抗中性粒细胞胞浆抗体检测在系统性红斑狼疮患者中的应用

张小莲，徐春晴，张聪玲，刘和平

(宜春市人民医院检验科，江西 宜春 336000)

抗中性粒细胞胞浆抗体 (antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA)指与中性粒细胞及单核细胞胞浆中溶酶体酶发生反应的抗体。当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶物质及白细胞抗原生成，刺激机体而产生ANCA，与临床一些炎症疾病密切相关的抗体。自从Davies等[1]在坏死性肾小球肾炎和系统性血管炎患者循环物中首先发现ANCA以来，在国际上逐渐引起人们的重视。现已证实，ANCA是系统性坏死性血管炎的血清标志抗体，被广泛应用于血管炎的诊断和鉴别诊断。Schnabel等[2]报道在SLE中仅存在核周型 ANCA(P-ANCA)，而 Pauzner等[3]报道在SLE中还发现存在胞浆型ANCA(C-ANCA)，本文用间接免疫荧光技术 (IIF)对92例SLE患者作血清ANCA的检测，以探索ANCA与SLE的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例选择 SLE患者92例，均符合美国风湿病学会1982年诊断标准。正常献血员18例。所有血清标本置-20℃冰箱保存备检。

1.1.2 试剂来源 ANCA阳性参考血清、荧光素标记的羊抗人IgG均购自德国欧蒙公司。

1.1.3 所用仪器 电热恒温水浴箱 (北京东霞科学仪器厂)，荧光显微镜(日本Nikon公司)。

1.2 检测方法 间接免疫荧光法(IIF)将被检血清用PBS(pH 7.2)吐温缓冲液作1:10稀释，滴加于基质片上，置室温孵育30min，用PBS(pH 7.2)吐温缓冲液洗涤3次，每次5min，再用荧光标记的羊抗人IgG复染室温孵育30min，用PBS(pH 7.2)吐温缓冲液洗涤3次，封片。最后用荧光显微镜观察结果。结果阳性者再作1:20、1:40、1:80稀释检测。结果判断：乙醇固定的抗原底物片，荧光显微镜下可见均匀分布的中性粒细胞，阴性时中性粒细胞胞浆部分无特异性荧光染色，细胞较暗，有时有一部分粒细胞(嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞)出现颗粒荧光。乙醇固定的抗原底物片，主要表现为两种阳性荧光型别：一种是均匀分布在整个中心粒细胞胞浆中颗粒型荧光，细胞核无荧光称之为胞浆型ANCA(cANCA)，另一种是围绕中性粒细胞胞核的平滑的带状荧光称之为核周型ANCA(pANCA)。近年来还报道一种非典型ANCA(X-ANCA)。同时，利用基质片中存在少量淋巴细胞和嗜酸性粒细胞来区分是ANA还是真正的P-ANCA，前者与淋巴细胞和嗜酸性粒细胞发生反应，后者则不能。

2 结果

2.1 SLE患者中ANCA的阳性率 92例SLE患者中ANCA阳性者22例，阳性率23.9%；其中1∶80稀释阳性者7例，1:40稀释阳性者10例，1:20稀释阳性者5例；P-ANCA阳性者21例，C-ANCA阳性者1例。正常对照组18例均为阴性。见表1。

2.2 SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比较 92例SLE患者根据Urowitzde分类标准[4]，分为活动组和非活动组，结果提示：54例活动组中ANCA阳性率为31.5%(17/54)，38例非活动组中ANCA阳性率为13.2%(5/38)，两组阳性率相比差异有显著性(P＜0.05)。 见表2。

表1 SLE患者中ANCA的阳性率

表2 SLE患者活动组与非活动组ANCA阳性率比较

3 讨论

ANCA自从1990年发现以来一直被作为系统性血管炎的血清学标记性抗体，尤其对于血管炎的诊断与鉴别诊断具有重要的意义。IIF法可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA以及非典型ANCA(X-ANCA)。其中C-ANCA主要靶抗原是蛋白酶3(PR-3)，cANCA主要见于韦格纳肉芽肿，系Wegener(WG)肉芽肿病的特异性抗体。C-ANCA致上下呼吸道坏死，肉芽肿形成，C-ANCA阳性也可见于少数显微镜下多动脉炎 (MPA)、Churg-Strauss综合征(CSS)、结节性多动脉炎(PAN)、少数巨细胞动脉炎、过敏性紫癜、白细胞破碎性皮肤性血管炎和白塞病。P-ANCA的主要靶抗原是髓过氧化物酶，pANCA不如cANCA具有诊断特异性。pANC阳性主要见于特发性坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN)，显微镜下多动脉炎，也可见于Churg-Strauss综合征(CSS)、结节性多动脉炎(PAN)、SLE、RA、SS、SSc。 在 NCGN、MPA中pANCA和cANCA阳性率几乎相同。相对而言，pANCA患者的血管炎病变程度重，常有多系统损害。。X-ANCA的主要靶抗原目前还不十分清楚，镜下与P-ANCA不易区分，故有的实验室将其归入P-ANCA，临床上主要与溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎有关。ANCA在SLE中的发病机制尚未完全清楚，有作者提出ANCA是通过激活毛细血管中的中性粒细胞、单核细胞，引起溶菌酶的释放，导致血管损伤，或ANCA引发T细胞介导的细胞免疫协同造成组织损伤的结果[1]。有关ANCA在SLE中的作用及其特异性仍有争议，还有待作更深一步的研究。

本文92例SLE患者中发现C-ANCA和PANCA两种类型的ANCA。ANCA的阳性率为23.9%(22/92)，其中C-ANCA的阳性率为1.1%(1/92)，低于Pauzner等报道的10.5%[3]。P-ANCA的阳性率为22.8%(21/92)，与文献报道的 25%基本一致[2，3]。在 22例ANCA阳性中，1:80稀释阳性有7例，1:40稀释阳性者10例，1:20稀释阳性者5例。1:80阳性者多为病情恶化或复发者，临床上有肾脏损害甚至肾衰竭、蛋白尿,血尿、管型尿、出现多发性浆膜炎和面部皮疹，雷诺现象明显，属病情活动组；我们的实验结果显示具有紫癜、瘀斑、多形红斑、指尖溃疡、口腔溃疡等皮肤血管炎的SLE患者ANCA阳性率较无皮肤血管炎表现的SLE患者显著增高。提示活动组SLE患者较非活动组具有更明显的血管炎。这与活动组SLE患者ANCA的阳性率明显高于非活动组的结果是一致的。因此，有理由认为SLE患者中ANCA的出现提示了临床上合并血管炎的存在，它表明了病情的活动性，故可以作为临床上提示病情活动的一个有用的指标。

由上可知，在SLE患者治疗中测定血液中ANCA及其滴度可协助SLE的治疗，同时根据ANCA滴度的高低了解其病情变化情况。

[1]Jennette JC,Falk RJ.Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies and associated disease:a review[J].Am J Kidney Dis,1990;15(6):517-529.

[2]Schnabel A,Csernok E,Isenberg DA et al.Antineutrophil cytoplasmi antibodies in systemic lupus erythematosus prevalence[J].Arthritis Rheum,1995,38(5):633-637.

[3]Pauzner R,Urowtz M,Gladman D,et al.Antineutrophil cytoplasmicantibodies in systemic lupus erythematosus[J].J Rheumatol,1994,21(9):1670-1673.

[4]蒋 明,田新平,李学旺,等.系统性红斑狼疮的临床.见蒋明主编.风湿病学[M].北京:科学技术出版社,1996:1037.