秦川通痹颗粒质量标准研究

2011-05-02李俊平姜明章冯景辉孙大勇

药学研究 2011年5期

李俊平，姜明章，冯景辉，孙大勇

(烟台大洋制药有限公司，山东烟台 265500)

秦川通痹颗粒(3 g/袋)是由秦川通痹片改变剂型而来，秦川通痹片(0.3 g/片)收载于国家药品监督管理局·国家中成药标准汇编经络肢体脑系分册中［标准号:WS－10318(ZD－0318)－2002］。秦川通痹颗粒由秦艽、川芎、威灵仙、桂枝、独活、木瓜、黄芪、干姜、牛膝、当归、苍术、甘草十二味中药材制备而成，具有祛风除湿、通络止痛的功效。用于风寒湿痹所致的肢体疼痛、麻木拘挛。为保证本制剂的疗效，控制制剂的质量，对其质量标准进行了研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV－1700型紫外分光光度计(岛津(香港)有限公司);岛津LC－10AT高效液相谱议，SPD－10A检测器，Phenomenex ODS C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。

1.2 试药秦川通痹颗粒(本厂自制，批号:070108，070109，070110)，硅胶G(青岛海洋化工厂);甲醇(USA色谱纯);龙胆苦苷对照品(批号:110770—200308，供含量测定用)、齐墩果酸对照品(批号:110709－200304)、黄芪甲苷对照品(批号:110781－200311)、川芎对照药材(批号:120918－200406)、甘草对照药材(批号:120904－200410)、当归对照药材(批号:120927－200411)，以上对照品、对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。其余试剂均为分析纯。

2 实验内容

2.1 鉴别研究

2.1.1 当归、川芎的鉴别取本品15 g，研细，加乙醚60 mL，加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液。另按本标准的处方量及制法制备缺当归、川芎的阴性对照样品，按上述供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。另取川芎、当归对照药材各1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述4种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照溶液在相应的位置无此斑点，证明阴性无干扰，见图1。

图1 当归、川芎的鉴别

2.1.2 黄芪的鉴别取本品30 g，研细，加甲醇100 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用10%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20 mL，弃去碱液，再用正丁醇饱和水洗涤2次，每次30 mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另按本标准的处方量及制法制备缺黄芪的阴性对照样品，按上述供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点;紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点。阴性对照溶液在相应的位置无此斑点，证明阴性无干扰。见图2。

图2 黄芪的鉴别

2.1.3 齐墩果酸的鉴别取本品40 g，研细，加乙醇100 mL，加热回流1 h，滤过，加盐酸4 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至约5 mL，加水15 mL，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另按本标准的处方量及制法制备缺威灵仙、木瓜、牛膝的阴性对照样品，按上述供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－丙酮(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同的紫红色斑点或相同颜色的荧光斑点。阴性对照溶液在相应的位置无此斑点，证明阴性无干扰。见图3。

图3 齐墩果酸的鉴别

2.1.4 甘草的鉴别取本品20 g，研细，加乙醚100 mL，加热回流2 h，滤过，弃去乙醚液，药渣挥干，加甲醇50mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗3次，每次20 mL，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，加活性炭少许，摇匀，放置30 min，滤过，滤液浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。另按本标准的处方量及制法制备缺甘草的阴性对照样品，按上述供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。另取甘草对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各10 μL，分别点于同一以1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。阴性对照溶液在相应的位置无此斑点，证明阴性无干扰。见图4。

2.2 龙胆苦苷含量测定本品由秦艽、川芎、威灵仙、桂枝、独活、木瓜、炙黄芪、干姜、牛膝、当归、苍术、甘草十二味中药组成，具有祛风除湿，通络止痛的功效。用于风寒湿痹所致的肢体疼痛，麻木拘挛。秦艽为本品君药，其主要有效成分为龙胆苦苷，所以选择以龙胆苦苷的含量为指标对本品质量进行控制。原秦川通痹片标准中采用薄层扫描法测定其含量，考虑到薄层扫描法的局限性，建立了高效液相色谱法测定龙胆苦苷含量的方法，试验证明该方法准确度、精密度高，重现性好，可用来控制本品的质量。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇－水(30∶70)为流动相;检测波长为254nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

图4 甘草的鉴别

供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2.1 线性关系的考察取龙胆苦苷对照品适量，精密称定为9.05 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为362 μg·mL－1的龙胆苦苷对照品母液。精密量取龙胆苦苷对照品母液1 mL、2 mL、3 mL、5 mL，分置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得不同浓度的龙胆苦苷对照品溶液(36.2 μg·mL－1、72.4 μg·mL－1、108.6 μg·mL－1、181 μg·mL－1)。精密吸取各浓度的对照品溶液及对照品母液各10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，结果见表1。