细菌内毒法检查奥拉西坦注射液的探讨*

张雪梅，谢冬梅

(1.亳州职业技术学院药学系,毫州 236800； 2.安徽蚌埠医学院第一附属医院,蚌埠 233004)

奥拉西坦注射液的主要成分为奥拉西坦，辅料为磷酸二氢钠和乙二胺四乙酸二钠盐。本品为几乎无色或微黄色澄明液体，用于脑损伤及其引起的神经功能缺失，记忆与智能障碍的治疗，据文献报道，不良反应少见，故临床应用广泛，但迄今尚未见用细菌内毒素检查法检查奥拉西坦注射液的报道。又因为细菌内毒素法具有操作简单，检测周期短，灵敏度高，结果准确等优点，因此可以对注射液进行质量控制[1-3]。本文参照2010年版《中国药典》(二部)细菌内毒素检查法及其指导原则，对其细菌内毒素检查方法进行探讨。

1 仪器与试药

电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂，型号HH.214)，旋涡混合器(上海医科大学仪器厂，型号XW-80A)，其它除无热原吸头外，均经250 ℃干烤2 h。奥拉西坦注射液(广东世信药业有限公司，规格5 ml∶1.0 g，批号0709006、0802002、0805001)。鲎试剂(TAL)(湛江安度斯生物有限公司，规格0.1 ml/支，灵敏度λ=0.25 Eu/ml，批号0704162；湛江海洋生物制品厂，规格0.1 ml/支，灵敏度λ=0.25 Eu/ml批号0801052)。细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所，规格120 Eu/支,批号2005-3)。细菌内毒素检查用水(BET水)(湛江安度斯生物有限公司，规格5 ml/支，批号0703130)。

2 方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度复核 依据2010年版《中国药典》规定方法，将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，于旋涡混合器上混合匀15 min分别稀释为2.0、1.0、0.5和0.25 λ 4个浓度等级的内毒素标准溶液,每稀释一步均在旋涡混合器上混合30 s。每一浓度平行作4支，每管加入待复合的鲎试剂0.1 ml和内毒素标准溶液0.1 ml，用细菌内毒素检查用水作2支阴性对照管，共18管，轻轻摇匀后，封闭管口，垂直放入(37±1) ℃恒温水浴箱中，保温(60±2) min，结果见表1。鲎试剂灵敏度复核结果显示0.5 λ<λc<2 λ,表明鲎试剂灵敏度符合规定，可用于试验。

2.2细菌内毒素限值(L)的确定 按照《中国药典》2010年版(二部)规定的方法，根据公式致热阈值L=K/M，其中K为按规定的给药途径人用每kg体重每h最大可接受的内毒素剂量注射剂K=5 Eu/kg·h-1，M为人用每kg体重每h的最大药物剂量，人均体重按60 kg计，注射时间按1 h计，每h人体最多可以接受的奥拉西坦注射量为M=20 ml/60 kg·h-1,L=K/M=5.0 EU/kg·h-1÷(20 ml/ml÷60 kg)=15 EU/ml。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果

2.3干扰试验稀释倍数MVD计算[4]鲎试剂的灵敏度(λ)范围一般在0.33～1.0 Eu/ml之间，以鲎试剂灵敏度为0.25 Eu/ml为基准，MVD=CL/λ=1.0 ml×15 EU/ml/0.25=60倍

2.4样品干扰试验 选择60倍的样品稀释液为试验浓度，用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0、1.0、0.5和 0.25 λ的内毒素系列溶液,用60倍样品稀释液将同一支细菌内毒素工作标准品稀释成2.0 、1.0、0.5和0.25 λ的供试品系列溶液。让灵敏度为0.25 Eu/ml的两个不同厂家的TAL与上述两个系列溶液反应，结果见表2。表明其Es值均在0.5～2.0 λ之间，且Et值在0.5～2.0 Es范围内。说明样品60倍稀释液对细菌内毒素检查无干扰作用，因此本品的检查可用细菌内毒素法代替家兔法。

表2 供试品干扰试验结果

2.5样品检查试验 取3批供试品，按2010年版《中国药典》(二部)要求，考察其内毒素限值，结果见表3。

表3 样品细菌内毒素检测结果

3 讨论

奥拉西坦注射液的60倍稀释液，用λ=0.25 Eu/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，是排除干扰因素最简单的方法。不同厂家生产的TAL在生产工艺、质量参数等各方面有一定的差异，这影响到TAL的抗干扰能力，故本实验采用不同厂家的鲎试剂对3个批号的样品进行干扰实验。结果分别使用不同厂家的TAL，3批样品稀释60倍均不干扰细菌内毒素检查。

1 石庆平，丁 峰，郭 辉.复方维生素注射液(4)细菌内毒素检查法的建立.安徽医药，2006，10(1)：64

2 刘毅萍，夏爱光.注射用乙酰谷酰胺的细菌内毒素检查法.安徽医药，2007，11(1)：89

3 赵云燕. 鲎试剂用于复方醋酸钠注射液细菌内毒互检测的探讨.安徽医药，2001，5(3)：224

4 黄清泉，许全明，夏振民，等.泰素帝细菌内毒素检查法的建立.中国药房，1996，7(2)：85