RPHPLC法测定吲哚美辛贴片中吲哚美辛的含量*

张振波，周健鹏

(1.天津市天和医院，天津 300050； 2.天津市药品检验所，天津 300070)

吲哚美辛又名消炎痛，为非甾体抗炎药，是最强的COX抑制剂之一，有突出的消炎作用。吲哚美辛贴片在《中国药典》2005版中有收载，但含量测定采用的是紫外-可见分光光度法，本制剂处方中的一些辅料及降解杂质在该检测波长下可能有紫外吸收，不甚合理；国内外关于吲哚美辛贴片含量测定的报道较少；本文参考国外多国药典，建立HPLC法测定吲哚美辛贴片中吲哚美辛的含量，方法简便、易行、准确度高。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪(DAD检测器)； METTLER AE 240天平。甲醇为色谱纯，水为去离子水，乙醇、磷酸为分析纯。吲哚美辛贴片(35 mg/片，14 cm×10 cm)和吲哚美辛对照品(日本A厂家提供，对照品及品质报告书经中国药品生物制品检定所复核)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，以甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)为流动相，检测波长为228 nm，进样量10 μl。理论板数按吲哚美辛峰计算应不低于3 000，吲哚美辛峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液 精密称取吲哚美辛对照品适量，加50%乙醇溶液溶解并稀释制成每1 ml中含0.1 mg的溶液作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液 取本品10片，小心除去覆盖的塑料片，将粘贴面对折，用洁净的剪刀剪成小块，精密称取适量(约相当于吲哚美辛10 mg)，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇溶液100 ml，加塞，超声1 h(超声过程中保持水浴温度不超过32 ℃)，取出，强烈振摇60 s，放置，再振摇60 s，取部分溶液，离心5 min(1 000 r/min)，取上清液作为供试品溶液。取对照品和供试品溶液各10 μl，依“2.1”项下色谱条件进样，色谱图，见图1。

2.3线性关系考察 精密称取吲哚美辛对照品适量，加50%乙醇溶液溶解并稀释制成0.5 mg/ml的溶液，作为对照品储备液。精取适量，用50%乙醇溶液稀释制成一系列浓度的线性溶液，分别精密量取10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图；以浓度为横坐标(X)，以相对应的峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归。吲哚美辛线性方程为Y=27.312X-0.032(n=6，r=1.000)。实验结果表明主成分吲哚美辛在10～200 μg/ml范围内线性关系良好。

2.4精密度与重复性试验

2.4.1系统精密度 取对照品溶液10 μl重复进样5次，以峰面积来考察精密度，计算RSD为0.1%。

2.4.2方法精密度 取供试品6份制备供试品溶液，依“2.1”项下色谱条件进样，结果测得含量分别为98.1%、97.65%、98.83%、99.25%、98.13%和98.50%，RSD为0.6%。

2.5稳定性试验 取对照品溶液及供试品溶液分别在室温放置不同时间(0、3、8、14和24 h)后依法测定，按吲哚美辛峰面积计算RSD分别为0.05%和1.23%。结果表明, 吲哚美辛溶液在24 h内基本稳定。

2.6加样回收率试验 取吲哚美辛对照品适量，加50%乙醇溶解并稀释制成每1 ml中含1.0 mg的溶液，作为对照品储备溶液。精密称取供试品适量(约相当于主药吲哚美辛2 mg)9份，置50 ml量瓶中，分别精密加入对照品储备液4、5和6 ml各3份，浓度分别为0.12、0.14和0.16 mg/ml，按上述方法分别测定，以测得药量与加入药量之比计算回收率。经试验，本方法平均回收率为99.6%(n=9)，RSD为1.1%。见表1。

2.7含量测定 分别取3批样品，制备供试品溶液，精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，按标示量的百分含量计算，3批样品中吲哚美辛含量分别为98.4%、97.1%和98.2%。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.8主峰纯度测定 分别取吲哚美辛对照品和供试品进行主峰纯度分析，结果显示，对照品纯度因子为999.994，供试品纯度因子为999.995。

3 讨论

3.1检测波长选择 称取吲哚美辛对照品适量，加50%乙醇溶液溶解并稀释制成每1 ml中含0.1 mg的溶液，在200～400 nm波长下扫紫外图谱。吲哚美辛在206、228和318 nm波长下有最大吸收。考虑流动相及溶剂中甲醇、乙醇的末端吸收效应，各杂质在318 nm波长下无紫外吸收，故选择检测波长为228 nm。

3.2流动相的选择 参考《中国药典》2005年版二部、BP 2008、EP 5.0、USP 31、JP 15收载的吲哚美辛及其制剂，分别考察甲醇-水-磷酸(700∶300∶1)、甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)、甲醇-水(400∶600∶1)、乙腈-水(1∶1，其中含0.01 mol/L磷酸二氢钠和0.01 mol/L磷酸氢二钠)作为流动相。在甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)系统下，供试液主峰、辅料峰、各降解杂质峰之间的分离度良好，分析时间恰当。故以甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)为流动相，溶剂为50%乙醇。

3.3辅料的研究 由于提供样品的国外厂家未提供空白贴片，因此未能提供空白辅料的色谱图，但要求厂方提供了处方，对处方中有紫外吸收的辅料分别进行了定位，供试品色谱图中的色谱峰依次为克罗米通、麝香草酚蓝、吲哚美辛，各成分之间分离度符合要求。

该项研究可为我国药品检验提供快速、准确、灵敏的测定方法，研究结果可以为将来《中国药典》提高贴剂质量标准提供详实的数据，完善贴剂质量控制方法，在确保药品安全性方面具有重要的社会意义。