宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中Ki-67的表达与高危型HPV感染相关性的研究

杨德桂， 张晓薇， 李明娥， 徐洪斌 (暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院妇科， 深圳 5800;广州医学院第一附属医院妇科;通讯作者，E-mail:yangde768@cn.com)

宫颈鳞癌是常见的妇科恶性肿瘤，其发生发展可能由多种致癌因素引起。大量的流行病学调查和实验室研究数据已证实高危型HPV感染是子宫颈癌发生的主要病因［1］，但对其具体机制尚未明了。细胞增殖与细胞凋亡调节机制的失控与癌变过程密切相关。增殖细胞核抗原(Ki-67)是目前已知的增殖抗原中最能反映细胞增殖能力的蛋白标志物之一，可用于良恶性疾病的鉴别、疾病的预后与疗效的评估等。本研究通过检测Ki-67在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达与高危型HPV感染的相关性研究，探讨Ki-67能否成为CIN预后指标之一。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取北京大学深圳医院2003－01～2008－06病理确诊为CINⅠ-Ⅲ级及宫颈鳞癌的患者176例(其中CINⅠ组57例、CINⅡ51例、CINⅢ39例、宫颈鳞癌29例)，选取宫颈活检病理确诊为正常上皮30例为对照组。

1.2 方法 所有病例均行高危型HPV检查。应用免疫组化Elivision plus法检测宫颈病变组织中Ki-67蛋白的表达。以细胞核着色棕黄色或棕褐色者为阳性细胞。每例标本在光镜下随机选择10个高倍视野，采用病理图像分析系统测量采用CMIAS007真彩色医学图像分析系统(软件由空军总医院和北京航空航天工业大学联合研制)。根据图像分析所得灰度进行分析，计算平均灰度值。灰度值越高，表明相应蛋白表达越高，反之则表明相应蛋白表达越低。

1.3 统计学分析 运用SPSS13.0统计软件包建立数据库，录入所有实验数据后进行统计分析。计数资料的统计描述用率表示，不同组间率的差异性用行×列卡方检验的卡方分割检验，计量资料的统计描述用±s表示，两组间均数的比较用方差分析后作LSD法多重比较，等级资料间的相关性用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 Ki-67的表达 Ki-67在各组宫颈上皮细胞核均有表达(见图1和表1)。在正常宫颈上皮中Ki-67表达限于基底层，且数量较少;在CINⅠ组中Ki-67阳性细胞分布可达中层;而在CINⅢ组中Ki-67阳性细胞分布可达全层;在宫颈鳞癌组中Ki-67阳性细胞分布在上皮全层，部分突破基底膜，且着色明显增强。5组间Ki-67表达的总体方差分析结果有统计学差异(F=10.913，P ＜0.000 1)。随着病变加重，Ki-67灰度值逐渐升高(CINⅡ级组)除外。

图1 各组ki-67表达免疫组织化学染色(×400)Fig 1 Expression of Ki-67 in 5 groups(HE，×400)

表1 Ki-67在各组中的表达(±s)Tab 1Expression of Ki-67 in 5 groups(±s)

表1 Ki-67在各组中的表达(±s)Tab 1Expression of Ki-67 in 5 groups(±s)

与对照组比较，*P ＜0.05;与 CINⅠ比较，#P ＜0.05;与CINⅡ比较，△P ＜0.05;与 CINⅢ比较，▲P ＜0.05

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2.2 高危型HPV的检测结果 正常对照组的高危型HPV检测均为阴性，随着病变加重，高危型HPV的阳性率逐渐增加，除CINⅡ组与CINⅠ组比较差异无统计学意义外，其他各组间比较差异有统计学意义(见表2)。

表2 各组高危型HPV感染情况Tab 2 High-risk HPV infection rate in 5 groups

2.3 相关分析 Spearman等级相关分析结果显示，Ki-67与高危型HPV感染呈正相关(r=0.228，P＜0.05)。

3 讨论

3.1 Ki-67与肿瘤的关系 Ki-67是 Gerdes等［2］发现在增殖细胞中表达的一种抗原，Ki-67定位在第10号染色体，分子量为345 kD和395 kD两条多肽链组成的核蛋白。在细胞周期的G1后期至M期呈高表达，而在静止的G0期细胞呈低表达状态，在有丝分裂周期中S期的后半期上升，于G2和M期达到峰值。Ki-67半衰期短，脱离细胞周期后迅速降解，检测结果的可靠性明显优于半衰期长的增殖细胞核抗原，故Ki-67既可应用于定量分析肿瘤的生长分数、肿瘤的分级、增生程度、预后的预测，也可应用于测定各种肿瘤的增殖活性，辅助鉴别疾病的良恶程度，选择恶性肿瘤早期诊断和治疗的方法，并进行疗效评价。文献报道［3，4］Ki-67在多种肿瘤中均存在过度表达，Ki-67表达与甲状腺癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤的组织学分级、肿块大小、淋巴结转移、术后复发率和死亡率等显著正相关。

3.2 Ki-67与CIN和宫颈鳞癌的关系 当HPV感染后宫颈上皮细胞增殖活性升高，抑制及破坏人体局部的免疫功能，从而促进细胞过度增殖最终癌变。国内外有多个文献［5－7］报道，Ki-67在CIN 和宫颈鳞癌中有高表达。Baak等［8］认为在预测CINⅠ、CINⅡ是否发展为CINⅢ，Ki-67具有较高的阳性预测值。而藤燕伊等［9］研究中发现Ki-67在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中表达无明显差异，Alameda等［110］报道Ki-67不能用作预测持续性CINⅠ是否进展的鉴别诊断指标。Kamer等［11］认为在宫颈癌早期Ki-67的变化能预测肿瘤的转移，但能否应用于临床还需要大样本和长期随访的前瞻性研究。本实验结果显示Ki-67阳性表达灰度值随着CIN级别的升高逐渐升高，与对照组比较差异有统计学意义。说明了Ki-67与CIN进展有关，有可能成为预测CIN预后的指标。但研究中发现CINⅡ组与正常对照组比较差异无统计学意义。查阅了国内外文献，绝大多数文献报道Ki-67在CINⅡ组表达增强，与正常宫颈上皮组比较有统计学意义。仅Harmsel等［12］在研究中发现少量低级别CIN中Ki-67明显增强，反而少量高级别CIN中的Ki-67弱阳性表达。本组例数较少，还需扩大样本量和长期随访的前瞻性研究进一步探讨。

3.3 Ki-67与高危型HPV的关系 本研究结果显示，随着CIN级别的升高，高危型HPV阳性率逐渐升高，在宫颈鳞癌组中，HPV阳性率达100%，说明HPV感染与子宫颈癌高度相关。用Spearman等级相关分析，Ki-67蛋白表达与高危型HPV感染有相关性，与学者张亚静等［13］和 Carreras等［14］研究结果一致。推测Ki-67在高危型HPV感染后的CIN和宫颈鳞癌的发病中起重要作用。这有利于运用Ki-67和高危型HPV共同监测宫颈疾病进展情况，协助诊断子宫颈上皮内瘤变或宫颈癌，提高CIN预后评价，及时治疗及阻断宫颈癌前病变的发展。

［1］ Scheurer ME，Tortolero-Luna G，Adler-Storthz K.Human papilloma virus infection:biology，epidemiology，and prevention［J］.Int J Gynecol Cancer，2005，15(5):727 －746.

［2］ Gerdes J，Schwab U，Lemke H，et al.Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation［J］.Int J Cancer，1983，31(1):13 －20.

［3］ 成继民，贺占国，刘艳丽，等.CerbB2和Ki-67在甲状腺肿瘤中的表达及临床意义［J］.解放军医学杂志，2004，29(2):142－143.

［4］ 袁俊峰，袁先厚，江普查，等.IGF-1、Ki-67和Bcl-2在脑胶质瘤中的表达及意义［J］.现代肿瘤医学，2004，12(5):393－396.

［5］ 张全武，肖艳景，赵红梅，等.宫颈上皮内瘤变p16、Rb、Ki-67及高危型HPV的表达［J］.医药论坛杂志，2010，31(8):30－32.

［6］ 刘双萍，金京春，韩艳，等.子宫颈病变中DEK和Ki-67蛋白过表达及其意义［J］.临床与实验病理学杂志，2010，26(2):187－190.

［7］ Cremer ML，Alonzo TA，Alspach AE，et al.Diagnostic reproducibility of cervical intraepithelial neoplasia 3 and atrophy in menopausal women on hematoxylin and eosin，Ki-67，and p16 stained slides［J］.J Low Genit Tract Dis，2010，14(2):108 －112.

［8］ Baak JP，Kruse AJ，Janssen E，et al.Predictive testing of early CIN behaviour by molecular biomarkers［J］.Anal Cell Pathol，2005，27(5/6):277 －280.

［9］ 滕燕伊，刘晓云，郑洪，等.Ki-67 MMP-7 MMP-2在宫颈 CIN和宫颈癌中的表达及意义［J］.重庆医科大学学报，2010，35(7):989－991.

［10］ Alameda F，Fuste P，Boluda S，et al.The Ki-67 labeling index is not a useful predictor for the follow-up of cervical intraepithelial neoplasia［J］.J Low Genit Tract Dis，2004，8(4):313 －316.

［11］ Kamer S A，Yalman D，Ozer E，et al.Changes of Ki-67 index in squamous cell carcinoma of the cervix during the early course of radiotherapy and prediction of prognosis［J］.Eur J Gynaecol Oncol，2003，24(3/4):287 － 292.

［12］ Harmsel BT，Kuijpers J，Smedts F，et al.Progressing imbalance between proliferation and apoptosis with increasing severity of cervical intraepithelial neoplasia［J］.Int J Gynecol Pathol，1997，16(3):205－211.

［13］ 张亚静，拉莱·苏祖克.p16、Ki67在子宫颈上皮内瘤变及子宫颈鳞癌中的表达及意义［J］.新疆医科大学学报，2007，30(4):372－374.

［14］ Carreras R，Alameda F，Mancebo G，et al.A study of Ki-67，cerbB2 and cyclin D-1 expression in CIN-Ⅰ，CIN-Ⅱ and squamous cell carcinoma of the cervix［J］.Histol Histopathol，2007，22(6):587－592.