降心丹对衰老模型小鼠抗氧化作用的实验研究

雷霞，迟瑛娇，赵冬梅，周敏

(1.黑龙江中医药大学佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007;2.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154007;3.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

中药复方降心丹出于宋·《太平惠民和济局方》，自古以来就被广泛应用。以往的实验研究表明，其具有明显的益智、延衰作用［1－2］。从中医理论上讲，该方即能养心，又能补肾;从单味药来看，其中的多数药物均见于其它行之有效的益智方中，且大多为现代药理学所证实。笔者在本实验中建立小鼠亚急性衰老模型，并以其超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量作为指标［3］，研究降心丹对衰老模型小鼠的抗氧化作用，从而为阐明降心丹的抗衰老机制提供依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

KM普通级小白鼠50只，雌雄各半，体质量(20±2)g，购于佳木斯大学实验动物中心提供，动物合格证号:SLXK(黑)20020001。分笼饲养，每笼10只，室温(26±2)℃，均食用普通饲料。

1.2 仪器与试剂

UV757CRT紫外－可见分光光度计(上海精密仪器有限公司);TDL－5000低温冷冻离心机(北京医用离心机厂);HH－S26S恒温水浴锅(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司);ALC－110.4电子分析天平(梅特勒－托利多仪器上海有限公司);0.9%的生理盐水(哈药集团三精制药厂);SOD、MDA检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20080519);D－半乳糖(生工生物工程上海有限公司，批号F2008041)。

1.3 药物制备

熟地黄25g，当归25g，天门冬 25g，麦门冬 25g，人参 15g，山药15g，茯苓15g，远志15g，肉桂5g，朱砂5g。以上中药通过煎煮，过滤，浓缩，用蒸馏水稀释浓度分别为相当于生药0.6g/ml(低剂量组)，生药1.2g/ml(中剂量组)，生药2.4g/ml(高剂量组)。

2 实验方法

2.1 分组和给药

KM普通级小白鼠50只，雌雄各半，体质量(20±2)g，普通饲料常规喂养。鼠笼垫料与饮水壶定时换洗，保持清洁，室温控制在25℃。随机选取10只，作为正常对照组，将其余的40只小鼠进行衰老造模。将40只小鼠随机均分成4组:降心丹低、中、高剂量组;D－gal组(模型对照组)。降心丹低、中、高剂量组(分别按2.4g/kg/d，4.8g/kg/d，9.6g/kg/d给予中药降心丹)。正常对照组及模型对照组均灌服等容量生理盐水。

2.2 造模方法

D－gal用生理盐水配成2.5mg/ml备用。除正常对照组外，其余各组按50mg/kg/d，给予5%D－gal腹腔注射，连续7周。

2.3 检测方法

8周后取小鼠血液及脑组织，按试剂盒说明，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力，MDA的含量。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 降心丹对亚急性衰老模型小鼠血清及脑组织SOD活性的影响

模型组SOD活性明显低于空白对照组，差异极显著(P＜0.01)。降心丹高、中、低剂量组的SOD活性显著高于模型组(P＜0.05)。说明降心丹具有增强血清及脑组织中SOD活性的作用。结果见表1。

3.2 降心丹对亚急性衰老小鼠血清及脑组织MDA含量的影响

模型组MDA含量明显高于空白对照组，差异极显著(P＜0.01)。与模型组比较，降心丹高、中剂量组的MDA含量显著降低(P＜0.05)，说明降心丹能降低血清及脑组织中MDA含量。结果见表1。

表1 降心丹对衰老模型小鼠血清、脑组织SOD活力及MDA含量的影响(±s，n=10)

表1 降心丹对衰老模型小鼠血清、脑组织SOD活力及MDA含量的影响(±s，n=10)

注:正常对照组相比，△△P＜0.01;与D－gal组相比，*P＜0.05。

血清(U/ml) 脑组织(U/mg) 血清(U/ml) 脑组织(U/mg)正常对照组40.95 ±1.71 39.32 ±3.26 2.41 ±0.32 9.18 ±0.36 D－gal组 23.78 ±2.12△△ 24.14 ±1.76△△ 3.54 ±0.46△△ 14.05 ±0.54△△降心丹低剂量组 31.41 ±2.00* 30.30 ±2.85* 2.13 ±0.43* 12.61 ±0.45*降心丹中剂量组 37.12 ±3.75* 33.15 ±3.17* 1.73 ±0.19* 12.64 ±0.59*降心丹高剂量组 36.53 ±2.47* 34.47 ±2.21* 1.17 ±0.25* 10.23 ±0.39*

4 讨论

机体对自由基损伤的防御机能随年龄增长而下降，超氧化物岐化酶(SOD)对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，它能清除超氧阴离子自由基，保护机体细胞免受损伤。因此，SOD活力可间接反应机体清除自由基的能力，从而反应机体的衰老情况。另一方面，随着增龄，体内自由基增多而引起脂质过氧化作用，脂质过氧化物代谢产物MDA增多［4］。本实验从自由基角度，观察降心丹对自由基代谢物的作用，发现其具有一定的抗氧自由基代谢的作用，主要表现在降心丹能明显提高衰老小鼠血清及脑组织中超氧化物歧化酶的活性，降低血清及脑组织中丙二醛的含量，从而保护细胞结构的完整性。这提示降心丹能提高衰老机体的抗氧化能力，清除机体过多的自由基，抑制或减轻了氧自由基对机体的氧化损伤，这些可能是其抗衰老作用的途径。

［1］姜宇宙，鲁丽敏，周艳丽.降心丹对小鼠记忆及脑内AchE，SOD的影响［J］.中医药学报，2005，33(4):30－31.

［2］张丹丹，王亚贤，姜宇宙.降心丹对D－gal小鼠免疫功能的影响［J］.职业技术，2007(8):150.

［3］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1991:508－509.

［4］王萍，王小燕.本草养颜膏对老龄大鼠皮肤SOD和Hyp的影响［J］.中医药学报，2009，37(1):18－20.