ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸比例对生长期扬州鹅血脂代谢及冠脉事件预测因子的影响

王梦芝 潘晓花 王剑飞 喻礼怀 王洪荣 王加启

(1.扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京 100193)

ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸比例对生长期扬州鹅血脂代谢及冠脉事件预测因子的影响

王梦芝1，2潘晓花1王剑飞1喻礼怀1王洪荣1王加启2

(1.扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009;2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京 100193)

本文旨在初步探讨不同ω-6/ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)比例对扬州鹅血脂、血清超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein，HsCRP)及可溶性CD40配体(sCD40L)的影响。试验选择160只同批出雏、体重接近的21日龄的扬州鹅，随机分成4组，每组4个重复，每个重复 10 只。分别饲喂 ω-6/ω-3 PUFA 比例为 3∶1、6∶1、9∶1、12∶1 的饲粮，并分别于 42、56、70日龄时进行采血和血脂等指标的测定。结果表明:56、70日龄时，ω-6/ω-3 PUFA比例为6∶1组扬州鹅的血清中有较低的总甘油三酯(TG)(P＜0.05)、总胆固醇(TC)(P＜0.05)和低密度脂蛋白(LDL)(P＜0.05)，且该组的高密度脂蛋白(HDL)在4组中最高(P＜0.05)。HsCRP或sCD40L水平总体上随ω-6/ω-3 PUFA比例的增加呈现上升趋势，基本都以3∶1组最低，但各处理间的差异多不显著(P＞0.05)。综上所述，ω-6/ω-3 PUFA比例为6∶1组有较好的降低血脂的效应，而低ω-6/ω-3 PUFA比例(3∶1)饲粮有降低扬州鹅HsCRP和sCD40L的趋势。

ω-6/ω-3 PUFA比例;扬州鹅;血脂;HsCRP;sCD40L

高脂血症往往伴随着慢性炎症反应，损伤血管内膜，继而激活超敏C反应蛋白(hypersensitive c-reactive protein，HsCRP)等炎症因子，促进炎症细胞 CD40 及其配体 CD40L 升高［1－2］，进而可能导致斑块的不稳定，引起急性冠脉事件的发生。HsCRP是高脂血症重要的炎症因子，也是心血管系统疾病有力的预测因素之一［3－4］。白细胞分化抗原CD40及其可溶性配体sCD40L是炎症反应中参与调节的一对重要的共刺激分子，其相互作用会导致动脉粥样斑块局部的炎性细胞浸润和炎症因子的大量表达，加速斑块的发生发展;而抑制CD40信号系统对阻碍损害的启动和发展及斑块的大量瓦解则有重要作用［5］。因而，sCD40L作为冠脉事件的危险预测因子近年来越来越受到重视［6］。研究发现ω-3多不饱和脂肪酸(PUFA)具有降低血脂，预防心血管疾病等的作用［7－9］;部分研究还表明 ω-3 PUFA具有下调 HsCRP、抑制CD40/sCD40L 信号转导通路的作用［6，10］，对心血管疾病也有一定的缓解效应。而ω-6 PUFA在降低血脂方面作用则相对较弱，而且还通过花生四烯酸(arachidonic acid，AA 或 ARA，为 ω-6系列PUFA)代谢途径介导促进炎症因子表达［11］。鉴于ω-3与ω-6 2个系列PUFA在体内代谢的竞争性，其二者的合理比例对机体血脂代谢和心血管疾病的调节至关重要。但迄今为止，ω-6/ω-3 PUFA的合理比例范围尚未定论，其比例对血脂代谢和心血管疾病影响的规律和机制也不明了，尤其是PUFA比例对家禽血脂代谢影响的研究更为鲜见。为此，本研究拟以不同ω-6/ω-3 PUFA比例的饲粮进行扬州鹅饲养试验，研究其比例对血脂代谢、HsCRP和sCD40L的影响，而为生产实践中油脂饲料的合理使用以及理想脂肪酸比例模式的研究提供一些基础资料。

1 材料与方法

1.1 试验动物与饲养管理

从高邮扬州鹅养殖基地选择160只同批出雏、体质健壮、体重接近［(0.407 ±0.023)kg］、饲养管理一致的21日龄扬州鹅苗，随机分成4组，每组4个重复，每个重复10只鹅(公母各占1/2)。4组试验鹅分别饲喂 ω-6/ω-3 PUFA比例为12∶1、9∶1、6∶1、3∶1 的试验饲粮。利用花生油、葵花籽油、亚麻油、棕榈酸(淄博万友化工公司，纯度99.9%)、油酸(淄博万友化工公司，纯度＞99%)进行PUFA结构的调配，以使各组饲粮饱和∶单不饱和∶多不饱和脂肪酸的比例尽量满足1∶1∶1，并且ω-6/ω-3 PUFA比例基本达到设计的4个比例。饲粮配制参考前人对扬州鹅营养的研究及美国NRC(1994)标准，试验饲粮组成及营养水平见表1。

表1 试验饲粮组成及营养水平Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets %

试验鹅从基础饲粮经7 d过渡(22～24日龄，替换1/3基础饲粮;25～26日龄，替换1/2基础饲粮;27～28日龄，替换2/3基础饲粮)为试验饲粮，29日龄开始正式试验。4组试验鹅分布于同舍，以重复为单位分隔于相同的小圈，供暖、饲养管理皆一致。为了尽量使试验的影响因素少，试验期间没有安排免疫接种。

1.2 样品采集与处理

在试验鹅饲养至42、56和70日龄时每组分别随机取8只鹅，空腹24 h后采血，并立即离心(4 000 r/m in，30 m in)制备好血清，进行总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、HsCRP和sCD40L等指标的测定。

1.3 指标测定方法

血清样品送至苏北医院，购买相应的试剂盒，采用日立7150全自动生化分析仪测定。具体操作步骤参照说明书进行。

1.3.1 TG、TC

保定长城临床试剂公司试剂盒，酶比色法测定，500 nm比色。

1.3.2 LDL、HDL

保定长城临床试剂公司试剂盒，分别采用磷钨酸－镁沉淀法、直接法测定，546 nm比色。

1.3.3 HsCRP

宁波美康生物科技有限公司试剂盒，利用免疫比浊法，观察单位时间内抗原与抗体形成的浊度引起散射光的强度，与标准物比较获得HsCRP浓度。

1.3.4 sCD40L 的测定

奥地利Bender Medsystems公司sCD40L ELISA试剂盒(检测灵敏度为0.062 ng/m L)，双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)测定。具体操作按试剂盒说明进行，主要步骤为:向标准孔中加100μL标品稀释液，sCD40L标准品2倍比稀释(10.00、5.00、2.50、1.25、0.63、0.31、0.16 ng/m L)，并加入标准孔;样品孔加80μL样品稀释液和20μL样品。将反应板每孔加100μL辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗，室温低速(100 r/m in)震荡2 h。弃去孔内物洗涤3次后，每孔加100μL 3，3，5，5－四甲基联苯胺(TMB)底物，室温低速震荡10 m in后加100μL终止液。于酶标分析仪上450 nm读数，查标准曲线，通过计算即得到标本的sCD40L浓度值。

1.4 统计分析

采用Excel软件处理数据，数据以平均值±标准差(mean±SD)表示，采用 SPSS 16.0软件中Compare Mean模块的One way-ANOVA过程进行单因素方差分析，并进行Tukey多重比较。差异显著水平为P＜0.05，极显著水平为P＜0.01。

2 结果与分析

2.1 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清 TG和TC水平的影响

由表2可知，随着日龄的增加，各组TG浓度的变化趋势不同。3∶1组呈先上升后下降趋势;6∶1、9∶1 组呈下降趋势，12∶1 组则呈上升趋势。处理间比较发现，42日龄时3∶1和12∶1组极显著低于9∶1 组(P＜0.01)，6∶1 组显著低于 9∶1 组(P＜0.05);56 日龄时 3∶1 组显著高于 6∶1、9∶1、12∶1 组(P＜0.05)，6∶1、9∶1、12∶1 组间差异不显著;至 70日龄时则以6∶1组与9∶1组较低，2组差异不显著(P＞0.05)，但均显著低于 3∶1 和 12∶1 组(P＜0.05)。

各组TC浓度随日龄增长其变化趋势不一(表2)。3∶1、12∶1 组呈先下降后上升趋势，9∶1 组先上升后下降;6∶1组则呈下降趋势。组间比较发现，42日龄时6∶1组 TC 显著高于 3∶1组(P＜0.05)，与9∶1和12∶1组差异不显著(P＞0.05);56 日龄时6∶1组显著低于 9∶1 和 12∶1 组(P＜0.05);70日龄也以6∶1组最低，显著低于其他3组(P＜0.05)。

2.2 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清LDL和HDL水平的影响

由表3可知，除9∶1组外，其他各组LDL浓度随日龄的增加其变化趋势基本相同，呈现先略有下降再上升的趋势，但变化幅度都不大。组间比较发现 42 日龄时 3∶1、9∶1 组显著低于6∶1 组(P＜0.05)，与12∶1 组差异不显著(P＞0.05);56 日龄时，3∶1、6∶1 和12∶1组显著低于 9∶1 组(P＜0.05);70日龄时，3∶1和 6∶1组显著低于 9∶1组(P＜0.05)，而12∶1组与其他组相比差异都不显著(P＞0.05)。

表2 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清总甘油三酯和总胆固醇含量的影响Table 2 Effect ofω-6/ω-3 PUFA ratio on TG and TC concentrations in serum of Yangzhou geese mmol/L

随着日龄的增加，各组HDL浓度变化趋势不尽相同(表3)。3∶1组呈下降趋势，但在检测日龄间变化不大，6∶1、12∶1 组先下降后上升，而 9∶1 组则呈上升趋势。组间比较发现，42日龄时，6∶1、3∶1组 HDL 浓度显著高于9∶1 组(P＜0.05);56 日龄时，3∶1、6∶1、9∶1 组 HDL 浓度显著高于 12∶1 组(P＜0.05);70日龄时，6∶1组 HDL 浓度最高，显著高于 3∶1 和 12∶1 组(P＜0.05)，与9∶1 组差异不显著(P＞0.05)。

表3 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清低密度脂蛋白和高密度脂蛋白含量的影响Table 3 Effect ofω-6/ω-3 PUFA ratio on LDL and HDL concentrations in serum of Yangzhou geese mmol/L

2.3 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清HsCRP和sCD40L水平的影响

表4表明，HsCRP均值在 0.625～1.955 mg/L范围内。随着日龄的增加，HsCRP基本都呈上升的趋势，并以9∶1组和12∶1组变化幅度较大。组间比较发现，在56和70日龄时，HsCRP以3∶1组最低，且随ω-6/ω-3 PUFA的增加呈现出上升趋势，在70日龄时，6∶1组与12∶1组间差异达到显著水平(P＜0.05)。

sCD40L 均值在1.040～1.895 ng/m L 范围内(表4)。随着日龄的增加，sCD40L基本都呈上升的趋势，并以9∶1、12∶1组变化幅度较大。组间比较发现，除56日龄3∶1组与9∶1组数值相同外，各检测日龄都以3∶1组最低。虽然处理间差异都不显著(P＞0.05)，但总体上 sCD40L 随 ω-6/ω-3 PUFA比例的增加也呈现出上升趋势。

3 讨论

3.1 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血脂代谢的影响

ω-3 PUFA能够抑制脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase，FAS)、甘油二酯转酰基酶(acyl CoA:diacylgycerol acyltransferase，DGAT)等酶的活性，促进脂肪酸的氧化分解而抑制TG的合成。有研究表明，饲粮中一定水平的ω-3 PUFA能降低血清TG水平，减轻体重及体脂聚集，并在一定范围内呈剂量依赖关系［12－13］;ω-3 PUFA 还能够抑制胆固醇合成关键酶——羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的活性，减少胆固醇的吸收并增加胆固醇的排泄，而明显降低血清TC水平［14－16］。本试验进一步进行了 ω-6/ω-3 PUFA 比例影响血脂的研究，结果发现在56、70日龄，ω-6/ω-3 PUFA比例为6∶1时TG和TC水平较低，提示ω-3 PUFA降脂功能的发挥与脂肪酸的结构有一定的关系，以ω-6/ω-3 PUFA比例为6∶1时效果较好。但本研究也发现42日龄时 ω-6/ω-3 PUFA 6∶1组TG或TC水平并不是最低，这可能如陈燕芬［10］所分析的:是由于饮食对血脂代谢的影响需要一定的时间所致;也有可能是由于本次试验的饲粮中总PUFA量不足引起的。有关PUFA水平与其结构互作对血脂代谢的影响还需进一步的研究。

表4 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清超敏C反应蛋白和可溶性CD40配体浓度的影响Table 4 Effect ofω-6/ω-3 PUFA ratio on HsCRP and sCD40L concentrations in serum of Yangzhou geese

脂类物质在体内以脂蛋白形式进行转运，LDL把胆固醇从肝脏运送到全身组织而被降解利用，低密度脂蛋白胆胆固醇(LDL-C)一般与TC相平行，可反映TC的水平而为血脂异常防治的首要靶标;HDL则将各组织的胆固醇送回肝脏代谢予以清除，起着清道夫的作用。本试验结果表明，ω-6/ω-3 PUFA比例较低的组，尤其是6∶1组不仅降低了TG、TC的水平，同时该组血清LDL的水平也较低;相反，其HDL水平明显高于其他组，这与HDL清除TC的功能密切相关。因而可见，血液脂质指标可以在一定程度上反映体内脂质代谢的状况。这与我们前期研究的扬州鹅血清TC与HDL、LDL都有显著的相关的结果相一致［17］。但本研究同时也发现LDL或HDL变化范围不大，有的组间的差异并不显著。变化范围不大的原因可能是机体具有自身的稳恒和适应机制所致;而差异的不显著也可能与本试验ω-6/ω-3 PUFA比例设置数较少有关。由于迄今ω-6/ω-3 PUFA的合适范围和其对脂蛋白作用规律还不明了，因此尚需进一步开展试验进行研究。

3.2 ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅血清HsCRP和sCD40L的影响

冠心病和高脂血症患者常伴有炎症因子的升高。HsCRP是具有代表性的炎症因子之一，可预测冠脉事件的危险程度，间接反映粥样斑块的不稳定性［18－19］。sCD40L检测对冠心病患者的病情判断或预后估计也有着重要的临床意义［20］。机体正常时HsCRP浓度不受性别、饮食等影响，无显著的时间和周期性变化，随年龄的增加可能有轻度的增高。临床资料表明，健康人群的HsCRP浓度均值为1～2 mg/L。在本研究中，随扬州鹅日龄的上升HsCRP总体上有所升高，其均值在0.730～1.955 mg/L范围内变化，与上述关于人HsCRP的临床研究有一定的一致性;另外，扬州鹅sCD40L均值 在 1.040 ～1.895 ng/m L，以 人 体 正 常sCD40L水平为参照，本试验测定结果属于正常变化范围［21－22］。以上结果表明本试验群体的稳定性，同时也提示家禽与人的HsCRP、sCD40L可能具有一定的共性。

鱼油(富含ω-3 PUFA)或ω-3 PUFA的抗炎症作用机制之一是，竞争性抑制脂氧合酶(LOX)和前列腺素环加氧酶(COX)这2类影响脂肪酸代谢的活性酶的代谢途径，抑制AA来源的促炎症细胞因子的生成［23］。由于 ω-3 PUFA、ω-6 PUFA 代谢上相互竞争，其间适合的比例对血脂代谢尤为关键。本研究表明，HsCRP总体上有随ω-6/ω-3 PUFA升高而上升的趋势，而且在70日龄时达到显著水平;sCD40L在处理间差异虽然不显著，但也随ω-6/ω-3 PUFA的升高而上升。这表明较低ω-6/ω-3 PUFA 比例(3∶1)有降低 HsCRP、sCD40L的趋势，该结果可能为心血管疾病的预防与治疗提供一些参考。但本研究也发现ω-6/ω-3 PUFA比例对炎症因子sCD40L、HsCRP等的影响与对血脂TC、LDL、TG、HDL等的影响不尽一致。其原因是鱼油或ω-3 PUFA的抗炎作用可能独立于降脂之外，且其抗炎途径是多重性的。这一点在其他的一些研究报道中也可以得到证实:高脂血症患者经过治疗后血脂基本没有发生变化，但是CD40L和sCD40L比治疗前都有明显降低［24］。

4 结论

①ω-6/ω-3 PUFA比例对扬州鹅的血脂代谢有一定的影响，其比例为6∶1时有较好的降低血脂的效应。

② 低 ω-6/ω-3 PUFA 比例(3∶1)饲粮有降低扬州鹅HsCRP和sCD40L的趋势。

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Author，WANG Mengzhi，lecturer，E-mail:mengzhiwang@yahoo.cn

(编辑 赵天章)

Effect ofω-6/ω-3 PUFA Ratios on Blood Lipid Metabolism and Predictive Factors for Coronary A rtery Disease in G row ingYangzhouGeese

WANG Mengzhi1，2PAN Xiaohua1WANG Jianfei1YU Lihuai1WANG Hongrong1WANG Jiaqi2

(1.College of Animal Science and Technology，Yangzhou University，Yangzhou225009，China;2.State Key Laboratory of Animal Nutrition，Institute of Animal Sciences，The Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing100193，China)

The objective of this trial was to investigate the effect of differentω-6/ω-3 PUFA ratios on blood lipid metabolism，and predictive factors for coronary artery disease in grow ingYangzhougeese.Hundred and sixty 21-day-old healthyYangzhougeesewith average body weightof(0.407 0.023)kg were random ly divided into 4 groups.They were fed diets with differentω-6/ω-3 PUFA ratios，which were 3∶1，6∶1，9∶1 and 12∶1，respectively.The blood samples were obtained to determ ine the blood lipid，hypersensitive C-reactive protein(HsCRP)，and soluble CD40 ligand(sCD40L)at the age of 42，56，and 70 days，respectively.The results showed as follows:the geese fed the dietwith the ω-6/ω-3 PUFA ratio of 6∶1 hadmuch lower blood total triglyceride(TG)(P＜0.05)，total cholesterol(TC)(P＜0.05)，low-density lipoprotein(LDL)(P＜0.05)，and the highesthigh-density lipoprotein(HDL)(P＜0.05)among the 4 groups at the age of 56 or 70 days.Itwas further observed thatblood HsCRP or sCD40L levelswere increased along with the ω-6/ω-3 PUFA ratio increasing，and generally were all the lowest in 3∶1 group，although no significant differenceswere found among the 4 groups(P＞0.05).In conclusion，the dietwith ω-6/ω-3 PUFA ratio of 6∶1 can decrease blood lipid;moreover，the dietwith low ω-6/ω-3 PUFA ratios(3∶1)has a tendency to decrease blood HsCRP and sCD40L levels inYangzhougeese.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2011，23(8):1289-1295］

ω-6/ω-3 PUFA ratio;Yangzhougoose;blood lipid;HsCRP;sCD40L

S835

A

1006-267X(2011)08-1289-07

10.3969/j.issn.1006-267x.2011.08.006

2011－02－22

扬州大学科技创新培育基金(2010CXJ054);动物营养学国家重点实验室2011年度开放课题(2004DA125184F1106);中国博士后科学基金第四十九批面上资助项目(1520)

王梦芝(1972—)，女，江苏徐州人，博士，讲师，从事草食动物与消化道微生态营养研究。E-mail:mengzhiwang@yahoo.cn