自体培养黑素细胞移植联合窄谱中波紫外线治疗白癜风疗效观察

徐伟爱 ，吴辛刚 ，洪为松 ，傅丽芳 ，尉晓冬 ，许爱娥

（1.杭州市余杭区第五人民医院，余杭 311100；2.杭州市第三人民医院，杭州 310009）

白癜风是一种常见的色素减退性疾病，目前该病的发病机制尚不明确，治疗困难，严重影响身心健康[1-3]。对于常规治疗失败（如局部糖皮质激素、免疫调制剂、补骨脂类药物等）的稳定期白癜风患者，应用外科手段治疗是很有必要的。自体纯培养黑素细胞移植是治疗稳定期白癜风的有效手段，近年来国内外已有大量的文献报道，体外扩增培养的细胞能够为移植提供更多的黑素细胞[6-10]。NB-UVB是治疗白癜风的一种有效且具有较好耐受性的方法[11-13]。体外研究证实NB-UVB能够直接刺激培养黑素细胞的迁移和增殖，为NB-UVB治疗白癜风的疗效提供理论基础[14]。为此在本研究中我们采用开放性对照研究来评估自体纯黑素细胞移植联合NB-UVB治疗白癜风的疗效，结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 44例患者（男25例，女19例），年龄 16～48岁[平均（24.64±10.09）岁]，病程 6 个月～25 年。纳入标准：VIDA（白癜风活动程度评分）>+1；皮损稳定至少1年，无同形反应，对常规局部和系统的治疗无反应，无瘢痕体质以及无严重的自身免疫性疾病[15]。所有患者移植疗效观察至少6个月。治疗前以及每次随访均拍下皮损照片，对比前后照片来评估移植疗效。

1.2 治疗方法

1.2.1 供皮部位处理 生理盐水常规消毒供皮部位，将皮肤分离仪器在正常腹部上进行负压吸引起疱，压力为-300mmHg，每 5～10min观察 1次，时间约为1～2h，直至出现大疱，停止吸引。剪下疱壁，置于Hanks’液中，立即送入细胞实验室分离细胞。

1.2.2 细胞培养 分离和培养细胞的方法如文献所述[6]。

1.2.3 受皮部位处理 移植前2～4h在受皮部位涂抹利多卡因乳膏。用70%的乙醇消毒受皮部位，超脉冲CO2激光（能量225mJ/s，速度 30～50Hz/s）磨削皮损表面。有4例对疼痛敏感的患者，应用1%利多卡因局部注射。

1.2.4 移植 将黑素细胞种植在激光磨削的部位上。然后用凡士林纱布包扎，同时铺上浸有F12溶液的纱布，最后用灭菌纱布和胶带包扎。嘱咐患者术后回家避免过度活动、摩擦，以免影响疗效。术后10 d祛除包扎。所有移植患者均在杭州市第三人民医院白癜风治疗中心完成黑素细胞移植。

1.2.5 照光（NB-UVB） 移植后2周，嘱所有患者在余杭区第五人民医院进行NB-UVB治疗，1周2次，连续3个月。起始剂量0.40 J/cm2，每个疗程根据患者的反应和耐受能力增加0.10 J/cm2，但不超过3 J/cm2。

1.3 疗效评估 NB-UVB治疗后10 d、1个月、2个月、3个月、六个月各评估1次移植疗效，评估复色面积。治疗效果分为优秀>90%；良好50%～89%；一般20%～49%以及无效<20%[6]。

1.4 统计学分析 采用SPSS13.0软件进行统计分析。

2 结果

见图1和图2。我们发现所有患者的复色模式均为弥散型，这与常规NB-UVB治疗的点状型复色模式有所不同，说明NB-UVB直接刺激了接种的黑素细胞的增殖和迁移。两组获得良好以上的复色效果的患者分别为86.9%、76.2%,两组之间具有明显的统计学差异（P<0.05）；两组之间的平均复色率分别为78.9%、70.0%，两组间的Mann-Whitney U检验具有明显的统计学差异（P<0.05），见表1。两组之间的治疗部位的疗效比较，皮损位于面颈部获得良好以上复色率的患者分别为92.3%、90.9%，两组间对比无明显统计学意义（P>0.05）；皮损位于躯干部获得良好以上复色率的患者分别为80.0%、60.0%，两组间对比有显著的统计学差异（P<0.05），见表2。

图1 治疗前白斑约60cm2

图2 治疗后复色基本痊愈

表1 两组治疗白癜风的疗效情况 例（%）

表2 两组治疗不同部位白癜风的疗效情况 例（%）

在治疗过程中所有患者均未出现严重的并发症，仅出现皮肤灼热感（1例）、红斑（3例）、色素沉着（4例）等。治疗部位色素沉着在随访6个月中逐渐减轻，且与周围正常皮肤相接近。

3 讨论

白癜风的治疗仍是一个医学难题，虽然现今有各种各样的方法在治疗白癜风上是有效，但仍有大量的患者复色失败。对于常用疗法治疗失败的稳定期患者，外科治疗是有必要的，尤其是暴露部位皮损。纯黑素细胞培养移植通过在体外扩增黑素细胞，进而获得更多的黑素细胞，为白癜风的复色提供新的色素来源。体外黑素细胞的扩增能够为移植提供更多的黑素细胞，小面积（2cm2）的正常吸疱表皮所培养出的细胞能够治疗较大面积的白癜风皮损（达500 cm2）[7-10]。以往的研究表明NB-UVB是治疗白癜风的一种有效且能很好耐受的方法[7-9]，NBUVB能够刺激培养黑素细胞的增殖和迁移，为NBUVB有效治疗白癜风提供理论基础[10]。

本研究中我们首次观察自体纯培养黑素细胞移植治疗后联用NB-UVB治疗白癜风的疗效比较。在治疗期间，我们发现所有患者的复色模式均为弥散型，这与NB-UVB治疗的复色模式（点状型）有所不同——这是由于NB-UVB刺激毛囊周围黑素细胞的迁移和增殖所致，因此我们认为NB-UVB能够直接刺激移植部位黑素细胞的迁移和增殖[16]

本研究发现自体纯培养黑素细胞移植联合NB-UVB治疗组复色率（50%以上复色率86.9%）比单用黑素细胞移植治疗组（50%以上复色率76.2%）的复色率明显增高，两组间对比有统计学意义（P<0.05）。我们同时观察到两组之间面颈部获得良好以上（>50%）复色率的患者分别为92.3%、90.9%，两组间对比无统计学差异。两组之间躯干部获得良好以上（>50%）复色率的患者分别为80.0%、60.0%，两组间对比有明显的统计学差异（P=0.039）。我们认为面颈部位于光暴露部位，对光不敏感，容易形成光耐受性，因此两组之间面颈部的疗效没有明显的差异；而躯干对光敏感，因此联合NB-UVB的效果优于不联用组。

总之，我们的研究表明自体纯培养黑素细胞移植联合NB-UVB治疗白癜风是一种有效的方法，联合NB-UVB能够提高黑素细胞移植的疗效，尤其是对于位于躯干部皮损。

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