OCT4B1在乳腺癌组织中的表达及意义
2011-07-07宁夏自治区第五人民医院石嘴山中心医院石嘴山753000
宁夏自治区第五人民医院石嘴山中心医院(石嘴山 753000)王 飙
八聚体结合转录因子 4(Octamer-binding transcription factor 4,OCT4)是一具有高度保守DNA结合域转录因子,具有维持胚胎干细胞多能性和自我更新的特性,而且对于诱导多能干细胞(Multipotential stem cell,M PS)来讲,是一个特殊且独特的重构因子[1]。OCT4在人体组织的表达和功能也已经被研究。本次试验旨在探究 OCT4剪切变体在人类乳腺癌组织中的表达情况。
材料和方法
1 材 料 本实验病例包括 2009~ 2010年间在本院就诊患者 37例,取肿瘤组织和瘤周组织外科手术标本,共获得肿瘤组织 37例,瘤周组织 28例。获得的组织标本立刻浸入液氮中速冻并在-185℃环境中保存,对标本进行 RNA提取操作。同时,记录患者的临床分期以及淋巴结转移的情况。
2 提取 RNA和实时定量 PCR 总 RNA由组织匀浆中提取,使用 TaKaRa RNAiso Reagent(TaKaRa,Japan)试剂盒按照厂家说明书进行操作,提取液纯度使用紫外光分光光度计进行检测。RNasefree DNase(promega,USA)按照厂家说明书进行操作。逆转录过程使用 M-MLV试剂盒(promega,USA),操作过程按照厂家说明书进行。
对基因 OCT4A,OCT4B,OCT4B1和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPHD)分别设计引物(见表 1),该过程参照 GenBank相关数据以及 AlleleID4.0和 Gene Runner软件。
表1 引物序列表
实时定量 PCR使用 Taqman法,应用 Ex Tap试剂盒(TaKaRa,Japan),ABI 7500实时定量 PCR系统进行,过程严格遵循厂家说明书。
3 统计学方法 数据采用 SPSS 17.0软件进行分析,差异采用t检验,相关性分析采用秩检验,P<0.05表示有统计学意义。
结 果
1 OCT4的三种剪切变体与临床参数之间的关系 OCT4的三种剪切变体均在早期表现出较高的阳性率,Ⅰ、Ⅱ 期其中 OCT4B1 27例,OCT4A23例,OCT4B21例,但只有 OCT4B1的表达和肿瘤分期显著相关;OCT4B1和 OCT4A均在转移淋巴结中表现出较高的阳性率,而且两者的表达和淋巴结转移显著相关 ,见表 2。
表2 OCT4的三种剪切变体与临床参数之间的关系(n)
2 OCT4的三种剪切变体都是良好的肿瘤标记物我们的数据显示 OCT4B1在乳腺癌组织和癌旁正常组织中都有所表达。 OCT4B1的检出率为 94.59%(35/37),癌旁组织则为 32.14%(9/28);与对照组相比,OCT4B1在乳腺癌中的表达水平明显增高,并具有显著的统计学意义(P<0.05)。
同样地,我们检测的 OCT4A和 OCT4B也具有类似的结果。其中,OCT4A的检出率为 81.08%(30/37),在乳腺癌组织中的表达显著升高,与癌旁组织有显著差异(P<0.05)。对于 OCT4B,检出率为 78.38%(29/37),在乳腺癌组织中表达也显著增高,且具有统计学意义(P <0.05)。
3 在乳腺癌中,OCT4B1是更好的肿瘤标记物在乳腺癌中,OCT4B1有着较高的检出率,而且和肿瘤分期,有无淋巴结转移显著相关(见以上结果)。不仅如此,在 OCT4的三种剪切变体中,OCT4B1比其他两种剪切变体 OCT4A和 OCT4B与m RNA比率显著增高,而且具有统计学意义(P<0.05),而 OCT4A与 OCT4B之间则无明显差异(P> 0.05)。
讨 论
转录因子 OCT4是一个众所周知的干细胞标记物,对于干细胞的多向分化潜能,自我更新能力等都起着重要的作用。近期有研究称在一些肿瘤细胞系和肿瘤组织中发现了 OCT4的表达,但另一些早期的研究称在大体肿瘤组织和肿瘤细胞系中并未发现 OCT4的表达。可能由于 OCT4假基因在起作用,也有可能是早期的实验没有能够发现 OCT4的剪切变体2,3。
为了深入了解OCT4及其剪切变体在肿瘤中的表达情况,我们开展了本项研究调查。我们在手术中搜集了37例乳腺癌肿瘤组织和 28例瘤旁组织,并观察 OCT4A,OCT4B以及 OCT4B1在肿瘤组织中的表达情况。结果显示:其一,OCT4的三种剪切变体在肿瘤组织中都呈现明显的高表达,这表示 OCT4的三种剪切变体都可以作为比较良好的肿瘤标记物;其二,从临床参数来讲,我们可以看到,OCT4B1和肿瘤的分期以及淋巴转移相关,这表明 OCT4B1具有较高的敏感性;其三,在三种剪切变体中,OCT4B1有着最高的检出率,起 m RNA的表达在三者中也是最高的,这表明 OCT4B1有着较高的特异性。总而言之,OCT4的剪切产物 OCT4A,OCT4B,OCT4B1在乳腺癌的发生发展过程中表达增高,可以作为良好的肿瘤标记物使用,更值得一提的是,剪切变体OCT4B1有着良好的特异性与敏感性,有望成为乳腺癌肿瘤肝细胞更好的标记物。
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[2]Looijenga LH,Stoop H,de Leeuw HP,et al.POU5F1(OCT3/4)identifies cells with pluripotent potential in human germ cell tumors[J].Cancer Res,2003,63:2244-2250.
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