竹节参多糖、总皂苷对小鼠急性肝损伤保护作用的研究

杨小林，陈 平

(武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北武汉 430023)

竹节参为五加科人参属多年生草本植物Panax japonicus C.A.Mey的干燥根，原是一种名贵的民间中草药，现已收载于《中华人民共和国药典》[1]，药用功能类似人参和三七。竹节参含有多种皂苷、糖类、挥发油和多种氨基酸。本课题组从竹节参中分离到竹节参总皂苷和多糖成分，并采用四氯化碳肝损伤小鼠模型[2]，以谷丙转氨酶和谷草转氨酶的变化为指标，首次研究了竹节参总皂苷和多糖成分修复肝损伤的药理活性。

1 材料

1.1 仪器

DG5033A型酶标仪(南京华东电子集团医疗装备有限公司)、TGL-16型高速台式冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)、LXJ-Ⅱ离心机(上海医用分析仪器厂)、Satrious电子天平(德国)、恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)、移液枪等。

1.2 药品及试剂

联苯双酯片(江苏鹏鹞药业有限公司，批号0811161)，辛伐他汀片(上海信谊万象药业股份有限公司，批号080201)，血脂康胶襄(北京北大维信生物科技有限公司，批号20080708)，四氯化碳 (CR，北京市新光化学试剂厂生产)，花生油(食用油，山东玉皇粮油食品有限公司生产)，谷丙转氨酶(ALT)临床诊断试剂盒(上海科欣生物技术研究所，批号20090401)，谷草转氨酶(AST)临床诊断试剂盒(上海科欣生物技术研究所，批号20090301)，竹节参药材经武汉工业学院陈平教授鉴定为五加科人参属竹节参(Panax japonicus C.A.Mey)，竹节参多糖(D1)、竹节参总皂苷(Z1)为本实验室自制。

1.3 动物

昆明种小鼠，体重18 g～22 g，雌雄各半，健康状况良好，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，鄂医动管证字19-052，所有实验动物均食用全价混合饲料，自由摄食、取水。

2 方法

2.1 竹节参总皂苷和多糖的制备

竹节参总皂苷的制备:取竹节参粗粉，加入10倍量60%的乙醇，浸泡2h，水浴回流提取2h，滤过得滤液。药渣再用10倍量60%的乙醇回流提取2次，每次2h滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇至无醇味，配制成药材:药液(g/ml)为1∶1的溶液。上已处理好的HPD-100大孔树脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脱。合并60%的乙醇洗脱液，回收溶剂至近干，经65℃减压干燥得到竹节参总皂苷。

竹节参多糖的制备:取竹节参粗粉加入10倍量的水，浸泡2h，直火煎煮提取1.5h滤过得滤液。药渣再用10倍量的水直火煎煮提取2次，每次1.5h，滤过。合并3次滤液，减压浓缩至体积适量。加乙醇至浓度为70%进行醇沉，室温下放置12h以上，滤过并收集沉淀物，经65℃减压干燥得到竹节参多糖。

2.2 实验样品液的配制

配制浓度为0.5%的CMC-Na水溶液;配制浓度为10mg·ml－1阳性对照药联苯双酯水溶液;配制浓度为0.05g·ml－1阳性对照药血脂康 CMC-Na溶液;配制浓度为0.0007 g·ml－1阳性对照药辛伐他汀CMC-Na溶液;配制浓度为 0.03 g·ml－1、0.015 g·ml－1竹节参多糖高、低剂量的CMC-Na溶液;配制成浓度为0.03 g·ml－1、0.015 g·ml－1竹节参总皂苷高、低剂量的 CMCNa溶液。

2.3 肝损伤实验方法

取昆明种小鼠108只，体重18g～22g，雌雄各半，随机分成9组，每组12只，分为空白对照组、高脂模型组、联苯双酯阳性对照组、辛伐他汀阳性对照组、血脂康阳性对照组、竹节参总皂苷高、低剂量组，竹节参多糖高、低剂量组。灌胃给药。空白对照组和高脂模型组每日按0.2ml/10g灌胃0.5%CMCNa，各给药组每日灌胃给予0.2ml/10g体积的相应药物，给药剂量分别为0.2g/kg、0.014g/kg、1g/kg、0.6g/kg、0.3/kg、0.6g/kg、0.3g/kg，共给药6d。最后1次给药2h后，除空白组外其余8组均腹腔注射0.1%的四氯化碳花生油溶液0.1ml/10g。禁食 16h，于小鼠眼底静脉丛采血约0.5ml，分离血清(4000rp/min，10min，4℃)，室温放置10min，利用试剂盒测定各组实验动物血清的OD值，测定波长为505nm得各样品吸光度，查吸光度-卡门氏单位曲线，求得相应的AST/GOT、ALT/GPT活力值。

3 结果(表1)

表1 肝损伤小鼠血清ALT、AST的实验结果表(n=10，SD)

表1 肝损伤小鼠血清ALT、AST的实验结果表(n=10，SD)

注:与空白对照组比较:▲ P<0.05，▲▲ P<0.01;与模型组比较:*P<0.05，**P<0.01

OD±SD ALT±SD OD±SD AST±SD空白对照组 0.089±0.014 30.47±9.04 0.084±0.018 52.00±1组 别3.92模 型 组 0.270±0.029 151.07±19.49▲ 0.264±0.052 191.08±40.32▲▲联 苯 双 酯 0.266±0.034 98.27±22.37** 0.265±0.029 91.23±22.46辛伐他汀 0.274±0.026 153.73±17.57 0.266±0.048 196.38±37.12血 脂 康 组 0.271±0.018 145.27±11.92 0.229±0.022 173.54±16.70 Z 1高 剂 量 0.206±0.027 108.07±17.90** 0.209±0.029 128.61±22.25**Z 1低 剂 量 0.235±0.056 124.11±35.63* 0.211±0.040 130.23±31.68*D 1高 剂 量 0.203±0.024 105.87±16.16** 0.170±0.045 118.54±34.70**D 1低 剂 量 0.227±0.041 122.20±27.25* 0.224±0.027 129.84±27.41*

4 讨论

大量的研究表明，在肝细胞的病变过程中，自由基、酶以及脂质过氧化物等均发挥重要的作用。四氯化碳致小鼠肝损伤的机制为:四氯化碳在肝内经微粒体细胞色素分解活化，形成三氯甲基自由基和氯自由基，这些自由基与肝细胞内大分子发生共价结合，可攻击肝细胞膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，损伤肝细胞膜的结构和功能，使膜通透性升高，导致细胞肿胀坏死，存在于肝细胞质中的可溶性酶ALT和AST释放入血 ，因此血清中 ALT、AST水平高低可以反映肝细胞损伤程度，并可作为评价药物保肝作用的指标。

本实验结果显示，模型与空白组相比，ALT、AST的浓度均有极显著性升高(P<0.01)，表明实验动物造模成功。竹节参多糖、总皂苷的高剂量组与模型组相比，对 ALT、AST升高均有极其显著性的降低作用(P<0.01);竹节参多糖、总皂苷的低剂量组与模型组相比，对 ALT、AST升高有显著性的降低作用(P<0.05)。因此实验显示，竹节参多糖、总皂苷具有良好的保肝降酶作用。我们还首次发现了竹节参多糖、总皂苷的保肝降酶活性作用，具有创新性。

本实验结果显示，降脂西药辛伐他汀和中药血脂康均不具有保肝降酶作用。本课题组前期的实验研究证明，竹节参多糖、总皂苷具有显著性降脂作用，且其降脂作用与药辛伐他汀相当。本实验还证明竹节参多糖、总皂苷具有确切的保肝降酶作用，并从另一个侧面证明其具有进一步开发为降脂药物的优势。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].1部.北京:中国医药科技出版社，2010.129.

[2]徐淑云.药理学实验方法[M].北京:人民卫生出版社.1993.

[3]钱丽娜，陈平，陈新，等.鄂产人工栽培竹节参总皂苷成分的活性研究[J].中华中医药学会第九届中药鉴定学术会议论文集.343-344.

[4]钱丽娜，陈平，李小莉，等.鄂产竹节参总皂苷成分抗氧化活性研究[J].武汉植物学研究，2008，26(6):674-676.

[5]许彬，陈平，陈新.酶法提取竹节参中多糖成分的工艺研究[J].中国中药杂志，2008，33(13):1549-1551.

[6]许彬，陈平.竹节参粗多糖的初步纯化工艺研究[J].武汉工业学院学报，2008，27(4):5-8.