和对照组。Erickson和Hubbard（2000）研究表明，乳酸杆菌能够提高试验动物模型IgA的产量。Perdigon等（1995）研究报道，小鼠口服嗜酸乳酸杆菌或干酪乳酸杆菌能够显著提高分泌IgA浆细胞的数量。由此看来，该发酵饲料可能因其富含发酵乳杆菌，从而促进仔猪机体的体液免疫反应，提高机体抵抗能力，抵抗各种病原微生物感染。

3.2 发酵饲料对断奶仔猪血液抗氧化指标的影响大量研究表明，益生菌具有抗氧化活性（张江巍和蕾郁生，2005），本试验结果显示，与抗生素添加组相比，日粮添加发酵饲料可显著提高仔猪血液SOD含量。由此可见，添加富含益生菌发酵饲料的日粮可增强仔猪机体清除自由基的能力，有助于提高仔猪的抗应激能力。