GC法检测氟康唑原料药中的有机溶剂残留量

吴春丽，雷 伟，李 幸，吴洪银（郑州大学药学院，郑州市 450001）

氟康唑（Fluconzole）化学名为2-（2，4-二氟苯基）-1，3-双（1H-1，2，4-三唑-1-基）-2-丙醇，能强烈而持续地抑制真菌中的甾醇合成，由于其广谱、高效的抗真菌活性，尤其是具有对深部真菌抑制作用较强并能透过血脑屏障的显著特点，在治疗曲霉菌、全身性念珠菌以及隐球菌感染方面应用广泛，是抗深部真菌感染的首选药物[1]。由于氟康唑原料药的生产过程中使用了丙酮、乙酸乙酯、甲苯等有机溶剂，为确保药品的安全、有效和质量可控，根据《中国药典》残留有机溶剂测定法[2]和人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）制定的药品中有机溶剂残留量检测的指导原则[3]，本研究采用毛细管气相色谱法[4～6]，定量检测氟康唑原料药中的有机溶剂残留量，结果表明所建立的方法简便、灵敏、准确。

1 仪器与试药

Agilent 6890N气相色谱仪、HP6890化学工作站、氢火焰离子化（FID）检测器（美国安捷伦科技有限公司）；AL104电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

氟康唑原料药（批号分别为20081201、20081202、20081203，含量分别为99.3%、99.2%、99.4%）均由河南普瑞制药有限公司提供；丙酮、乙酸乙酯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（Dimethyl formamide，DMF）均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:DB-17毛细管柱（固定相为50%苯基+50%甲基聚硅氧烷，30 m×0.25mm，0.25µm）；柱温:初始温度60℃，保持3min后，以70℃·min－1升温至240℃再保持25min；进样口温度:200 ℃；载气:N2，流速:1.0mL·min－1；分流比:10∶1；FID检测器温度:270 ℃；H2流速:30mL·min－1，空气流速:300mL·min－1；进样量:1μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 贮备液:分别精密称定丙酮255.5mg、乙酸乙酯258.9mg、甲苯53.0mg，置于同一个50mL容量瓶中，加DMF稀释制成每1mL中含丙酮5.110mg、乙酸乙酯5.178mg和甲苯1.060mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液:精密量取“2.2.1”项下贮备液5mL，置于50mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 丙酮溶液:精密称定丙酮54.9mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀释制成每1mL中含丙酮0.549mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.4 乙酸乙酯溶液:精密称定乙酸乙酯49.9mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀释制成每1mL中含乙酸乙酯0.499mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.5 甲苯溶液:精密称定甲苯21.3mg，置于100mL容量瓶中，加DMF稀释制成每1mL中含甲苯0.213mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.6 供试品溶液:精密称定氟康唑原料药0.2 g，置于2mL容量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验:分别取“2.2.2”、“2.2.6”项下的溶液及空白溶液（DMF）各1μL注入气相色谱仪。结果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯保留时间分别为4.949、5.514、7.471min，气相色谱详见图1。

图1 气相色谱图A.对照品溶液；B.空白溶液；C.供试品溶液Fig 1 GC chromatogramsA.reference substances solution；B.blank solution；C.test solution

2.3.2 线性考察试验:精密量取“2.2.1”项下的贮备液5.0、2.5、1.0、0.5、0.25mL分别置于10mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，即得系列对照溶液。照“2.1”项下的色谱条件，分别精密量取1μL注入气相色谱仪，记录色谱，各组分浓度溶液平行进样2次，测得平均峰面积。以各组分浓度（c，μg·mL－1）为横坐标，各组分峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，结果见表1。

表1 线性范围及回归方程（n＝5）Tab 1 Linear ranges and regression equations（n＝5）

2.3.3 精密度试验:精密量取对照品溶液1μL，注入气相色谱仪，重复进样6次，记录色谱，测得峰面积，考察其精密度。结果丙酮、乙酸乙酯、甲苯的RSD分别为2.3%、1.3%、1.5%。

2.3.4 最低检测限试验:取“2.2.3”、“2.2.4”、“2.2.5”项下的溶液分别逐级稀释，照“2.1”项下的色谱条件分别进样1μL，记录色谱，以信噪比3∶1确定检测限，以信噪比10∶1确定定量限。结果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯检测限分别为11、7.1、0.6 ng，定量限分别为27.5、33.3、2.7 ng。

2.3.5 重复性试验:取同一批氟康唑原料药（批号:20081202）0.5 g，精密称定，共6份，分别置于5mL容量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液各1μL，照“2.1”项下的色谱条件分别注入气相色谱仪，记录色谱。同时测定“2.2.2”项下对照品溶液1次。按外标法以峰面积计算。结果，丙酮、乙酸乙酯和甲苯RSD均为0，表明本方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验:精密称取同一批氟康唑原料药（批号:20081201）0.5 g，共6份，分别置于5mL容量瓶中，精密加入“2.2.1”项下贮备液0.5mL，加DMF稀释至刻度，摇匀。精密量取溶液各1μL，照“2.1”项下的色谱条件分别注入气相色谱仪，记录色谱。同时测定“2.2.2”项下对照品溶液。根据峰面积计算加样回收率。结果，丙酮、乙酸乙酯、甲苯的加样回收率分别为98.1%、98.0%、97.5%，详见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.4 样品中有机溶剂残留量测定

分别称取3批氟康唑原料药0.2 g，精密称量，按“2.2.6”项下方法制备成供试品溶液。分别取1μL按照“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪。同时取“2.2.2”项下对照品溶液1μL进样。结果，3批氟康唑原料药样品中均未检出丙酮、乙酸乙酯、甲苯，符合《中国药典》规定。

3 讨论

《中国药典》及《美国药典》[7]均规定，丙酮、乙酸乙酯为第三类受控毒性溶剂，甲苯为第二类受控毒性溶剂，根据ICH制定的控制指标[3]，结合实际测定结果，认为原料药中的丙酮不得超过0.5%，乙酸乙酯不得超过0.5%，甲苯不得超过0.089%。本研究检测结果表明，3批样品的有机溶剂残留量均符合规定。

本品控制的丙酮、乙酸乙酯、甲苯3种有机溶剂的沸点和极性虽均有不同程度的差异，但采用DB-17毛细管色谱柱，方法的检测限、定量限、精密度和准确度试验均能满足分析要求，故该方法能够有效分离和准确检测氟康唑原料药中的有机溶剂残留量。

[1]平素玲，沙 玮.氟康唑治疗深部真菌感染10例报告[J].苏州医学院学报，1995，15（3）:551.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:附录Ⅷ.

[3]周海钧.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京:人民卫生出版社，2000:87.

[4]吴春丽，张俊霞，史云涛，等.顶空毛细管气相色谱法测定来曲唑原料药中有机溶剂残留量[J].中国药房，2010，21（17）:1601.

[5]吴春丽，张俊霞，史云涛，等.毛细管气相色谱法测定扎托洛芬中有机溶剂的残留量[J].郑州大学学报（医学版），2010，45（1）:134.

[6]李珂珂，谭丰苹.毛细管气相色谱法测定拉米夫定中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2007，18（19）:1502.

[7]The United States Pharmacopeial Convention，Inc.The United States Pharmacopeia[S].30th edi.Rochville MD:the United States Pharmacopeial Convention，Inc.，2007:467.