HPLC法测定人血清中奈达铂浓度

苏 华，张文静

山东聊城市第二人民医院药剂科，聊城 252601

奈达铂(Nedaplatin，结构见图1)，是日本盐野义制药公司开发的一个新型第二代铂类抗肿瘤药物，1995年6月在日本首次获准上市。主要用于治疗头颈部癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食管癌等实体瘤，部分对顺铂耐药的患者应用奈达铂可取得较好疗效[1-3]。奈达铂具有骨髓抑制、肝肾功能异常、耳神经毒性、脱发等不良反应。国内外对奈达铂的血药浓度测定方法少见报道，本文采用HPLC[4-6]法测定人血清奈达铂浓度，以NH2柱为色谱柱，使灵敏度、保留时间及峰形等色谱指标更理想，具有简便、快速和灵敏的特点，对奈达铂临床合理用药具有重要意义。

图1 奈达铂的结构式

1 材 料

1.1 仪器

高效液相色谱仪 (包括510泵，7725i进样器，996二极管阵列检测器，Millenium232数据处理系统，美国Waters公司)；XW280A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；LD422低速离心机(北京医用离心机厂)。

1.2 药品与试剂

奈达铂对照品(南京东捷药业有限公司提供，批号：20091006，纯度﹥99.5%)；注射用奈达铂(商品名：捷佰舒，南京东捷药业有限公司，批号：11-101204)；乙腈为色谱纯；其他试剂均为市售分析纯；水为自制去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱 Spherisorb NH2(4.0 mm×300 mm，10 μm)；流动相：40 mmol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(8∶2)；流速:0.8 mL·min-1；检测波长：210 nm；柱温：24℃；进样量：20 μL；理论板数应不低于 2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取奈达铂对照品12.5 mg于25 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度,配制成500μg·mL-1的对照品溶液，置于4℃冰箱避光保存。

2.3 血清样品处理

血清样品0.5 mL置具塞试管中，加入0.1 mL 28%硫酸锌溶液，氯仿 2.5 mL，振荡 1.5 min，3000 r·min-1离心 8 min，取上清液 20 μL 进样。

2.4 标准曲线的制备

精密吸取奈达铂储备液适量，加空白血清配成血药浓度分别为 5、10、20、30、40、50 μg·mL-1的模拟血清样品,按“2.3”项下操作,取上清液 20 μL 进样。以峰面积(Y)对质量浓度(X)作线性回归，得回归方程：A=1.045×104C-1.024×104，r=0.9995。 结果表明，奈达铂浓度在 5～50 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5 专属性试验

以“2.1”项下色谱条件，分别按“2.3”项下血清处理方法处理空白血清和加入奈达铂的对照品血清，取处理后的上清液各20 μL进样。结果奈达铂能与内源性物质较好的分离，保留时间为4.99min。见图2。

图2 奈达铂的液相色谱图

2.6 回收率和精密度试验

分别精密吸取奈达铂对照品溶液和空白血清适量，配成含奈达铂 5、20、40 μg·mL-1浓度样品各 5份，按“2.4”项操作测定，计算回收率和日内、日间（连续3d进行重复日内试验）精密度。结果日内回收率结果分别为：96.7%、97.2%、97.8%，RSD分别为2.09%、1.98%、3.19%(n=5)；日间回收率结果分别为：98.4%、98.2%、99.6%，RSD 分别为 2.27%、2.13%、1.92%(n=5)。

2.7 临床应用

肿瘤化疗住院患者5例，奈达铂给药剂量为80 mg·m-2。奈达铂溶于 0.9%氯化钠注射液 500 mL，静脉滴注60 min以上，滴完约0.5 h时取血2 mL，4000 r·min-1离心 2 min；吸取血清 0.5 mL，按“2.3”项测定奈达铂血药浓度。测得5例患者奈达铂血药浓度分别为 31.3、20.4、25.8、29.7、30.1 μg·mL-1。

3 讨 论

铂类药物应用于临床时常因为毒性带来化疗延期甚至中断，此类药物的血药浓度与疗效呈正相关，而发生骨髓抑制等毒副作用也与剂量相关[7]，所以测定奈达铂血药浓度为临床合理用药提供重要方法学依据。生物样品HPLC法前处理包括：去蛋白和被测组分的提取，本文采用硫酸锌沉淀蛋白、氯仿分离内源性干扰杂质方法处理血清，被测组分被提取入上清液，蛋白沉淀在最底层，采用高效液相色谱法分离奈达铂与杂质，以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归测定奈达铂血药浓度，方法简便、准确，可用于奈达铂的药代动力学研究和临床血药浓度监测。

[1] Ogawa M,Ariyoshi Y.New anticancer drugs under clinical trials in Japan[J].Hematol Oncol Clin North Am,1994,8(2):277-87.

[2] Hartman JT,Lipp HP.Toxicity of platinum compounds[J].Expert Opin Pharmacother,2003,4(6):889-901.

[3] 张 频，冯奉仪，吴令英，等.奈达铂治疗恶性肿瘤的临床研究[J]. 中华肿瘤杂志，2006，28(3)：230-4.

[4] 蔡 梅，徐薇薇.高效液相色谱法测定注射用卡铂和奈达铂的含量[J]. 海峡药学，2007，19(1)：22-4.

[5] 毕同香，刘明洁，薛克亮，等.奈达铂的HPLC测定法[J].中国医药工业杂志，2000，31(10)：457-8.

[6] 陈祥峰，袁 玉.RP-HPLC法测定注射用奈达铂含量及有关物质[J]. 药物分析杂志，2008，28(1)：131-3.

[7] 高允华，朱玉云，金京顺，等.卡铂对肿瘤患者的药物动力学与药效学[J].中国临床药学杂志，1999，8(4)：214-6.