气相色谱法分析蒙药白头翁多糖的单糖组分

2011-06-12徐秀廷赵玉英顾德昌

武汉工程大学学报 2011年7期

徐秀廷，赵玉英，顾德昌

(1. 内蒙古民族大学化学化工学院，內蒙古通辽 028043；2. 内蒙古民族大学分析测试中心，內蒙古通辽 028043)

0 引言

白头翁Pulsatilla chinensis(Bunge) 是中蒙医常用药材，具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效,临床上用于治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾、妇科阴道炎等，白头翁以及药物植物化学成分的研究较多[1-4]，多糖是醛糖和酮糖通过糖苷缩合而成的天然多聚体，广泛存在于高等植物、海藻和微生物中.多糖具有提高免疫力、降血糖、抗凝血、抗辐射、抗肿瘤、抗衰老等多种生物功能，且对机体毒副作用小,是生命有机体必不可少的成分,因此对其研究有着重要的现实意义.白头翁多糖含量的研究已有报道[5]，但其组分的研究未见报道.本实验用乙酰化法将多糖水解并进行衍生化，采用气相色谱法分析多糖中各种单糖的种类和组成，为将白头翁开发成为多糖资源和丰富我国多糖资源的植物来源提供实验依据.

1 实验器材

1.1 仪器

TRACE GC气相色谱仪(Thermo)，Thermo TR-5ms色谱柱，氮气、氢气纯度均为99.999%，全自动空气源(北京中惠普分析技术研究所)，旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司).

1.2 试剂

葡萄糖、肌醇、D-半乳糖、甘露糖、鼠李糖、D-阿拉伯糖和D-木糖均为进口分装，硼氢化钠、甲基咪唑、氨水、无水乙醇等均为分析纯.

1.3 材料

蒙药白头翁多糖由内蒙古民族大学应用化学研究所提供.

2 白头翁多糖的组分分析

2.1 各种单糖对照品的制备

精密称取木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖约各2 mg配成1 mg·mL-1的混合糖液，再配制肌醇1 mg·mL-1溶液，量取混合糖液0.2 mL，依次加入质量分数为28%浓氨水0.05 mL、0.05 mL肌醇，依次加入少量乙醇、氨水、四氢硼钠混合，在40 ℃ 水浴加热1 h，再依次加入冰醋酸10滴、1-甲基咪唑0.5 mL和乙酸酐5.0 mL，冰浴10 min，取油层，用氮气吹干，用乙酸乙酯溶解，直接进行气相色谱分析.

2.2 气相色谱条件选择

2.2.1 气相色谱柱的老化在300 ℃下老化气相色谱柱，并清洁进样口和检测器，确保检测准确度.

图1 单糖混合样气相色谱谱图

由图1可见，混合物中的各种单糖组分已经得到分离，该色谱条件可以完成多糖的组分分析.

2.2.4 标准曲线的绘制以不同进样量进行测量，根据其积分面积与进样量的浓度得到标准曲线的回归方程见表1.

表1 各种单糖标准曲线的回归方程及相关系数

2.2.5 准确度实验取单糖乙酰化混合样，进样五次，得到各种单糖的积分面积的RSD值分别为：RSD鼠李糖=0.190 1%、RSD阿拉伯糖=0.184 2%、RSD木糖=0.195 1%、RSD肌醇=0.190 8%、RSD甘露糖=0.267 5%、RSD半乳糖=0.242 5%、RSD葡萄糖=0.172 7%，由此可见准确度良好.

2.3 蒙药白头翁多糖组分的分析

精密称取白头翁多糖约20 mg置于试管中，分别加入2 mol·L-1硫酸1.0 mL水解2 h,多糖水解后其组分主要为单糖.分别在其中加入一定量的肌醇作为内标物，用“2.1”中所述方法对其进行乙酰化处理，并进行气相色谱分析，得到白头翁多糖的单糖气相色谱分析结果，见图2，将图3与图2进行对比，得出所对应的物质即白头翁多糖的单糖组分，根据标准单糖的积分面积和内标物质的积分面积算出各种单糖的摩尔比.