孤独症儿童血浆多不饱和脂肪酸水平研究

庞伟，康倩倩，郭岚敏,，王景涛，姜志梅,

孤独症(autism)是一种严重的广泛发育障碍性疾病，主要表现为社会交往能力缺陷、言语交流障碍、刻板重复行为方式及兴趣狭窄。多起病于出生30个月以内，男女患者比例为4～6:1。近几年，随着对精神疾病与脂肪酸之间关系的研究不断深入，多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)与精神分裂症、抑郁症和自杀、双向抑郁障碍等精神疾病之间存在关联的研究相继被报道，PUFAs与孤独症的研究成为一个新的热点[1-3]。PUFAs是人体细胞的重要组成部分，参与构成细胞膜磷脂，对维持记忆、注意、思维、情感等大脑功能有重要作用[4]。本文探讨孤独症儿童血浆中PUFAs水平及其与孤独症儿童临床症状之间的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象 从2009年4月～2009年12月就诊于佳木斯大学附属第三医院发育与行为儿科的儿童孤独症患者中选取30名作为孤独症组，其中男性20例，女性10例；年龄3～12岁，平均5.4岁；身高85～140 cm，平均(134.2±59.12)cm；体重12～49 kg，平均(30.8±18.64)kg。孤独症诊断标准符合美国《精神障碍诊断和统计手册》第四版(DSM-IV)，且孤独症儿童行为检查量表(Autism Behavior Checklist,ABC)评分均大于67分。排除标准：①外脆性X综合征、精神发育迟滞、选择性缄默症、强迫症、特定感受性语言障碍、Rett综合征等广泛性发育障碍疾病；②已确诊有染色体异常或其他与孤独症有关的神经疾病；③有躯体性疾病、服用兴奋剂及其他治疗孤独症药物史；④近半年内有服用保健品史。

选取本市某幼儿园和某小学的健康儿童20名作正常对照组，其中男性13例，女性7例；年龄3～11岁，平均7.2岁；身高85～140 cm，平均(141.8±50.24)cm；体重13～54 kg，平均(31.2±21.32)kg。排除标准：严重躯体性疾病、神经系统疾病及发育延迟。

两组儿童在性别、年龄、身高、体重方面无显著性差异(P＞0.05)。

所有研究对象的父母均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床评估 使用一般资料调查表对研究对象进行信息采集，同时应用Conner儿童行为量表、刻板重复行为量表(the Repetitive Behavior Scale-Revised,RBS-R)对孤独症组临床特征进行评定。

1.2.2 脂肪酸分析 两组儿童均于上午8:00～8:30空腹抽取肘静脉血3 ml，装于肝素抗凝管，立即以3000 r/min的速度离心15 min，吸取血浆于Ep管内，置于-80°冰箱冻存，采用高效液相色谱系统(Waters)进行脂肪酸分析。采用与标准品保留时间对照的方法定性，采用面积归一法求各色谱峰面积，计算其相对含量。

1.3 统计学分析 所有数据均使用SPSS 16.0 for Windows统计软件分析，计量资料采用两样本t检验，计数资料χ2检验，数据间相关性采用Pearson相关分析，显著性水平α=0.05。

2 结果

2.1 儿童Conner儿童行为量表(父母问卷)评分比较孤独症组在品行问题、学习问题、心身障碍、冲动-多动、焦虑、多动指数因子方面得分均高于正常对照组(P＜0.05)。见表1。

2.2 两组儿童RBS-R量表因子得分比较 孤独症组在刻板行为、自伤行为、强迫行为、仪式行为、固定行为、限制性行为以及总项目及总评分方面得分均高于正常对照组(P＜0.01)。见表2。

表1 两组Conner儿童行为量表因子得分比较

2.3 儿童血浆PUFAs含量对比 孤独症组儿童α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA 18:3,n-3)、二十二碳六烯酸(docosahexenoic acid,DHA,22:6,n-3)和总n-3 PUFAs较正常对照组儿童下降(P＜0.05)，其中以DHA下降尤为明显(P＜0.01)。而亚油酸(Linoleic Acid,LA,18:2,n-6)、花生四烯酸(Arachidonic Acid,AA,20:4,n-6)以及总n-6 PUFAs水平在两组间无显著性差异(P＞0.05)。见表3。

表2 孤独症组与正常对照组RBS-R量表因子得分比较

表3 孤独症组与正常对照组血浆PUFAs水平比较(µmol/L)

2.4 孤独症组Conner儿童行为量表(父母问卷)评分结果及其与血浆PUFAs水平的相关分析 将孤独症组Conner儿童行为量表问卷6个因子与孤独症组血浆PUFAs水平进行Pearson相关分析。结果发现冲动-多动因子得分与DHA和总n-3 PUFAs呈负相关(P＜0.05)；多动指数因子得分与DHA呈负相关(P＜0.01)；而品行问题因子和身心障碍因子得分与血浆PUFAs水平不具相关性。见表4。

表4 孤独症组Conner儿童行为量表得分结果与血浆PUFAs水平的相关分析

2.5 孤独症组RBS-R量表评分及其与血浆PUFAs水平的相关分析 将孤独症组RBS-R量表得分的6个因子(刻板行为、自伤行为、强迫行为、仪式行为、固定行为、限制性行为)与孤独症组血浆PUFAs水平进行Pearson相关分析。结果发现，刻板行为因子和自伤行为因子得分分别与ALA、DHA呈负相关(P＜0.01)；强迫行为因子得分与ALA呈负相关(P＜0.05)，但与DHA无统计学意义(P＞0.05)；同时6个因子与血浆PUFAs水平均没有相关性(P＞0.05)。见表5。

表5 孤独症组RBS-R评分与血浆PUFAs水平的相关分析

3 讨论

PUFAs是指含有两个或两个以上双键且碳链长度为18～22个碳原子的直链脂肪酸。按照从甲基端开始第1个双键的位置不同，可分为n-3和n-6 PUFAs，距甲基端的双键在第3个碳原子上的称为n-3 PUFAs，在第6个碳原子上的，则称为n-6 PUFAs。n-3 PUFAs的母体是ALA，它在Δ5、Δ6去饱和酶的作用下转化成二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA,C20:5)和DHA。n-6 PUFAs的母体是LA，由它可衍生出AA和GLA[5]。不饱和脂肪酸是神经组织中膜磷脂的重要组成成分，其中以AA和DHA最为重要。

许多研究表明，多不饱和脂肪酸在精神性疾病发病过程中起到重要作用，PUFAs对孤独症的治疗作用也引起了研究者的注意[6]。Decsi等研究发现，从出生到成年的孤独症组脂肪酸水平同正常组相比总n-3 PUFAs降低50%[7]。Sliwinski等研究发现，孤独症儿童血浆磷脂脂肪酸的含量同正常儿童相比，DHA和总n-3 PUFAs均减少，而n-6 PUFAs未见明显变化[8]。Bell研究报道，孤独症儿童患者中红细胞膜DHA和总n-3 PUFAs水平与正常组相比明显下降[9]。Bu等报道显示，孤独症儿童与正常儿童相比EPA和二十二碳-13-烯酸芥酸含量降低[10]。本研究结果显示，孤独症儿童与正常对照组相比ALA、DHA和总n-3 PUFAs，水平下降，孤独症组儿童在学习问题、冲动-多动，多动系数、焦虑方面与各脂肪酸水平成负相关，与以往报道结果相符。

PUFAs是磷脂和胆固醇酯的重要组成部份，在维持神经系统正常功能中发挥重要作用。正常情况下，PUFAs主要存在于神经元细胞膜上，尤其是突触和树突膜，保持细胞膜流动性[11]，如果这些脂肪酸供给不足，便会由其他种类脂肪酸代替，细胞膜的流动性降低，突触和树突的功能及细胞膜上的受体功能受损[12]，从而对脑功能产生影响。另外，Calderon等研究发现DHA能促进海马神经元存活，显著增加神经元突起数量和长度[13]；神经元突起的数量和长度增加，可使突触的密度增大，形成更多神经元网络，这对神经系统发育的重要表现，是学习记忆等高级脑机能的基础。PUFAs供给不足则可能影响突触的发育，这可能是孤独症发病的原因之一。

Meiri等从另一方面研究PUFAs对孤独症的影响，他们在孤独症儿童食物中添加n-3 PUFAs，经过12周的治疗，发现9例患儿中，有8例儿童孤独症疗效评估量表得分增加33%以上，且未出现任何副作用[14]。这表明补充PUFAs可以作为孤独症治疗的辅助手段，具有一定的应用前景。

[1]Sethom MM,Fares S,Bouaziz N,et al.Polyunsaturated fatty acids deficits are associated with psychotic state and negative symptoms in patients with schizophrenia[J].Prostaglandins Leukot rienes Essent Fatty Acids,2010.83(3):131-136.

[2]Assies J,Mocking RJ,Pouwer F.Maternal depression and child development after prenatal DHA supplementation[J].JAMA,2011.305(4):360;author reply 360-361.

[3]Jans LA,Giltay EJ,van der Does AJ.The efficacy of n-3 fatty acids DHA and EPA(fish oil)for perinatal depression[J].Br J Nutr,2010.104(11):1577-1585.

[4]Freeman MP,Rapaport MH.Omega-3 fatty acids and depression:from cellular mechanisms to clinical care[J].J Clin Psychiatry,2011,72(2):258-259.

[5]Bousquet M,Gue K,Emond V,et al.Transgenic conversion of omega-6 into omega-3 fatty acids in a mouse model of Parkinson's disease[J].J Lipid Res,2011,52(2):263-271.

[6]Meiri G,Bichovsky Y,Belmaker RH.Omega 3 fatty acid treatment in autism[J].J Child Adolesc Psychopharmacol,2009,19(4):449-451.

[7]Decsi T,Koletzko B.Fatty acid composition of plasma lipid classes in healthy subjects from birth to young adulthood[J].Eur J Pediatr,1994,1153(7):520-525.

[8]Sliwinski S,Croonenberghs J,Christophe A,et al.Polyunsaturated fatty acids:do they have a role in the pathophysiology of autism[J].Neuro Endocrinol Lett,2006,27(4):465-471.

[9]Bell J,MacKinlay E,Dick J,et al.Essential fatty acids and phospholipase A2 in autistic spectrum disorders[J].Prostaglandins Leukot rienes Essent Fatty Acids,2004,71(4):201-204.

[10]Bu B,Ashwood P,Harvey D,et al.Fatty acid compositions of red blood cell phospholipids in children with autism[J].ProstaglandinsLeukotrienesEssen Fatty Acids,2006,74(4):215-221.

[11]Hirashima F,Parow AM,Stoll AL,et al.Omega-3 fatty acid treatment and T2 whole brain relaxation times in bipolar disorder[J].Am J Psychiatry,2004,161:1922-1924.

[12]Kodas E,Vancassel S,Lejeune B,et al.Reversibility of n-3 fatty acid deficiency-induced changes in dopaminergic neurotransmission in rats:critical role of developmental stage[J].J Lipid Res,2002,43(8):1209-1219.

[13]Calderon F,Kim HY.Role of RXR in neurite outgrowth induced by docosahexaenoic acid[J].Prostaglandins Leukot rienes Essent Fatty Acids,2007,77(5-6):227-232.

[14]Meiri G,Bichovsky Y,Belmaker RH.Omega 3 fatty acid treatment in autism[J].J Child Adolesc Psychopharmacol,2009,19(4):449-451.