高效液相色谱法测定参麻通络胶囊中芍药苷的含量

郭艳霞 王志强

(河北省唐山市丰南区中医医院药剂科，河北 丰南 063300)

高效液相色谱法测定参麻通络胶囊中芍药苷的含量

郭艳霞 王志强1

(河北省唐山市丰南区中医医院药剂科，河北 丰南 063300)

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定参麻通络胶囊中芍药苷含量。方法 色谱柱为Diamonsil，C18，5 μm，4.6mm × 250 mm，甲醇 - 水 - 冰醋酸(32∶68∶0.2)，流速为 1.0 mL/min，检测波长为230 nm。进样量为20 μL。结果 芍药苷在0.0071～0.0427 mg/mL范围内呈良好的线性关系。平均回收率为99.51%。结论 本品方法操作简便、可靠，重现性好，专属性强，可作为参麻通络胶囊的内在质量控制方法。

回收率;丹参;天麻;通络;胶囊;色谱法，高压液相;芍药甙

参麻通络胶囊具有益气活血、化瘀通络、滋补肝肾功效，用于治疗气血两虚、肝肾不足、瘀血阻络所致头晕健忘，肢体不遂。临床上脑梗死及其后遗症、脑动脉硬化、老年性痴呆常见上述证候。参麻通络胶囊由黄芪、丹参、天麻、半夏、赤芍药、当归、桃仁、红花、鸡血藤、竹茹、石菖蒲、僵蚕、枸杞子、郁金、白芍药、牛膝16味药材组成。赤芍药、白芍药为该制剂主药之一，其中芍药苷是赤芍药、白芍药的主要有效成分。测定处方中的有效成分芍药苷的含量对临床合理用药具有指导意义。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 高效液相色谱(HPLC)仪:泵-seriesⅢ型;检测器:Model 500;色谱工作站:ANASTAR(美国SSI公司)色谱柱 Diamonsil，C18，5 μm，4.6 mm ×250 mm(美国热电公司)。

1.1.2 试剂 甲醇(色谱纯)(天津四友试剂厂);水(二次重蒸水);冰醋酸(分析纯)(天津市盛奥化学试剂有限公司);对照品:芍药苷对照品(含量测定用，批号0736-20011，中国药品生物制品检定所)。

1.2 溶液的制备

1.2.1 芍药苷对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒质量的芍药苷对照品8.9 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，再精密量取2 mL置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得0.0285 mg/mL对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备

1.2.2.1 提取方法的选择

1.2.2.1.1 方法1 取参麻通络胶囊10粒，内容物研细，称取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50 mL，称定质量，放置过夜，超声提取30 min，放至室温，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，滤过，药渣及滤器用70%乙醇20 mL分数次洗涤，洗液并入滤液中，蒸至近干，残渣微热使溶解，转移至50 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

1.2.2.1.2 方法2 取参麻通络胶囊10粒，内容物研细，称取约0.4 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50 mL，称定质量，放置过夜，超声提取30 min，放至室温，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

芍药苷对照品溶液的浓度为0.028 5 mg/mL，分别精密量取20 μL，按拟定的色谱条件测定。结果见表1。

表1 提取方式的选择

上述结果表明，2种方法提取结果无明显差异。但方法1提取后蒸至近干再溶解的方式较繁琐容易引起误差，故采用方法2的提取方法。

1.2.2.2 提取时间的选择 分别以20、30、40 min超声提取，比较如下:取参麻通络胶囊品10粒，研细，取约0.4 g，称取3份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50 mL，密塞，称定质量，放置过夜，分别超声提取20、30、40 min，放至室温，再称定质量，用70%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液即得。芍药苷对照品溶液的浓度为0.028 5 mg/mL，分别精密量取20 μL，按拟定的色谱条件测定。结果见表2。

表2 提取时间的选择

从上述数据可得，30 min与40 min提取芍药苷无明显差异，为了节能省耗，将提取时间定为30 min。

1.2.2.3 供试品溶液的制备方法 取参麻通络胶囊10粒，内容物研细，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇50 mL，密塞，放置过夜，超声处理(250 W，40 kHz)30 min，放至室温，用70%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液即得。

1.3 色谱条件的选择

1.3.1 检测波长的选择 取芍药苷对照品溶液，在200～400 nm处扫描，扫描结果选择230 nm为检测波长。

1.3.2 流动相的选择 甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.2)，结果:芍药苷峰与其他组分峰完全分离，保留时间稍长，故调节流动相比例，最终确定流动相为甲醇-水-冰醋酸(32∶68∶0.2)。

2 含量测定

2.1 阴性对照溶液的制备及干扰情况 取缺赤芍药、白芍药的阴性样品，按1.2.2.3方法制成缺赤芍药、白芍药的阴性对照溶液。精密量取阴性对照溶液20 μL进样，观察阴性对照溶液在芍药苷峰的保留时间处是否有杂质峰。

结果:在芍药苷峰保留时间处无杂质峰干扰(见图1～3)。

图1 缺赤芍药、白芍药的阴性对照溶液HPLC图

图2 参麻通络胶囊供试品溶液HPLC图

图3 芍药苷对照品溶液HPLC图

2.2 测定方法及结果

2.2.1 线性关系考察 取浓度为 0.007 1、0.014 2、0.028 5、0.035 6、0.042 7 mg/mL 的芍药苷对照品溶液，分别进样20 μL，按拟定的色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程:y=705 335x+13 036 R2=0.999 9。结果见表3、图 4。

表3 线性关系考察结果

结果:实验表明芍药苷浓度在 0.007 1～0.042 7 mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.2 精密度试验 取参麻通络胶囊10粒，内容物研细，取约 0.4 g，精密称定，按 1.2.2.3 方法制成供试品溶液。取同一供试品溶液，连续进样6次，每次20 μL，测定芍药苷峰面积，计算相对标准偏差。结果见表4。

2.2.3 稳定性试验 将同一份供试品溶液于室温下放置，分别于第0、2、4、6、8 h 按上述色谱条件检测，各进样20 μL，记录芍药苷峰面积，考察样品溶液的稳定性，计算相对标准偏差。结果见表5。

图4 芍药苷浓度线性关系

表4 精密度试验结果

结果:实验结果表明，仪器的精密度良好。

表5 稳定性试验结果

结果:实验结果表明，供试品溶液至少在8 h内基本稳定。

2.2.4 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的参麻通络胶囊(批号110401)，称取约0.4 g，精密称取6份，置具塞锥形瓶中，加入70%乙醇25 mL，再分别精密添加已配制好的芍药苷对照品溶液(0.285 mg/mL)2.5 mL，挥干溶剂，按1.2.2.3方法制成供试品溶液。按拟定的色谱条件测定，计算回收率。结果见表6。

2.2.5 样品芍药苷含量测定 取参麻通络胶囊成品10批，分别按 1.2.2.3 方法制成供试品溶液;按 1.2.1 方法制成芍药苷对照品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，按上述色谱条件测定，以面积外标法计算含量。测定结果见表7。

表6 回收率试验结果

结果:从以上试验可知，本方法的回收率良好。

表7 成品含量测定结果

2.2.6 重复性试验 取同一批号 (110401)的供试品适量，内容物研细，称取 6份，取约 0.4 g，精密称定，按 1.2.2.3方法制成供试品溶液，按拟定的色谱条件测定峰面积，计算相对标准偏差，结果见表8。

表8 重复性试验结果

结果:从以上数据可知，本方法的重复性良好。

3 结论

以上结果可见，参麻通络胶囊10批成品的芍药苷含量结果均在1.32～1.44 mg/粒之间，本品每粒含赤芍药、白芍药以芍药苷(C20H28O4)计，不得低于0.80 mg。

Determination of paeoniflorin content in Shenma Tongluo capsule by High-performance liquid chromatog-raphy

GUO Yanxia*，WANG Zhiqiang.*Fengnan District Hospital of Traditional Chinese Medicine of Tangshan，Hebei，Fengnan063300

ObjectiveTo establish a method for Determination of paeoniflorin content in Shenma Tongluo capsule by High-performance liquid chromatography(HPLC).MethodsChromatographic conditions of paeoniflorin determination are as follows:column(Diamonsil，C18，5 μm 4.6 mm ×250 mm)，mobile phase［Methanol-waterglacial acetic acid(32∶68∶0.2)］，flow(1.0 mL/min)，detection wavelength(230 nm)and sample volume(20 μL).ResultsPaeoniflorin in 0.007 1 ～ 0.042 7 mg/mL range was a good linear relationship.The average recovery was 99.51%.ConclusionThe method is simple，reliable，reproducible，specific，and can be used as intrinsic quality control of Shenma Tongluo capsule.

Recovery;Salvia;Gastrodia;Meridians;Capsule;Chromatography;High-pressure liquid;Paeoniflorin

R284.1;R944.5

A

1002-2619(2011)10-1548-03

1 河北省唐山市丰南区中医医院外科，河北 丰南 063300

郭艳霞(1975—)，女，主管药师。从事药剂工作。

2011-06-22)