激素剂量重复超排和季节对利木赞牛超数排卵的影响

王 军,张嘉保,吕文发

(1.辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁 锦州 121001;2.吉林大学农学部实验动物中心,吉林 长春 130062;3.吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118)

利木赞牛自从1974年引入中国后,其以难产率低、后期生长快和产肉量大等优点备受欢迎。近年来通过杂交改良当地黄牛获得了很大的效益,但是所引进的母牛绝大多数通过自然繁殖扩大纯种群,纯繁效率低,使得利木赞种牛存留的数量少,并且分布也很分散[1]。因此,快速扩大纯种利木赞牛数量是当前肉牛业发展亟待解决的问题之一。胚胎移植技术是目前加快良种繁育的最有效手段。超数排卵技术是胚胎移植的关键技术之一,超数排卵效果的好坏直接影响着获得胚胎的质量和数量。目前,有关利木赞牛超数排卵的报道较少,本试验研究了激素剂量和季节对利木赞牛超数排卵效果的影响,为获得高效稳定的利木赞牛超数排卵技术奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物 选择体质健康、发情周期正常的利木赞母牛。

1.2 主要药品 Folltropin-v:加拿大生产的FSH产品,400 mg/支,20 mL配比液;氯前列烯醇(PGF2α):上海计划生育科学研究所生产;杜氏磷酸盐缓冲溶液(本实验室自制)。

1.3 超数排卵方案 在母牛发情周期第8天通过直肠检查法确定供体牛卵巢上确有黄体存在,在母牛发情周期的第9天开始分别肌肉注射总剂量为340 mg(n=9)、300 mg(n=9)和 260 mg(n=7)的Folltropin-v,每天上午、下午各注射 1次,连续4 d采用剂量递减法注射,注射FSH的第3天(第5、6次)同时注射 PGF2α,上午、下午各注射 0.4 mg,发情10～12 h后给母牛进行第一次人工授精,间隔12 h进行第2次人工授精。

第1次超数排卵43 d后,用总剂量为300 mg的Folltropin-v对所有的供体牛进行第2次超数排卵,超数排卵程序与第1次相同。

1.4 胚胎采集 以发情当天为第0天,在发情AI后第7天用非手术法进行采卵,利用德式两通冲卵管插入一侧子宫角并固定气囊开始冲洗,每次用25～35 mL,分多次冲洗子宫角,同时手通过直肠按摩子宫角,每侧子宫角总用量为250 mL,冲完一侧后换到另一侧冲洗,两侧冲洗完毕后,向子宫内投入一定量的抗生素和PGF2α。

1.5 胚胎质量评定 将回收的冲卵液放到培养皿中,在体视显微镜下找到胚胎后,转移到小培养皿中,并根据形态学标准评定胚胎质量。将胚胎分为A、B、C、D级,其中A 、B、C 级为可用胚胎 。

1.6 统计分析 试验结果采用SPSS 16.0进行统计分析。

2 结果

2.1 激素剂量对超数排卵效果的影响 挑选25头利木赞供体母牛,随机分为A、B、C三组,分别注射总剂量为340 mg(n=9)、300 mg(n=9)和260 mg(n=7)的Folltropin-v进行超数排卵,第1次超数排卵结束43 d后采用300 mg的总剂量对所有供体牛进行第2次超数排卵,超数排卵结果见表1。从表1可以看出,对于第1次超数排卵的结果,A组和B组获得的可用胚数显著高于C组(P＜0.05),而A组和B组之间差异不显著,说明340 mg和300 mg的Folltropin-v能获得相同的超数排卵效果,且明显比300 mg效果好。对于两次超数排卵,A组第2次超数排卵获得的可用胚数明显低于第1次(P＜0.05),B组两次超数排卵之间差异不显著,C组第2次超数排卵获得的可用胚数显著高于第1次(P＜0.05)。对于A、B组和C三组,两次超数排卵获得可用胚总数,A组与B组差异不显著,C组显著低于A组和B组(P＜0.05)。

2.2 季节对超数排卵效果的影响 对75头供体牛在春季、秋季和冬季以总剂量为300 mg的 Folltropin-v进行超数排卵,超数排卵结果见表2。从表2可以看出,春季超数排卵效果明显低于秋季和冬季(P＜0.05),而秋季和冬季之间差异不显著。

3 讨论

3.1 激素剂量对利木赞牛超数排卵效果的影响激素的剂量对于超数排卵效果具有很大的影响,激素剂量过高会对胚胎和卵子有毒害作用,反之,剂量过低,不能有效地促进较多量的卵母细胞同时发育,也就达不到好的超数排卵效果。因此想要获得良好的超数排卵效果,必须选择合适的激素剂量。本试验对A、B组和C三组供体牛的第1次超数排卵研究表明,340 mg和300 mg的Folltropin-v能获得相同的超数排卵效果,且明显比260 mg效果好,这说明260 mg的剂量偏低,不能充分发挥超数排卵的优越性。而43 d后,用总剂量为300 mg的Folltropin-v对A、B、C三组供体牛进行第2次超数排卵时,发现两次超数排卵获得可用胚胎总数,A组和B组差异不显著,但明显高于C组。这表明300 mg的Folltropin-v是利木赞牛超数排卵的最佳剂量,且这个剂量不影响重复超数排卵(第2次)的效果;而A组的供体牛用340 mg超数排卵后,再用300 mg的剂量进行超数排卵,反而降低了超数排卵效果,这说明340 mg的剂量虽然不影响第1次超数排卵的效果,但是可能会影响紧接着的下一次超数排卵效果,其原因还有待于深入研究。对于本研究,虽然A组(340 mg)和B组(300 mg)两次超数排卵获得的可用胚胎总数差异不显著,但从实际应用角度来讲,在不影响超数排卵效果的情况下,减少用药量对于降低胚胎成本是有益的,有利于胚胎移植的推广和应用。国外学者的一些研究也表明适当降低激素剂量不会影响超数排卵效果,Martens等报道适当减少 FSH产品的剂量,不影响超数排卵效果[2],Sugano等的研究也发现注射16 mg和24 mg的FSH产品获得的可用胚数差异不显著[3]。

表1 激素剂量对利木赞牛超数排卵效果的影响

表2 季节对利木赞牛超数排卵效果的影响

3.2 季节对利木赞牛超数排卵效果的影响 关于季节对牛超数排卵效果影响的研究,目前结果不一。和占星认为季节对可用胚数的影响不显著[4],王木等研究表明季节对南阳牛超数排卵效果无明显影响[5]。Barati等研究也发现不同季节对牛超数排卵获得的可用胚胎数差异不显著[6]。而吴亦方等报道季节对超数排卵效果有显著影响,且春季获得的可用胚数明显低于秋季和冬季[7]。徐照学等也认为秋、冬季超数排卵效果好于春季[8]。本试验研究发现季节对利木赞牛超数排卵效果有显著影响,春季超数排卵效果显著低于秋季和冬季,这些研究结果的差异可能是由品种、饲养管理条件和超数排卵方案等因素造成的。

4 结语

4.1 激素剂量对利木赞牛超数排卵效果有显著影响,剂量过高可能会影响下次超数排卵效果,使用Folltropin-v对利木赞牛超数排卵的最佳剂量为300 mg。

4.2 季节对利木赞牛超数排卵效果有显著影响,且春季获得的可用胚数显著低于秋季和冬季,秋季和冬季之间差异不显著。

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[3]Sugano M,Watanabe S.Use of highly purified porcine FSH preparation for superovulation in Japanese black cattle[J].T he Journal of Veterinary Medical Science,1997,59(3):223-225.

[4]和占星,松崎伸生.不同超排处理的效果及可用胚数的影响因素分析[J].黄牛杂志,2000,26(5):12-15.

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[6]Barati F,Niasari-Naslaji A,Bolourchi M,et al.Superovulatory response of Sistani cattle to three different doses of FSH during winter and summer[J].Theriogenology,2006,66(5):1149-1155.

[7]吴亦方,高红梅,王海,等.多种因素对奶牛超数排卵效果影响的研究[J].中国畜牧杂志,2007,43(7):10-12.

[8]徐照学,李峰,王二耀,等.牛超数排卵技术的研究[J].黄牛杂志,1999,25(3):17-18.