三七及竹节参中皂甙的不同提取方法

张春军,董琦,董凯

(牡丹江医学院,黑龙江 牡丹江 157011)

三七〔Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen〕,是我国的传统珍贵药材为五加科植物,以干燥的根入药[1]。别名山膝、金不换、田漆、田七、人参三七、滇三七等。三七用于治疗心血管疾病已有悠久的历史,在《医门秘旨》中已有记载。三七具有抗炎、抗衰老和提高免疫功能等多种作用。三七皂苷是三七的活性部位,对心血管系统有强心、扩张冠状动脉、增加冠状血流量、抗动脉粥样硬化、降低血小板表面活性、抑制血小板活化、黏附和聚集、抗血栓形成等作用[2]。除了三七外,五加科植物竹节参(Panax japonicus),主产于云南、四川、贵州、广西等省,其根、茎叶中也含有大量的皂甙,为了综合开发利用三七及竹节参的资源。我们对三七及竹节参根、茎、叶中皂甙的提取方法进行了实验研究,目的在为工业化提取三七及竹节参皂甙找到更简捷、安全的新方法,并把竹节参作为一种新的医药资源进行开发和利用。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 微波炉、回流装置、减压蒸馏装置、恒温水浴槽、721分光光度计、天平。

1.2 试剂 蒸馏水、50%乙醇、70%乙醇、甲醇、正丁醇、乙醚、浓H2SO4、冰醋酸 、16%香草醛醇、77%硫酸。

2 提取方法

2.1 三七粗茎叶总皂甙的提取

2.1.1 水煎醇沉法。称20g干燥的粗茎叶于250mL烧杯中,分别用50mL水煎煮四次,每次15min,过滤合并滤液,用Libeman-burchard试验检验无红色。说明没有提取出皂甙,此方法行不通。

2.1.2 冷浸法。称20g干燥三七粗茎叶于250mL烧杯中,分别加入水(30、30、20、20)mL,时时搅拌 1.5h,过滤,合并滤液,弃去滤渣,用 Libeman-burchard试验,鉴定无红色,说明没有提取出皂甙,此方法行不通。

2.2 三七根中皂甙的提取

称取20g烘干粉碎的三七根粉末,5份,分别于250mL具塞锥形瓶中,其中两份分别用甲醇,水各100mL浸泡24h,另外两份分别用甲醇,水各 100mL浸泡36h,其余1份加50%乙醇置于微波炉中40%的火力提取四次,每次2min,分别过滤,用Libeman-burchard试验,鉴定有红色,分别合并滤液,弃去滤渣,并减压回收溶剂至浸膏状,分别用50mL蒸馏水溶解,蒸馏瓶用少量蒸馏水洗涤,合并于分液漏斗中,分别用乙醚萃取 4次(30、30、20、20)mL,弃去醚层并回收再利用,水层再用水饱和过的正丁醇萃取4次(30、30、20、20)mL,弃下层回收再利用,将上层减压回收正丁醇溶剂至浸膏状,用50mL蒸馏水溶解,并用100mL容量瓶定容,摇匀待测。

2.3 竹节参根、茎叶中皂甙的提取

2.3.1 冷浸法。分别称取烘干粉末的竹节参根,茎叶粉末8g于具塞锥形瓶中,分别加人甲醇104mL,浸泡36h后过滤用 Libeman-burchard试验鉴定有红色,说明含有皂甙。弃去滤渣,滤液减压回收溶剂至浸膏状,分别用50mL蒸馏水溶解,蒸馏瓶用少量蒸馏水洗涤,分别合并于分液漏斗中,分别用乙醚萃取4次(30、30、20、20mL),弃上层并回收再利用,下层用水饱和过的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)。弃下层回收再利用,将上层减压回收正丁醇溶剂至浸膏状,分别用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,摇匀待测。

2.3.2 回流法。分别称取烘干粉碎的竹节参根、茎叶粉末10g置于250mL圆底烧瓶中。分别加入其中100mL甲醇,安装好回流装置加热回流12h后过滤、弃滤渣。滤液减压回收甲醇至浸膏状,再用50mL水溶解,用少量蒸馏水洗涤圆底烧瓶合并溶液,用乙醚萃取4次(30、30、20、20mL)上层回收再利用。下层溶液用水饱和过的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)下层回收利用。上层减压回收正丁醇至浸膏状。用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,摇匀待测。

2.3.3 微波法。分别称取烘干粉碎的竹节参根、茎叶粉末10g置于250mL具塞锥形瓶中加入70%的乙醇分别提取3次,每次2min,提取后用 Liberman-Burchard试验鉴定有红色,说明含有皂甙。过滤弃渣,滤液减压回收回收溶剂至浸膏状,用50mL蒸馏水溶解,再用少量蒸馏水洗涤蒸馏瓶。合并溶液于分液漏斗中用乙醚萃取 4次(30、30、20、20mL)。上层回收再利用,下层溶液继续用水饱和过的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)下层回收利用,上层溶液减压回收正丁醇至浸膏状,用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,摇匀待测。

3 皂甙的测定

分别用移液管精密吸取各组样品1mL稀释至10mL备用,精密吸取标准液和各组稀释后的样品溶液各0.5mL,分别置于10mL具塞的刻度离心试管中,将试管至于冰水浴中,分别精密加入16%香草醛醇溶液0.5mL,77%硫酸5mL摇匀,将试管置60℃恒温水浴中加热10min,再置冰水浴中冷却15min于544nm波长测定光密度,另外平行的作一空白液进行校正[3],按二者光密度值计算三七总皂甙含量。

4 结果

通过2.1的实验,总结经验得出用冷浸法、回流法、微波法对三七及竹节参中皂甙的提取。

表1 提取三七根皂甙的方法比较

从表1中的数据可以看出,冷浸法提取中,浸泡36h比浸泡24h提取率高。而微波法提取比冷浸法提取率高,并且,微波法较省时。

表2 不同方法对竹节参皂甙的比较

从表2中数据可看出;采用微波、回流和冷浸提取法,在相同处理条件下,各组皂甙得率相差不太明显。微波、回流和冷浸法提取竹节参皂甙得率分别为:3.40%、3.20%、2.71%、茎叶得率分别为:3.28%、3.05%、2.02%。其中,微波法和回流法提取率明显比冷浸法高。并且,从所用的时间看冷浸法提取时间为36h,回流法提取时间为12h,微波法提取时间为10min。从提取所用时间及操作看,微波法提取以乙醇为溶剂,因此提取成本低,并且安全快捷、无污染等多种优点。

5 结论

本研究表明:采用微波、回流和冷浸法提取,微波法具有比传统回流提取方法更高的提取率,具有简便、省时等特点,更安全,无污染,可替换回流提取。并且从实验结果可看出竹节参中皂甙含量与三七中皂甙含量相差不大。因此,竹节参可作为一种新的药用资源进行大面积的人工种植与开发利用。

[1]黄桂宽,胡细莲,秦冰冰,等.三七茎叶皂甙提取与纯化的微型实验研究[J].广西师范大学学报,2000,6(S1):106-107.

[2]潘俊杰,郑琴,杨明.三七中三七总皂苷的提取、分离纯化及分析方法的研究进展[J].世界科学技术-中医药现代化,2007,12(6):77-82.

[3]张晶,陈全成,弓晓杰,等.不同提取方法对人参皂甙甘提取率的影响[J].吉林农业大学学报,2003,25(1):71-73.