HPLC法测定刺五加软胶囊中刺五加苷E的含量

叶 新 崔玉海 李绍铭 孙玉艳

（哈尔滨仁皇药业有限公司；中药提取物及中药创新药物研究黑龙江省重点实验室；黑龙江省刺五加研究所，黑龙江 哈尔滨 150300）

刺五加软胶囊是由刺五加浸膏、精制玉米油等成分混合制成的中药软胶囊，具有益气健脾、补肾安神的作用。临床用于体虚乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多梦。本文参考有关文献[1～4],建立了高效液相色谱法（HLPC）测定刺五加软胶囊中刺五加苷E的含量方法,实验结果表明，该法操作简便、准确、重现性好，可作刺五加软胶囊中刺五加苷E的质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1100型高效液相色谱仪，紫外检测器；TU-1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；十万分之一天平(梅特勒)。

1.2 试药

刺五加苷E对照品 (中国药品生物制品检定所提供 批号111713-200502供含量测定用)；刺五加软胶囊（自制批号:20100301、20100302、20100303规格为0.3g)；乙腈为色谱纯,水为去离子水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)；乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85）；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；柱温：室温；进样量：10μl，理论板数以刺五加苷E峰计不得低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取刺五加苷E对照品5.08mg，置于50ml量瓶中，先用2ml50%甲醇溶解，再加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配成浓度为101.6μg/ml的甲醇溶液。再精密量取该甲醇溶液5ml置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成含刺五加苷E50.8μg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品10粒，除去胶皮取内容物，精密称定，取相当于2粒的量，精密称定。置250ml三角瓶中，加10ml正已烷，混合均匀后移入分液漏斗中，依次用 20ml、10ml、10ml乙腈提取三次，合并乙腈层于蒸发皿上蒸发至干，用1ml甲醇溶解，取SPE-C18小柱（依次用10ml甲醇和10ml纯化水洗涤，吹干），上样，用甲醇洗脱至25ml容量瓶中，控制流速在1ml/min，定容，即得。

2.4 线性关系考察

线性关系的考察 取刺五加苷E对照品用甲醇制成101.6μg/ml的溶液,精密量取此溶液 1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分别置于 10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,记录色谱图,以标准溶液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=43.325X+56.524 r=0.9998。

结果表明,刺五加苷E在10.16μg/ml～91.44μg/ml范围内有良好的线性关系。

2.5 回收率试验

采用加样回收法,取同一批已知含量样品6(批号:20100301)份，每份精密称定相当于1粒内容物的样品，再加入刺五加苷E对照品溶液10ml（50.8μg/ml），按照2.3项供试品制备方法进行测定，计算平均加样回收率，结果平均加样回收率为98.06%，RSD为1.26%，表明准确度良。计算每份的回收率,结果见表1。

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2.6 精密度试验

取同一对照品溶液,进样10μl,重复6次进样,依法测定，其峰面积的RSD=0.41%(n=6)。结果表明，仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验

取样品(批号2010301)的供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、6、8 小时后测定,峰面积积分值基本不变,RSD=0.74%(n=5)。结果表明，在室温条件下，供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

取同一批号的样品(批号20100301)6份，按照供试品含量测定方法进行操作，结果平均含量为0.652mg，RSD=0.62%(n=6)，表明本含量测定方法的重复性良好。

2.9 样品含量测定

分别取本品三批（20100301、20100302、20100303），按供试品溶液制备方法制备并测定，结果见表2。

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3 讨论

3.1 通过紫外扫描,刺五加苷E在210nm处有最大吸收,故选择210nm为检测波长。

3.2 由于生产中采用精制玉米油为溶剂，在检验过程中对色谱柱污染比较严重。针对这种情况，我们先采取正已烷-乙腈萃取的方法去除部分油脂，再采用固相萃取法用SPE-C18对油脂进行吸附，从而达到去除油脂对色谱柱污染的目的。

3.3 先后试用了三种流动相系统:甲醇-水、甲醇-水-磷酸和乙腈-水-磷酸,结果乙腈-水-磷酸系统分离效果较好。通过乙腈-0.1%磷酸溶液 10∶90、15∶85、20∶80、25∶75 不同比例的选择,确定15∶85的比例分离效果最好,保留时间适中。

3.4 实验证明，用该法检测刺五加软胶囊中刺五加苷E含量，可操作性强、精密度高、重现性及线性关系良好,回收率高，与其他峰分离良好，可作为刺五加软胶囊中刺五加苷E的质量控制方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版（一部）[S].北京：中国医药科技出版社,2005.1

[2]胡广东,胡新海,宋铁兵.刺五加中刺五加苷E的含量测定[J].黑龙江医药科学，2009,32（5）：19-20.

[3]吴少杰,邢朝斌等.不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定[J].时珍国医国药，2010，21（8）：1854-1855.

[4]王静,刘俐纯.高效液相色谱法测定刺五加粉中剌五加苷B和苷E的含量[J].时珍国医国药,2003,14(7):398.