莲房花青素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

梁慧敏 时小燕 随裕敏 朱 斌

原花青素是一种广泛存在于植物内的酚类聚合物，在葡萄皮和籽内含量最高，有很强的生物学活性及药理作用［1］。有报道，原花青素对乳腺癌、肺癌及白血病等肿瘤有显著的抑制作用［2］。而对莲房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus，LSPC)的研究较少。目前发现LSPC有抗肿瘤作用，为进一步探讨LSPC抑制细胞增殖的机制，本研究探讨了LSPC是否能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡，以期为临床应用提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 材料、化学试剂和仪器 人肝癌细胞 SMMC-7721购自中国医学科学院基础医学研究所;胎牛血清购于Gibco公司;RPMI 1640购于Gibco公司;LSPC由本实验室自制，纯度＞98%为棕褐色粉末;DMSO、MTT均购自Promega公司;其他试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 MTT实验 选择对数生长期SMMC-7721细胞，将浓度为1×105/ml细胞接种于96孔板(200μl/孔)。24 h后换含不同浓度(0.025，0.25，2.5，25，250 μg/ml)LSPC 培养液200 μl，分别于24，48 h后弃上清，加5 mg/ml MTT液20 μl/孔，4 h后弃上清，加DMSO 150μl/孔，振摇待蓝色晶体溶解，测定570 nm吸光值(A值)，空白孔调零。设阴性孔(加200 μl含细胞完全培养基)和空白孔(只加200μl完全培养基)，每组浓度设3个平行孔，取均值。按下列公式计算抑制率:

细胞增殖抑制率/%=(对照组A值-处理组A值)/(对照组A值-空白组A值)×100%。

2 结果

不同浓度LSPC对SMMC-7721细胞增殖的影响 由图1可知，LSPC作用24 h，低浓度组(0.025μg/ml)细胞增殖抑制率与对照组相比，差异无统计学意义;中高浓度(0.25～250 μg/ml)组显著高于对照组;LSPC作用48 h，试验组细胞抑制率均显著高于对照组。

图1 LSPC对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制率的影响

3 讨论

研究发现，一些中药复方或单味药有效成分有诱导肿瘤细胞凋亡作用［3］。原花青素是植物中多酚类化合物，也是一种氧自由基清除剂和脂质过氧化抑制剂［4，5］。莲房中含蛋白质、脂肪、糖、维生素 B2及微量莲子碱等，有“化瘀止血”功效。

本文用MTT法观察LSPC对SMMC-7221细胞增殖的抑制作用，发现LSPC在0.25～250μg/ml对SMMC-7221细胞凋亡有显著的抑制(P＜0.01)，且细胞抑制率呈浓度、时间依赖，与文献报道LSPC的作用类似［6］。至于LSPC诱导SMMC-7721细胞凋亡的具体过程，及哪些分子参与，还需进一步证实。本研究发现了LSPC能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长并诱导其凋亡，为传统中药在肿瘤治疗研究和应用开拓新思路。

［1］ Bagchi D.Oxygen free radical scavenging abilities of Vitamins C and E，and a grape seed Proanthocyanidin extract in vitro.Res commun Mol Pathol Pharmacol，1997，95(21):179-189．

［2］ Lotito SB，Actis Goretta L.Influence of oligomer chain length on the antioxidant activity of procyanidins.Biochem Biophys Res Commun，2000，276(3):945-951．

［3］ Zhou ZH，Song M Z，Yu E X，et al.Progress on apoptosis induction of cancer ceils by chinese traditional herbs.Foreign Med Sci-Tradit chin Med，1998，20(3):3-5．

［4］ Packer L，Rimbach G，Virgili F.Antioxidant activity and biologic properties of a procyanidin-rich extract from pine(Pinus maritima)bark，pycnogenol.Fre Rad Biol Med，1999，27(56):704-724．

［5］ Sun Z G，Zhao WZ，IU Y，et al.Inhibitory effects of proanthocyanidins from the seed of Vitis vinifera on forming of micronucleus of mouse bone marrow polysomic red blood cells induced by cyclophosphamide and study of its mechanism.Lisgizhen Med MaterⅣd Res，2000，11(5):386-387．

［6］ Meeran SM，Katiyar SK.Cell cycle control asa basisfor cancer chemoprevention through dietary agents.Front Biosci，2008，13:2191-2203.