蛹虫草与冬虫夏草的含量测定研究

2011-04-25丽丽

长春中医药大学学报 2011年2期

，，丽丽

(1.白求恩医科大学制药厂，吉林长春 130021；2.长春中医药大学，吉林长春 130117)

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体[1]。蛹虫草Cordyceps militaris(L.ex Fr.)Link生于半埋伏于林地土壤中的鳞翅目昆虫的死蛹上[2]，又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草。主要成分为多糖、虫草素、虫草酸等，富含人体必需的多种氨基酸和微量元素,世界各地分布广泛,我国的吉林、河北、四川、湖南、湖北、山西等省均有生长。目前蛹草商品主要是人工培养品。蛹虫草与冬虫夏草相比，无论是在化学成分还是在药效上两者都有许多相似之处。在某些方面蛹虫草已经成为冬虫夏草的主要代用品。

1 材料与仪器

1.1 材料冬虫夏草(购于吉林宏检大药房)；蛹虫草(人工培养品，产地为吉林)。

1.2 仪器及试药 101-1A型数显电热鼓风干燥箱(上海泸南科学仪器联营厂);超声波清洗器AS3120A(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；AB1235-S型电子天平；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。无水葡萄糖：中国药品生物制品检验所提供；盐酸、氢氧化钠、水合氯醛等均为分析纯(北京化工厂生产)。

2 含量测定[3-5]

2.1 显示剂与测定波长的选择 3、5-二硝基水杨酸法，选择显色剂为3、5-二硝基水杨酸试液。葡萄糖显色后在525 nm处紫外扫描谱吸收较大，吸收度较为稳定，故选择525 nm为其测定波长。

2.2 对照品溶液的制备取于105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品约100 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液制备总糖供试液的制备取本品粉末约0.5 g，精密称定，置磨口锥形瓶中，精密加入水25 mL，加盖，水浴30 min，取出，滤过，精密量取续滤液5 mL置25 mL量瓶中，加8 mL 6N盐酸溶液，沸水浴30 min，取出，冷却后用20% NaOH调pH至7，放冷，定容至刻度，摇匀即得。还原糖供试液的制备精密量取供试品溶液制备项下的续滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加水定容至刻度，摇匀即得。

2.4 测定法精密量取总糖和还原糖供试液各1 mL，分别置25 mL量瓶中,分别加入1 mL水和1.5 mL 3、5-二硝基水杨酸试液(DNS),照标准曲线方法，测定吸收度，据稀释倍数分别计算总糖和还原糖的量，以总糖的量减去还原糖的量即为多糖的量。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系的考察标准曲线的制备精密量取对照品溶液0、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL分别置于25 mL量瓶中，加水至2.0 mL，分别精密加入3、5-二硝基水杨酸试液(DNS)1.5 mL，混匀，沸水浴5 min,取出，立即冷却至室温，加水定容至刻度，摇匀，以2.0 mL水显色后的溶液做空白,照分光光度法，在525 nm的波长处测定吸收度，绘制标准曲线。结果见表1。

表1 线性关系考察结果

以吸收度为纵坐标，以取样量为横坐标(mg)，得回归方程：Y=0.715 2X-0.035 9，r=0.999 2，线性范围在0.300 06～0.900 18之间。

2.5.2 精密度实验取蛹虫草总糖供试液，照测定法重复测定吸光度6次,结果见表2。

表2 精密度实验测定结果

表2结果表明仪器具有良好的精密度。

2.5.4 回收率实验采用加标回收率实验，取已知含量蛹虫草样品6分，每分0.5 g，精密称定，据供试液制备方法得续滤液，精密量取续滤液2.5 mL于25 mL量瓶中，精密加入对照品溶液5 mL(1.000 2 mg/mL)，依法测定总糖供试液吸收度；精密量取续滤液2.5 mL置10 mL量瓶中，依法测定还原糖供试液吸收度，计算回收率，结果回收率RSD=1.4%，<2%，说明该方法测定虫草多糖含量稳定可靠。

2.5.5 样品依法测定结果见表3。