分光光度法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠含量

张胜东

湖北省郧县人民医院药剂科，湖北郧县 442500

盐酸多巴酚丁胺注射液为一种拟交感胺类强心药物，主要用于心力衰竭的治疗[1]。大部分的生产企业在处方中加入了抗氧剂亚硫酸氢钠（NaHSO3），金属离子络合剂依地酸二钠（EDTA-Na2）。但是亚硫酸氢钠可引起过敏反应，严重的可导致死亡[2]。对亚硫酸氢钠在注射剂中加入量进行检测和控制，是加强药品质量监管，提高盐酸多巴酚丁胺注射液用药安全的重要手段。笔者参考文献[3-5]，根据亚硫酸氢根在溶液中易分解出二氧化硫，二氧化硫的强氧化性具有漂白作用，可使酸性品红褪色，据此原理建立盐酸多巴酚丁胺注射液中亚硫酸氢钠的含量测定方法，并获得了满意效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器

分析天平（AG135型，梅斯特-托利多）；电子天平（JI300型，常熟双杰测试仪器厂）；电热恒温水浴锅（SY11N-NIB型，北京长源实验仪器厂）；紫外可见光分光光度计（753-WB型，上海光学仪器厂）。

1.2 材料

盐酸多巴酚丁胺（上海紫源制药有限公司，20081201）；亚硫酸氢钠（AR，天津开发区海光化学制药厂，20030602）；依地酸二钠（AR，天津大茂化学试剂厂，20050403）；酸性品红（AR，天津大茂化学试剂厂，20040301）。

1.3 方法

1.3.1 溶液的制备 酸性品红溶液：取酸性品红0.2 g，精密稳定，置500 mL容量瓶中，加稀硫酸2 mL，加水稀释至刻度（pH=2.2 ～ 2.3），1 mL 含酸性品 400 μg。

1.3.2 乙酸盐缓冲液 取乙酸盐40.8 g，加EDTA-Na20.8 g，置2000 mL容量瓶中，加冰乙酸16 mL溶解后，用冰乙酸调节pH=3.3～3.5，加水稀释至刻度。

1.3.3 亚硫酸氢钠对照液 取亚硫酸氢钠1.57 g，精密称定，置250 mL容量瓶中，用乙酸盐缓冲液，稀释至刻度，再精密量取2 mL，置250 mL容量瓶中，用乙酸盐缓冲液，稀释至刻度（含亚硫酸氢钠50 μg/mL）。

1.3.4 供试品溶液 取盐酸多巴酚丁胺2.5 g，EDTA-Na 20.1 g，亚硫酸氢钠0.25 g，亚硫酸氢钠精密称定（252.50 mg），置250 mL容量瓶中，加水200 mL，用0.1 moL盐酸调节pH值至3.5，再加水稀释至刻度即得（含亚硫酸氢钠1.01 mg/mL）[6]。

2 检测方法与结果

2.1 测定波长的选择

取亚硫酸氢钠溶液2.0 mL，加酸性品红溶液2.0 mL置25 mL比色管中，加乙酸缓冲液至25 mL，盖上管塞，摇匀，室温放置30 min后，在200～800 nm波长范围内扫描，结果亚硫酸氢钠与酸性品红反应生成的复物在545 nm的波长处有最大吸收峰，故选545 nm为测定波长。

2.2 干扰性试验

按照1%的盐酸多巴酚丁胺注射液的处方，除不加入亚硫氢钠外，制得盐酸多巴酚丁胺溶液，取该溶液2 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液5 mL，用乙酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀即得。另取注射用水2 mL，同法制得空白对照溶液。室温放置30 min后，在545 nm处测定吸光度。结果表明，盐酸多巴酚丁胺注射液中主药及其他辅料对本试验测定结果无干扰。

2.3 试验条件考察

①反应温度及时间的选择：根据预试验的结果，精密量取亚硫酸氢钠对照溶液3份，每份5 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液5 mL，用乙酸盐稀释至刻度，得到每毫升含亚硫酸氢钠2.5 μg的对照品测试溶液，分别将该溶液置于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃恒温水浴中，于 10、20、30、60、120 min，取样冷却至室温后测定吸光度，结果表明，在45℃水浴中保温20 min后，545 mm处的吸光度就达到稳定。因此选择在45℃水浴中保温20 min作为反应条件。②酸性品红加入量及pH值的选择：精密量取亚硫酸氢钠对照溶液5份，每份10 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液5 mL，分别用pH值为2.5、2.8、3.3、3.5、3.8的乙酸缓冲液稀释至刻度，在45℃水浴中保温20 min，冷却至室温，在545 mm处的吸光度。结果表明，当pH值在2.5～3.8时，测试溶液的吸光度均在0.3～0.7内，但在3.3～3.5时，该浓度的亚硫酸氢钠－酸性品红溶液的吸光度最接近中间值，考虑线性范围问题，将待测溶液的pH值范围定为3.3～3.5，酸性品红浓度以20 μg/mL为宜。

2.4 线性关系考察

精密量取亚硫酸氢钠对照溶液 0、1、2、5、10、15、20 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液5 mL，用乙酸盐缓冲溶液稀释至刻度，得到每毫升含亚硫酸氢钠 0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 μg的对照品测试溶液，将该溶液置45℃水浴中保温20 min，再冷却至室温，于545 nm波长处测定吸度。以吸光度倒数值为纵坐标（Y）、质量浓度（μg/mL）为横坐标绘制标准曲线。见图 1。回归方程：Y=0.10701X+1.80763；r=0.9996（n=5）。结果表明亚硫酸氢钠浓度在1.0～10.0 μg/mL范围内与吸光度倒数值线性关系良好。见表1。

图1 亚硫酸氢钠浓度与吸光度倒数值线性关系

表1 亚硫酸氢钠浓度-吸光度倒数值线性关系试验结果

2.5 稳定性试验

精密量取供试品溶液25 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，取稀释后供试品1 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液5 mL，用乙酸盐缓冲溶液稀释至刻度，得到每毫升含亚硫酸氢钠2.5 μg测试溶液，将该溶液置45℃水浴中保温 20 min，再冷却至室温，分别在 0、30、60、90、120 min 时，在545 nm处测定吸光度。结果表明：在120 min内溶液的吸光度是稳定的（RSD=0.1733%，n=5）。见表2。

表2 亚硫酸氢钠－酸性品红溶液吸光度稳定性试验检测结果

2.6 重现性试验

精密量取供试品溶液25 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，取稀释后供试品1 mL，置100 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液5 mL，用乙酸盐缓冲溶液稀释至刻度，得到每毫升含亚硫酸氢钠2.5 μg测试溶液，将该溶液置45 ℃水浴中保温20 min，再冷却至室温，分成6等份，在545 nm处测定每一份吸光度，结果表明，重现良好，其RSD为0.1738%（n=6）。见表3。

2.7 准确度试验

称取盐酸多巴酚丁胺9份，每份0.5 g，EDTA-Na29份，每份20 mg，再分别取亚硫酸氢钠20 mg 3份，25 mg 3份，30 mg 3份，将9份亚硫酸氢钠精密称定。先将EDTA-Na2置500 mL容量瓶中，加水400 mL，使溶，再依次加入亚硫酸氢钠，使溶解并摇匀，盐酸多巴酚丁胺使溶解并摇匀，用0.1 mol盐酸调节pH值至3.5，加水稀释至刻度，摇匀，共制得9份亚硫酸氢钠不同含量梯度的盐酸多巴酚丁胺溶液，再每份取5 mL，置100 mL容量瓶中，每份加入酸性品红溶液5 mL，用乙酸盐缓冲溶液稀释至刻度，将该溶液置45℃水浴中保温20 min，再冷却至室温，在545 nm处各测定3次吸光度，并根据线性方程（Y=0.10701X+1.80763）计算亚硫酸氢钠的含量，平均回收率：99.49%；RSD=1.3305%（n=9）。见表4。结果表明该方法准确度符合要求。

表3 亚硫酸氢钠-酸性品红溶液吸光度重现性试验测定数据

表4 亚硫酸氢钠含量测定回收率试验结果

2.8 样品测定

精密量取供试品溶液2 mL共3份，分别置500 mL容量瓶中，加入酸性品红溶液25 mL，用乙酸盐缓冲溶液稀释至刻度，得到每毫升含亚硫酸氢钠4.0 μg测试溶液，将该溶液置45℃水浴中保温20 min，再冷却至室温，在545 nm处测定吸光度，代入线性方程Y=0.10701X+1.80763，计算含量，平均值为98.84%。见表5。

表5 供试品溶液亚硫酸氢钠含量测定结果

3 讨论

分光光度法简便易行，不受条件限制，且准确度和灵敏度较高，可用于对盐酸多巴酚胺注射液中亚硫酸酸氢钠的含量控制，但是该方法的待测溶液的pH值对吸光度测定值有较大的影响，反应温度、检测时室温和光线对吸光度的测定结果也有一定的影响，所以，建立似合曲线的对照品测试溶液和供试品测试溶液的稀释，应用pH值相同的乙酸盐缓冲液稀释，反应温度、时间、检测时室内条件（如室温、光线强度）均应一致；另外亚酸氢钠与酸性品红在恒温条件反应时，容器应密闭，不宜强烈振摇；测定吸光度时，应保持检测室内的温度和光线相对稳定（室内光线较暗为宜）。

[1] 国家药典委员会.临床用药须知[M].北京：化学工业出版社，2004：234.

[2] 敬松.注射剂附加剂潜在的不良反应[N].中国医药报，2001-5-29（7版）.

[3] 吴小曼，纪宁.分光光度法测定复方氨基酸注射液（18AA-1）中焦亚硫酸钠的含量 [J].中国药品标准，2007，8（5）：38-40.

[4] 姚克荣，徐连连.影响复方氨基酸注射液中焦亚硫酸钠含量测定的因素[J].中国生化药物杂志，1997，18（3）：132-134.

[5] 国家药典委员会.盐酸多巴酚丁胺注射液[M].中华人民共和国药典（二部）.北京：化学工业出版社，2005：501.