前列腺癌组织中Aurora-A蛋白及mRNA的表达变化及意义

顾润国，李科威，来卫东，刘琳琳

(1山东医学高等专科学校，山东临沂276000;2潍坊医学院)

Aurora-A基因是新近发现的调解中心体、微管功能的丝氨酸/苏氨酸激酶［1］，其过表达被认为与多种实体肿瘤的发生有关［2］，是一种新的癌基因［3］。有研究发现在前列腺癌形成过程中Aurora-A可能起一定作用［4］。2010年3～12月，我们观察了前列腺癌组织Aurora-A蛋白和Aurora-A mRNA的表达变化，并分析Aurora-A表达与前列腺癌发生发展的关系。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 46例前列腺癌患者，年龄56～93岁，平均69.32岁。高分化24例、中分化10例、低分化12例;临床分期A期9例、B期18例、C期13例、D期6例。取其手术切除前列腺癌组织标本为前列腺组。另取46例良性前列腺增生患者手术切除的前列腺组织标本为前列腺增生组，28例无前列腺疾病尸体的前列腺组织为对照组。

1.2 Aurora-A蛋白的检测方法 采用免疫组化SP法。操作按试剂盒说明书进行。以PBS代替一抗为阴性对照，以已知阳性切片为阳性对照。

1.3 Aurora-A mRNA的检测方法 采用RT-PCR法。Aurora-A上游引物序列5'-ACCTTCGGCATCCTAACT-3'，下游引物序列 5'-GAGGCTTCCCAACTACAT-3'，扩增产物长度423 bp。扩增产物行2%琼脂糖凝胶电泳，采用凝胶成像分析系统摄像并进行半定量分析，mRNA表达量=目的基因条带积分吸光度值/内参照β-action基因条带积分吸光度值。

1.4 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件。计量数据以±s表示，比较用t检验;计数资料比较用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

前列腺癌组39例(84.78%)Aurora-A蛋白阳性，Aurora-A mRNA 表达量为 1.15 ±0.52;前列腺增生组分别为 2 例(4.35%)、0.25 ±0.17，对照组分别为0例、0.11±0.04。前列腺癌组 Aurora-A 蛋白阳性表达率和Aurora-A mRNA表达量均明显高于前列腺增生组和对照组(P均＜0.05)。前列腺癌组中低分化者Aurora-A mRNA表达量为1.43±0.50，明显高于中、高分化者的 0.99 ±0.51(P ＜0.05)，Aurora-A mRNA表达量与前列腺癌分化程度有关。前列腺癌组中临床分期为A、B期者Aurora-A mRNA 表达量为0.94±0.45，明显低于 C、D 期者的1.35 ±0.57(P ＜0.05)，Aurora-A mRNA 表达量与前列腺癌临床分期有关。

3 讨论

Aurora激酶家族包括三个成员:Aurora-A、Aurora-B、Aurora-C［5］。研究表明 Aurora-A 与恶性肿瘤具有明显相关性，乳腺癌［6］、食管癌［7］、肝癌［8］和膀胱癌［9］中均发现有Aurora-A的过表达。Aurora-A不仅参与中心体的复制、分离和成熟，而且还参与纺锤体组装及其稳定性的维持，中心体对于细胞准确完成有丝分裂必不可少，因此当Aurora-A过表达时将会导致染色体组的不稳定性及中心体数目扩增，最终导致肿瘤的形成［10］。目前关于Aurora-A的研究主要集中在Aurora-A参与的一些与肿瘤成因相关的信号通路的调节、细胞周期调节及中心体行为等方面，关于Aurora-A与肿瘤的分化程度及临床分期相关性的研究鲜有报告。本研究结果显示Aurora-A蛋白主要表达于细胞质中，细胞核中偶有表达，在前列腺癌组织中的表达量明显高于良性增生及正常前列腺组织，表明前列腺癌组织中Aurora-A过表达，且Aurora-A过表达可能参与了前列腺癌的发生发展过程。其机制可能是使染色质纤维解凝集、蛋白质复合体向染色质集结，导致中心体分离缺陷及染色体不稳定性增加［11，12］，在一定程度上影响有丝分裂的准确性，促使前列腺癌的发生和发展。本研究结果显示，Aurora-A mRNA表达量明显高于良性增生及正常前列腺组织，且与分化程度及临床分期密切相关。提示Aurora-A基因的过表达与前列腺癌的临床进展、肿瘤的侵袭性转移以及肿瘤细胞的恶性程度相关。

［1］Stenoien DL，Sen S，Mancini MA，et al.Dynamic association of a tumor amplified kinase，Aurora-A，with the centrosome and mitotic spindle［J］.Cell Motil Cytoskeleton，2003，55(2):1134-1146.

［2］Bolanos-Garcia VM.Aurora kinase［J］.J Biochenm Cell Biol，2005，37(8):1572-1577.

［3］Yamamoto Y，Matsuyama H，Furuya T，et al.Centrosome hyperamplification predicts progression and tumor recurrence in bladder cancer［J］.Clin Cancer Res，2004，10(19):6449-6455.

［4］屈艺，张林，母得志，等.Aurora A在人前列腺癌中的表达［J］.四川大学学报，2008，39(1):1-5.

［5］Ke YW，Dou Z，Zhang J，et al.Function and regulation of Aurora/Ip11p kinase family in cell division［J］.Cell Res，2003，13(2):69-81.

［6］Kulkarni AA，Loddo M，Leo E，et al.DNA replication licensing factors and aurora kinases are linked to aneuploidy and clinical outcome in epithelial ovarian carcinoma［J］.Clin Cancer Res，2007，13(20):6153-6161.

［7］Wang XX，Liu R，Jin SQ，et al.Overexpression of Aurora-A kinase promotes tumor cell proliferation and inhibits apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma cell line［J］.Cell Res，2006，16(4):356-366.

［8］Jeng YM，Peng SY，Lin CY，et al.Overexpression and amplification of Aurora-A in hepatocellular carcinoma［J］.Clin Cancer Res，2004，10(6):2065-2071.

［9］Suzuki T，Suzuki Y，Fujioka T.Expression of the catalytic subunit associated with telomerase gene in human urinary bladder cancer［J］.J Urol，1999，162(6):2217-2220.

［10］Li JJ，Weroha SJ，Lingle WL，et al.Estrogen mediates Aurora-A overexpression，centrosome amplification，chromosomal instability，and breast cancer in female ACI rats［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2004，101(52):18123-18128.

［11］Berdnik D，Knoblich JA.Drosophila Aurora-A is required for centrosome maturation and actin-dependent asymmetric protein localization during mitosis［J］.Curr Biol，2002，12(8):640-647.

［12］Mori D，Yano Y，Toyo-oka K，et al.NDEL1 phosphorylation by Aurora-A kinase is essential for centrosomal maturation，separation and TACC3 recruitment［J］.Mol Cell Biol，2007，27(1):352-367.