大连汉族慢性肾小球肾炎尿毒症与HLA-DRB1的相关性分析

官琳妹，蔡 鹏，汪 艳，于卫健

(1. 大连市友谊医院 检验科，辽宁 大连 116001；2. 辽宁国际旅行卫生保健中心 检验科，辽宁 大连 116001；3. 大连市红十字血液中心，辽宁 大连 116001)

人类白细胞抗原(HLA)，即人类主要组织相容性复合物(MHC)，是调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统[1]。尿毒症是由各种原发或继发的肾脏疾病所引起。研究显示，成人慢性肾小球肾炎与HLA系统免疫机制强相关，HLA系统某些基因可能是中国人群易感慢性肾小球肾炎的风险因子[2-3]。本研究对大连市友谊医院511例等待肾移植的的慢性肾小球肾炎尿毒症患者HLA-DRB1基因分型与中国造血干细胞库大连HLA实验室健康捐献者的基因分型进行对比分析，探讨大连汉族慢性肾小球肾炎尿毒症与HLA-DRB1等位基因的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象

病例组：2003年9月-2009年5月在大连市友谊医院等待肾移植的慢性肾小球肾炎尿毒症患者511例，均为汉族。其中，男性332例，女性179例，年龄18～61岁，平均39岁。 对照组：中国造血干细胞库大连HLA实验室健康捐献者共9678例，男性5243例，女性4435例，年龄22～58岁，也均为汉族。

1.2 试剂和仪器设备

Taq酶(大连 Takapa公司)， ABDR ssp UniTray Kit (美国DYNAL公司)，QIAamp DNA Blood Mini kit (美国 QIAGEN公司)，紫外透射分析仪 (上海天能科技有限公司)，ABI-9700PCR仪(美国ABI公司 )。

1.3 标本采集

清晨空腹抽取4 mL静脉血，枸橼酸钠抗凝后充分混匀。

1.4 DNA提取和扩增

采用美国 QIAGEN公司的QIAamp DNA Blood Mini kit试剂盒，严格按照说明书操作，提取DNA。

运用序列特异性引物聚合酶链反应法，采用美国DYNAL公司ABDR ssp UniTray Kit分型试剂盒，每孔加入配制好的反应体系10 μL，密封好后将微孔板放入ABI-9700PCR仪，按说明书调整循环次数和温度后，进行扩增。

1.5 电泳及成像

取扩增产物加入2%的琼脂糖凝胶孔中 ，以100 V电压电泳5 min后，将凝胶放入紫外透射分析仪下观察结果，记录下特异性条带对应的号码并拍照存入计算机，利用试剂盒提供的分析软件进行分析，即可获得HLA-DRB1基因分型结果。

1.6 统计学方法

选择HLA的特异性计数作为计算指标，计算基因频率，利用SPSS 17.0 软件用χ2检验进行统计学分析，P<0.05为差异有统计学意义。针对差异有显著性意义的结果，通过描述统计中的交叉表分析，实现相对危险指数RR的计算。

2 结 果

对511例慢性肾小球肾炎尿毒症患者与健康人的基因分布频率比较后发现：HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07、HLA-DRB1*12、和HLA-DRB1*16差异具有显著性意义(P<0.05)，余者差异无显著性意义。其中，病例组的HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和 HLA-DRB1*12的基因频率明显高于对照组，而HLA-DRB1*16的基因频率明显低于对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 511例慢性肾小球肾炎尿毒症患者与健康人差异具有显著性意义的HLA-DRB1分析比较

3 讨 论

HLA 即MHC是位于第6号染色体短臂上的一个紧密连锁基因群，相应DNA片段长度是3600 kb，是迄今为止人类基因组中最复杂的遗传多态性和免疫多态性基因体系。至2010年5月已报道有4000多个等位基因，并且仍在不断发现新的基因[4-5]。而且人们发现HLA具有明显的种族、地域差异，是疾病易感性个体差异的主要基因系统。曾建业等[6]提出，在不同种族、地区、人群中HLA基因型的分布不同或HLA分子与环境因素复杂的相互作用产生了疾病的不同致病过程。

近年来，国内外已有许多学者研究了各类疾病与HLA 的相关性[7-9]。HLA基因可以分为Ⅰ类(HLA-A、B、C),Ⅱ类(HLA-DR、DQ、DP)，Ⅲ类(C4A、C4B、C2、Bf)等补体成分。HLAⅠ类抗原在肾脏所有组织均表达，HLAⅡ类抗原仅在肾小管、肾小球、肾内皮细胞等组织表达。目前，国内外有许多关于HLA与肾脏疾病的关系的报道，但慢性肾小球肾炎尿毒症与HLA-DRB1基因的相关性报道还不多见。本研究选取511例大连汉族慢性肾小球肾炎尿毒症患者和健康人的Ⅱ类抗原中的HLA-DRB1基因分型进行对比分析，探求其相关性。结果提示，大连汉族慢性肾小球肾炎尿毒症患HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和 HLA-DRB1*12的基因频率明显高于对照组(P<0.05)，说明HLA-DRB1*04、HLA-DRB1*07和 HLA-DRB1*12可能是慢性肾小球肾炎尿毒症的易感基因，HLA-DRB1*16的基因频率明显低于对照组(P<0.05) ，说明HLA-DRB1*16可能是慢性肾小球肾炎尿毒症保护基因。

参考文献：

[1] 谭建明，周永昌，唐孝达.组织配型技术与临床应用[M].北京：人民卫生出版社，2002.495-643.

[2] 肖露露，于立新，陈洪涛，等.慢性肾小球肾炎与HLA免疫遗传强关联[J].中华泌尿外科杂志，1999，20 (10)：592-594.

[3] 徐红梅.HLA Ⅱ类基因与肾小球疾病相关性的研究进展[J].泸州医学院学报，2002，25(3)：262-264.

[4] Nie XM， Fang YH， Zhang Y， et al. A novel HLA-DRB1 allele DRB1 1219 was identified by sequence-based typing in a Chinese leukaemia family[J].Tissue Antigens，2007，74(3)：343-357.

[5] Zhuang YL， Song YH， Zhang Y， et al. A novel HLA-B allele B*5535 was identified by sequence-based typing in a Chinese individual [J].Tissue Antigens， 2005，75(8)：174-188.

[6] 曾建业，何凤屏，叶学和，等.广西沿海地区Graves病与HLA-DQA1DQBIDRB1*09等位基因的相关性研究[J].国际检验医学杂志，2009，30(11)：1049-1054.

[7] 主改侠，刘莹，张飞跃.卵巢浆液性上皮癌中HLA-DR的表达结合血清Ca125对评价肿瘤生物学恶性度的意义[J].第四军医大学学报，2009，30(7)：640-642.

[8] 廖佩花.HPV16E6、HLA-DR9与新疆哈萨克族人群食管癌交互作用的1∶2病例对照研究[J].中华流行病学杂志，2009，30(9)：951-954.

[9] 刘丹，刘辉，史炼钢，等.人体部分实体肿瘤与HLA-DR基因多态性的关联性[J].国际检验医学杂志，2009，31(11)：1210-1211.