多西紫杉醇、伊立替康对人胰腺癌细胞株Capan-2的抗肿瘤作用

曲更宝，程 石，宋茂民

(首都医科大学附属北京天坛医院，北京100050)

多西紫杉醇(DTX)是近年研制的杉烷类抗癌药，其单药化疗治疗局部进展期胰腺癌的客观肿瘤反应率为5% ～15%［1］。伊立替康(CPT-11)为特异性拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)抑制剂，研究证实其对多种肿瘤细胞株的抑制率较高，对很多实体肿瘤有肯定疗效［2］。为探讨DTX、CPT-11单用及联用对人胰腺癌细胞株Capan-2的体外抗肿瘤作用，2008～2009年，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 材料与方法

1．1 药物及细胞株 DTX(齐鲁制药公司)，CPT-1(江苏恒瑞医药公司)。人胰腺癌细胞株Capan-2由北京天坛医院神经外科研究所提供。细胞株培养在10%小牛血清(杭州四季青公司)、RPMI-1640(美国GIBCO)培养液中，内含0．1%青霉素、链霉素，置于37℃、5%CO2孵育箱内备用。

1．2 方法

1．2．1 MTT法测定 DTX、CPT-1的中效浓度(IC50)将Capan-2细胞制成5×103/ml的细胞悬液，每孔200 μl，加入96孔培养板内。在96孔中分别加入 10－4、10－3、10－2、10－1、1、10、100、1 000 mg/ml浓度的DTX和CPT-1，每孔加20 μl，每个浓度设3个复孔，测量3次取平均值，采用 MTT法、BIO-RAD 550自动酶标读数仪测定DTX、CPT-1的IC50。作用48 h时测得 DTX 的 IC50为 2．27 mg/ml，CPT-1 的IC50为 23．48 mg/ml，DTX、CPT-1 联用的 IC50为12．9 mg/ml。

1．2．2 两药单用及联用时的浓度比例 单用时，DTX 分别设 0．227、2．270、22．700 mg/ml 3 个浓度，CPT-1 分别设23．50、2．35、235 mg/ml 3 个浓度，均作用48 h;每个浓度设3个平行孔，重复3次取平均值，置于37℃、5%CO2孵育箱中培养;用MTT法检测两药单用时的肿瘤抑制情况。联用时，将DTX的3个浓度分别与CPT-1的3个浓度联合，其余方法同两药单用时。

1．2．3 两药联用时的给药时间 给药时间设先用DTX、24 h后用 CPT-1 24 h，先用 CPT-1、24 h 后用DTX 24 h两种，每种设3个平行孔，重复3次取平均值，置于37℃、5%CO2孵育箱中培养。用MTT法检测两药不同时间给药的肿瘤抑制情况。

1．2．4 结果判定 应用联合指数(CI)法测定两药联用时对人胰腺癌细胞株的抑制作用，CI＜1为有协同作用，CI＞1为有拮抗作用，CI=1为有相加作用［3］。

1．3 统计学方法 采用SPSS11．5统计软件，数据以±s表示，组间比较用独立样本t检验。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 两药单用及联用时不同浓度的CI比较 两药按1∶1配比联用时的药物作用效应［即抑制率(fa)50%时的药物浓度］为1．71 mg/ml。DTX单用浓度为0．227、2．270、22．700 mg/ml时，其 CI分别为0．346、0．440、0．629;CPT-1 浓度为 23．50、2．35、235．00 mg/ml时，其 CI 分别为 0．268、0．573、0．641;DTX、CPT-1 联用浓度为 1．29、12．90、129．00 mg/ml时，其 CI分别为 0．387、0．657、0．777。不同用药浓度的CI比较均无统计学差异(P＞0．05)。

2．2 两药联用时不同给药时间的CI比较 见表1。

表1 两药联用时不同给药时间的CI比较(±s)

表1 两药联用时不同给药时间的CI比较(±s)

注:不同给药时间的CI比较，P均＞0．05

DTX、CPT-1 的药物浓度 两药联用时 先用DTX，再用CPT-1先用CPT-1，再用DTX 1．29 mg/ml 0．387 ±0．025 0．415 ±0．116 0．366 ±0．049 12．90 mg/ml 0．657 ±0．018 0．615 ±0．084 0．447 ±0．057 129．00 mg/ml 0．777 ±0．036 0．636 ±0．092 0．608 ±0．064

2．3 两药联用时不同 fa的 CI比较 DTX、CPT-1的 fa 为 0．95、0．80、0．70、0．50、0．40、0．30 时，其 CI分别为 0．000 29、0．014、0．084、0．933、2．840、8．820。

3 讨论

目前，DTX广泛用于肺癌、消化道肿瘤及前列腺癌的治疗［4］。DTX的抗肿瘤作用机制是加强微管蛋白聚合，抑制微管解聚，破坏肿瘤细胞的有丝分裂。目前，国外已有将DTX作为进展期胰腺腺癌一线化疗药物的二期临床研究［5］。CPT-1为TopoⅠ抑制剂，其与Topo-Ⅰ-DNA形成复合物，通过特异性阻断DNA复制、转录及重组发挥抗肿瘤作用;Topo-Ⅰ越高，说明肿瘤对CPT-1越敏感，CPT-1作为二线化疗药物，其治疗进展期胰腺癌的有效率为48%［6］。

本研究显示，DTX、CPT-1单用及联用对人胰腺癌细胞株Capan-2的体外抗肿瘤作用逐渐增强;两药联用有协同作用，其用药顺序不影响两药的抗肿瘤作用。

［1］Cullinan S，Moertel CG，Wieand HS，et al．A phaseⅢ trial on the therapy of advanced pancreatic carcinoma．Evaluations of the Mallinson regimen and combined 5-fuorouracil，doxorubicin，and cisplatin［J］．Cancer，1990，65(10):2207-2212．

［2］张频．抗肿瘤新药伊立替康临床研究进展［J］．国外医学:肿瘤分册，1998，6(25):344-346．

［3］何松，沈薇，沈鼎明．利用中效原理观察抗癌药物的相互作用［J］．肿瘤防治杂志，2003，10(6):586-588．

［4］Han K，Cao W，Che J，et al．First line chemotherapy with weekly docetaxel and cisplatin in elderly patients with advanced non-small cell lung cancer:a multicenter phase II study［J］．J Thorac Oncol，2009，4(4):512-517．

［5］Rougier P，Adenis A，Ducreux M，et al．A phaseⅡ study:docetaxel as frst-line chemotherapy for advanced pancreatic adenocarcinoma［J］．European Journal of Cancer，2000，36(8):1016-1025．

［6］Seong YY，Young SP，Hyo SK，et al．Irinotecan monotherapy as second-line treatment in advanced pancreatic cancer［J］．Cancer Chemother Pharmacol，2008，10(5):280-284．