HPLC法测定降脂胶囊中靛蓝的含量

闫晓楠，安适之，陈 伟，孙律衡，袁 培

(天津中新药业研究中心，天津 300457)

降脂胶囊由青黛、茶叶等组成，具有清热解毒，凉血化痰的作用。用于治疗高血脂、高血粘引起的头晕、胸闷、胸痛、心悸、肢麻及心律不齐等症状。其中青黛为主要有效成分。青黛为爵床科植物马蓝［Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek.］、蓼科植物蓼蓝(Polygonum tinctorium Ait.)或十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的叶或茎叶经加工制得的干燥粉末或团块。主要有效成分靛蓝和靛玉红，有清热解毒、凉血止血、清肝泻火等功效。《中国药典》2005年版中分别采用紫外分光光度法、薄层扫描法测定青黛中靛蓝的含量，存在准确度低，操作复杂等问题。而本实验采用HPLC法测定降脂胶囊中靛蓝，使得测定过程更简便、迅速，结果更准确。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Lab Allaince Series 1500高效液相色谱仪(包括Lab Allaince Model 500紫外检测器);超声波清洗器(HU10260B);电子天平(SARTORIUS BP211D)。

1.2 试药 靛蓝对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110716 －200408);降脂胶囊(自制，批号 0801、0802、0803);甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司);乙腈(天津市康科德科技有限公司);醋酸(天津市科密欧化学试剂有限公司);水为纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);以甲醇 －0.1%醋酸(70∶30)为流动相;检测波长285 nm;流速1 mL·min－1。理论塔板数按靛蓝峰计算应不低于2000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取本品0.1 g，精密称定，精密加入N，N－二甲基甲酰胺50 mL，称定重量，超声处理40 min，称重，用N，N－二甲基甲酰胺补足减失重量。摇匀，滤过，续滤液经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2.2 对照品溶液 精密称取靛蓝对照品适量，加N，N－二甲基甲酰胺配制成每1 mL含8 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液 取缺靛蓝的处方药材，按供试品溶液的制备方法制备，作为阴性样品溶液。

2.3 专属性实验 取靛蓝对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液进行测定，色谱图见图1，各主成分峰间分离完全，阴性对照无干扰。

2.4 标准曲线的制备 精密量取对照品储备液，分别配制成浓度为 0.98 μg·mL－1、1.96 μg·mL－1、2.94 μg·mL－1、5.88 μg·mL－1、9.80 μg·mL－1的对照品溶液，取上述溶液，按拟定的色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，得回归方程:Y=2251550X-2048(r=0.9990)。结果表明:靛蓝在 0.0196 －0.196 μg之间峰面积与进样量呈良好的线性关系。

图1 A.靛蓝对照品，B.供试品溶液，C.阴性样品溶液

2.5 精密度试验 取同一供试品溶液，连续进样6次，计算靛蓝峰面积的RSD为1.53%。

2.6 重现性试验 取同一批样品，平行制备6份供试品溶液，测定，计算靛蓝峰面积的RSD为1.41%。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样，按靛蓝的峰面积计算RSD为8 h相对标准偏差为3.20%，6 h相对标准偏差为2.52%。表明供试品溶液在室温下6 h内稳定性良好。

2.8 加样回收试验 精密称取样品(批号为080201)0.05 g，精密加入 0.0126 mg·mL－1的靛蓝对照品溶液 50 mL，按照供试品溶液制备方法制备，依拟定色谱条件测定6份，计算回收率。结果平均回收率98.9%，RSD为1.97%(n=6)。

2.9 样品的测定 取本品3批样品，制备供试品溶液，分别取供试品溶液和对照品各10 μL，进样，测定峰面积，以外标法计算，结果3批样品含量分别为2.64 mg/粒、2.65 mg/粒、2.62 mg/粒。

3 讨论

3.1 提取溶媒的选择 多数文章报道使用三氯甲烷作为溶媒提取青黛药材的靛蓝，本实验使用三氯甲烷进行前处理，测定结果表明提取率低，且样品稳定性较差。改用N，N－二甲基甲酰胺，发现对于靛蓝的提取较完全［1］。

3.2 用HPLC法测定青黛中靛蓝的含量多使用甲醇－水作为流动相。但比例不同，我们通过考察发现用甲醇－0.1%醋酸(70∶30)時效果最佳，单纯使用水主峰存在拖尾现象，使用 0.1%醋酸效果较好［2］。

3.3 使用不同的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行测定，如 Agilent Extend C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)、A-pollo C18(4.6 mm × 250 mm，5 μm)、Phenomenex PRODIGY C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。色谱峰峰型和分离度良好，测定结果不受影响，证明本方法耐用性良好。

［1］范立昌，石立华，刘世琛.青黛膜剂的制备和靛蓝的含量测定［J］.药学研究，2008，5(7):24 －25.

［2］刘泽玉，苏柘僮，高亚男，等.HPLC法同时测定青黛有效成分靛蓝和靛玉红的含量［J］.中国药师，2010，13(3):324－326.