葛芩颗粒质量标准研究

张珮 窦建卫 郭永逵

葛芩颗粒由金银花、葛根、黄芩、野菊花、甘草等七味药材组成的制剂，具有辛凉解表、清热解毒的功能，主治感冒及流行性感冒。为控制药品质量,保证临床用药的安全性和有效性,本文研究探索用薄层色谱法(TLC)鉴别处方中葛根、黄芩和野菊花三味药材的方法，并用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)对制剂中葛根所含的葛根素进行测定,为葛芩颗粒的质量标准提供定性和定量检测方法。

1 仪器和试药

Lab Alliance 高效液相色谱仪，N3000色谱工作站、超声波清洗机(天津市东康科技有限公司)、YP1201N型分析天平(上海天平仪器厂)。葛根素对照品(批号110752-200209)、黄芩对照药材(批号120955-200406)、蒙花苷对照品(批号111528-200303)，均购于中国药品生物制品检验所；葛芩颗粒(自制)；乙腈(色谱纯)；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2 薄层鉴别

2.1 葛根的薄层鉴别

取以上3批颗粒剂研细,约称10 g，加甲醇20 ml超声提取20分钟，滤过，滤液蒸至1 ml作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺葛根的阴性样品10 g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法试验，分别吸取上述三种溶液各6 μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(7∶2.5∶0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，阴性无干扰(见图1)。

图1 葛根TLC图谱

2.2 黄芩的薄层鉴别

取以上3批颗粒剂研细,约称10 g，加乙酸乙酯—甲醇(3∶1)的混合溶液30 ml加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1 g，和缺黄芩的阴性样品10 g，同法制成阴性样品溶液。分别吸取上述三种溶液各6 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯—甲酸—水(7∶4∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性无干扰(见图2)。

图2 黄芩TLC图谱

2.3 野菊花的薄层鉴别

取以上三批颗粒剂研细，约称10 g，加甲醇20 ml超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。另取蒙花苷对照品，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺野菊花的阴性样品10 g，同法制成阴性样品溶液。吸取上述三种溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝溶液，热风吹干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，阴性无干扰(见图3)。

图3 野菊花TLC图谱

3 葛根素的含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：甲醇—水(25:75)；检测波长：250 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：常温；理论板数按葛根素峰计算应不低于4 000。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取葛根素适量加30%乙醇制成每1 ml含葛根素0.276 mg的溶液，摇匀，即得。

3.3 供试品溶液的制备

取葛芩颗粒适量，研细，称取1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇30 ml，称定重量，超声处理30分钟,取出，放冷,再称定重量，并补足减失的重量,摇匀,滤过，取续滤液过0.45 μm 微孔滤膜,即得。

3.4 阴性对照溶液的制备

按处方中药味比例，自配不含葛根的群药，按其工艺制成阴性样品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

3.5 方法专属性

取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液，在上述色谱条件下，各进样10 μl，测得HPLC图谱，见图4。结果表明阴性样品无干扰。

3.6 线性关系考察

精密量取葛根素对照品溶液(0.276 mg/ml)0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分别置6个25 ml的量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，按上述色谱条件测定,以葛根素峰面积为纵坐标,葛根素进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线图。经计算得回归方程：Y=7 724X+2 909.6，r=0.999 7，结果表明葛根素在5.52～55.2 μg间线性关系良好。

图4 葛芩颗粒 HPLC 色谱图

3.7 精密度试验

精密吸取葛根素对照品溶液10 μl,连续进样6次，测定峰面积RSD为0.78%，表明仪器精密度良好。

3.8 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，于配制后的0、1、2、4、8、12、24小时进样，测定峰面积，计算RSD=1.78%，可见供试品溶液在24小时内基本稳定。

3.9 重复性试验

取同一批样品各6份，按供试品制备与测定方法进行此样品溶液的制备并测得葛根素的RSD为0.73%。表明重复性良好。

3.10 回收率试验

取已知含量的同一批样品0.5 g，共5份,分别加入葛根素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备及测定，结果见表1。

3.11 样品含量测定

取葛根颗粒3个批号的样品，按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，测定其中的葛根素含量分别为2.27、2.35、2.13 mg/g。

表1 加样回收率试验结果(n=5)

4 讨论

颗粒剂指将药物粉末与适宜的辅料混合而制成的有一定粒度的干燥颗粒状制剂。颗粒剂既可直接吞服，又可冲入水中饮服，方便患者携带，且满足现代制剂质量可控，便于机械化生产的需求[1]。薄层色谱法一直以来以操作简便、精密度高、重现性好，在质量控制中受到重视[2-4]。

葛芩颗粒处方中的药味多，成分复杂，故薄层鉴别有较大困难，通过参阅文献并对各个药味的研究，得出薄层效果较好的葛根、黄芩、野菊花。在黄芩的定性鉴别中,曾参考药典方法[5]，采用甲苯—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(10∶3∶1∶2)为展开剂，但斑点分离效果不理想。经过调节以乙酸丁酯—甲酸—水(7∶4∶3)的上层溶液为展开剂，再喷以2%三氯化铁乙醇溶液，总体分离效果较好。在野菊花的鉴别中,药典[5]记载的展开系统分离效果不理想，调整后确定为系统乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)为展开剂，再喷以2%三氯化铝溶液，薄层色谱斑点清晰、分离度好。

葛根作为葛芩颗粒中主药之一，投料量大，葛根中主要含黄酮类化合物，其中葛根素的含量较高而且稳定，故选其作为控制本品质量的指标。在样品前处理中对提取方法做了考察，结果用30%乙醇超声提取30分钟的方法提取葛根中葛根素，简单快捷，提取率较高。对精密度、稳定性、重复性和回收率进行了考察，表明此方法可靠，准确性好，简便易于操作，可很好的控制葛芩颗粒的质量。

[1] 崔福德.药剂学[M].北京：人民卫生出版社,2007:122．

[2] 郑修丽，王炯.清热逐风合剂的薄层色谱鉴别[J].甘肃中医，2001，14(6)：65.

[3] 夏曦，刘玲. 舒筋通络外用颗粒质量标准的研究[J].中国医药导报，2010，7(28)：38-41.

[4] 徐晓弘，熊鑫.薄层色谱法鉴别冠脉宁颗粒的研究[J].中国医药导报，2011，8(15)：183-184.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2010：313,1212,1075.