灯盏花素对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾功能的影响

孙洁敏 浙江医院内分泌科 杭州 310013

姚美芬 李璐璐 李 琦 沈建国 浙江大学医学院附属第一医院内分泌科

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最为严重的并发症之一，其发病机制尚未完全阐明。灯盏花（Erigeronbreviscapus，EB）又名灯盏细辛，为菊科植物短葶飞蓬的全草，具有扩张血管，降低血液黏度，增加血流量，改善局部供血，抑制氧化应激，增强机体的抗氧化作用。本实验采用单次腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）诱发大鼠糖尿病模型，继而应用灯盏花素治疗，观察其对大鼠肾功能的保护作用，报道如下。

1 实验材料

SD雄性大鼠27只，体质量230～280g，由浙江大学医学院附属第一医院动物实验室提供。灯盏花素片（上海雷允上药业有限公司）；链脲佐菌素（STZ）（购自美国sigma公司）。

2 实验方法

2.1 分组与造模 27只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（C组），糖尿病模型组（D组），糖尿病灯盏花素治疗组（DD组），各9只。适应性饲养10天后禁食12h，D组和DD组予一次性腹腔注射65mg/kg链脲佐菌素（STZ），C组予一次性腹腔注射同等剂量的柠檬酸钠缓冲液，72h后尾静脉取血测血糖，血糖＞167.7mmol/L则造模成功。

2.2 给 药 DD组每天给予灯盏花素混悬液20mg（kg·d）灌胃；D组和C组每天给予同等剂量的生理盐水灌胃；每隔2周称体重测血糖1次。8周后，腹腔注射戊巴比妥钠40mg（kg），麻醉动物后，由下腔静脉抽血3～5mL，离心后取血清，测定血糖、血尿素氮、肌酐。搞取左肾称重，将右肾组织经HE染色切片，置光学显微镜下，每个标本随机选择5个低倍镜视野（×100）观察，比较形态学改变。

3 实验结果

3.1 三组大鼠体质量与血糖比较 三组大鼠成模时的体质量差异无统计学意义（P＞0.05）；DD组和D组大鼠血糖与正常对照组大鼠比较，差异有统计学意义（P＜0.01），DD组与D组间差异无统计学意义（P＞0.05）；成模 2、4、6、8周时，DD 组、D 组与 C 组大鼠的体质量、血糖比较差异均有统计学意义（P＜0.01），DD与D组大鼠体质量、血糖比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表 1。

3.2 三组大鼠肾脏肥大指数及血肌酐、尿素氮比较糖尿病组大鼠与正常大鼠相比肾脏肥大指数（以肾重（mg）/体质量（g）表示）升高，血尿素氮、肌酐升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；经灯盏花素治疗8周后，血肌酐较前有所下降，但无统计学意义（P＞0.05），尿素氮较前下降，差异有统计学意义（P＜0.01），见表2。

表1 三组大鼠成模用药后体质量、血糖比较（）

表1 三组大鼠成模用药后体质量、血糖比较（）

注：与C组比较，△△P＜0.01；#D组大鼠于第5周及第7周各死亡1只

组 别 观察时间/周 n/只 体质量/g 血糖/(mmol/L)DD 组 0 9 297.86±42.95 27.77±3.46△△D 组 9 295.44±13.11 30.23±3.06△△C 组 9 302.00±14.37 5.62±0.24 DD 组 2 9 315.00±47.69△△ 31.11±4.03△△D 组 9 285.11±14.72△△ 29.50±2.77△△C 组 9 348.22±28.88 6.43±0.50 DD 组 4 9 310.86±49.10△△ 30.36±4.12△△D 组 8# 281.88±16.17△△ 32.20±2.59△△C 组 9 388.89±36.78 5.95±0.42 DD 组 6 9 314.86±29.59△△ 31.65±1.46△△D 组 9 298.84±23.04△△ 32.14±2.59△△C 组 9 421.44±35.42 5.95±0.33 DD 组 8 9 291.00±30.19△△ 30.98±3.26△△D 组 7# 281.10±19.99△△ 31.30±1.52△△C 组 9 453.31±50.53 6.28±0.40

表2 三组大鼠肾脏肥大指数、血肌酐和血尿素氮比较（）

表2 三组大鼠肾脏肥大指数、血肌酐和血尿素氮比较（）

注：与 C 组比较，△△P＜0.01；与 D 组比较，▲▲P＜0.01；

组别n/只肾重/体质量/（mg/g）血肌酐/（μmol/L）血尿素氮/(mmol/L)DD 组 9 7.11±1.15△△ 41.34±6.87△△ 13.23±1.30△△▲▲D 组 7 7.09±0.92△△ 46.00±9.27△△ 18.47±4.25△△C 组 9 3.42±0.34 12.75±1.26 6.88±0.85

3.3 三组大鼠肾组织形态学改变比较 HE染色，光镜下显示，D组与C组相比肾小球体积显著增大，肾小球毛细血管壁狭窄甚至闭塞，并可见部分肾小管上皮细胞空泡变性，而DD组与D组比较肾小球体积有所减小，血管襻开放，见图1。

4 讨 论

近年研究表明，DN早期主要表现为肾小球高滤过，肾小球体积增大，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）堆积，肾小球基底膜增厚及微量蛋白尿，晚期出现肾小球硬化、肾功能衰竭，其发生发展与血糖水平密切相关。

图1 三组大鼠肾组织形态学比较（×100）

灯盏花素又名灯盏细辛，为菊科植物短葶飞蓬的全草，为一种植物药，其有效成分为二咖啡酰奎宁酸、焦炔康酸、原二茶酸等黄酮类化合物[1]，具有活血化瘀、通络止血等作用，广泛用于中风后遗症、冠心病等。临床应用发现灯盏花素能减少DN尿白蛋白含量，对早期糖尿病肾病疗效较好[2]。灯盏花素除了扩张血管，降低血液黏度，增加血流量，改善局部供血，抑制血小板聚集等功能外，还能通过抑制氧化应激和增强机体的抗氧化作用来防治糖尿病肾病。研究显示，灯盏花素能抑制血NF-κB及TGF-β水平增加，阻断肾小球硬化和肾间质纤维化过程，促进尿肌酐排泄，降低血尿素氮、肌酐浓度，延缓肾功能衰竭的发展、抑制肾脏肥大，并且具有抗氧化及抑制PKC活性，减少糖尿病大鼠肾小球及肾小管间质的巨噬细胞浸润作用[3]，从而防治糖尿病肾病的发生发展。

本实验结果显示，糖尿病大鼠体重减轻，肾脏肥大指数升高，肾小球系膜增生，血管襻关闭，血肌酐及尿素氮水平升高，证明实验中糖尿病大鼠存在肾脏病变。而用灯盏花素治疗糖尿病大鼠8周后，肾小球体积有所减小，系膜增生及血管襻关闭有所减轻。血尿素氮水平明显下降，具有统计学意义（P＜0.05）。血肌酐有所下降，但无统计学意义（P＞0.05），可能与灯盏花素治疗剂量不足及治疗时间短有关。本实验结果同时显示灯盏花素对血糖无影响。

［1］Wang M，Xie C，Cai RL，et al.Studies on antioxidant activities of breviscapine in the cell-free system［J］.Am J Chin Med，2008，36（6）：1199-1207.

［2］Ranjan Sen.，David Baltimore.Multiple Nuclear Factors Interact with the Immunoglobulin Enhancer Sequence［J］.Cell，1986，46（5）：705-716.

［3］Xiang Ming Qi，Guo Zhong Wu，Yong Gui Wu，et al.Renoprotective Effect of Breviscapine through Suppression of Renal Macrophage Recruitment in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats［J］.Nephron Exp Nephrol，2006，104（4）：147-157.