胃癌患者血清P53、PCNA抗体的检测及意义

刘辉琦 刘 慧 刘 杰 王生兰 青海大学医学院病理生理教研室，青海省西宁市 8000； 西宁市第一人民医院消化内科

胃癌居消化系肿瘤之首，其发病率和死亡率近年不断上升，每年新发病例及死亡率分别占全部恶性肿瘤的17%和20%［1～3］，严重威胁着人民健康。许多患者在就诊时已经到了中晚期，丧失了最佳治疗时机。因此胃癌的早诊、早治是降低其死亡率，提高生存率的主要手段。P53基因的突变、蛋白的表达及抗体的产生是多种肿瘤包括胃癌发生中的事件，血清中P53抗体的检测在某种程度上可作为肿瘤的辅助诊断及预后的判定。细胞增殖核抗原（PCNA）在胃癌中表达增加［4］，但血清中是否有PCNA抗体及能否用于胃癌血清学检测尚需进行验证。本研究旨在通过检测胃癌患者血清中P53、PCNA抗体，判断其在胃癌血清学诊断中的意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本。经病理诊断为原发胃癌的患者50例，其中男38例，女12例，年龄36～74岁。健康人50例，男32例，女18例，年龄28～56岁。以上病例均在检查时或手术前、放化疗前肘静脉取血约3ml，非抗凝，待血液充分凝固后2h内2 000r／min离心，收集血清，于－80℃冰箱中贮存备用。

1.1.2 试剂。人P53抗体检测ELISA试剂盒购自美国R＆D公司，人PCNA抗体检测ELISA试剂盒购自北京奇松生物科技有限公司。采用 Modern 450BIU－RAD酶标仪进行比色分析。

1.2 实验方法

1.2.1 血清PCNA抗体的测定。待测血清用标本稀释液1∶5稀释后每孔内加入50μl（每个样本做复孔）。标准品每孔内加入50μl（每个稀释浓度做复孔）。37℃温育120min。弃去液体，甩干。每孔加检测溶液 A 100μl，37℃反应60min。弃去孔内液体，洗板3次，甩干。每孔加检测溶液B工作液100μl，37℃反应60min。弃去孔内液体，洗板5次，甩干。每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色。每孔加终止溶液50μl，终止反应。450nm波长测量各孔的吸光值。

1.2.2 血清P53抗体的测定。待测血清用标本稀释液1∶5稀释后每孔内加入50μl（每个样本做复孔）。标准品每孔内加入50μl（每个稀释浓度做复孔）。37℃温育30min。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，洗板机振荡30s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复操作4次。每孔加入酶标工作液50μl，37℃温育30min。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，洗板机振荡30s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。每孔先加入显色剂A液50μl，再 加 入 显 色 剂 B 液 50μl，混 匀 30s，37℃ 避 光 显 色15min。每孔加终止液50μl，终止反应，450nm波长测量各孔的吸光值。

1.3 统计学分析 应用SPSS13.0软件处理，采用χ2检验。

2 结果

（1）血清PCNA抗体的检测：ELISA检测正常血清中PCNA抗体浓度为（31.5±2.3）pg／ml，以此确定PCNA蛋白cutoff值为36.1pg／ml。根据此结果胃癌组血清中PCNA蛋白阳性率高于正常对照组（P＜0.05）。（2）血清P53抗体检测情况：ELISA检测正常血清中P53抗体浓度为（22.3±1.2）pg／ml，以此确定P53抗体cutoff值为24.7pg／ml。根据此结果胃癌组血清中P53抗体阳性率高于正常对照组（P＜0.05），见表1。

表1 各组血清PCNA抗体、P53抗体检测结果

3 讨论

P53基因在肿瘤的发生发展中扮演着非常重要的角色，主要参与细胞内DNA损伤修复，细胞增殖和凋亡［5，6］。P53基因有野生型和突变型，野生型P53蛋白半衰期短，产生后很快衰减，突变型P53蛋白半衰期延长，可在肿瘤组织中积累，激发机体免疫系统产生抗体，通过ELISA法可检测血清中P53抗体浓度的变化。增殖细胞核抗原 （PCNA）是一种仅在增殖细胞中合成与表达的多肽，表示细胞处于增殖状态，是反映细胞增殖分数和所处周期的客观指标［7］，近年来已广泛用于肿瘤细胞的动力学研究。PCNA表达改变发生在胃黏膜癌变之前，一旦癌变其表达则升高［8］，因此对PCNA进行监测，有助于早期发现胃癌。基因改变是肿瘤的早期事件，其所导致的表达蛋白的改变可诱导机体通过免疫反应产生抗体而可被检测，因此通过对胃癌患者血清P53、PCNA抗体的检测能够有助于胃癌的早期诊断。

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