高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题

2011-04-13周春凤山东绿都安特动物药业有限公司滨州256600

山东畜牧兽医 2011年3期

周春凤（山东绿都安特动物药业有限公司滨州 256600）

高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题

周春凤（山东绿都安特动物药业有限公司滨州 256600）

高效液相色谱仪作为兽药检验中必备的精密仪器设备之一，因其可信度强，精确度高，在兽药的定性和定量分析中应用越来越广泛，随着新药典的颁布，很多种兽药的检验项目，如鉴别、含量等都改成了高效液相色谱法。本实验室所使用的是美国实验仪器公司生产的Laballiance高效液相色谱仪，现就这几年来的工作实践，论述一下高效液相色谱仪使用中应注意的几点问题。

1 熟悉设备

完全的了解设备可以避免因操作失误而导致仪器损坏，有利于对仪器进行保养，高效液相重在保养。新购入设备，厂家的技术人员负责进行安装、调试，这时候，负责高效液相检验的化验员最好选择一种药物，进行完整的演练，这样印象深刻，省得以后的很多不确信。另外，最好在调试的时候由化验员自己重新安装一下工作站，因为在以后的工作中可能会损坏工作站，到时候再打电话咨询就很难说得明白了，并且最好完整记录下安装的步骤。设备的安装调试说明书读至少3遍才能有所收获，有所悟，这也要在非常熟悉实验步骤和设备的前提下，所以就不如及早多费心做的好。

2 设备易出现的问题

高效液相色谱仪主要由四大部分组成：柱温箱(包括进样阀)、高压输液泵、检测器、工作站。（1）柱温箱及进样阀容易出现的问题是：温控仪失灵，不能正确控制柱温箱的温度，这时只要更换一下温控仪就可以了，温控仪只在各样品系统适用性试验中有温控要求时应用，如果无要求，就不必开启；漏液，如发现对照品和样品的出峰时间都不规律，而且每次的出峰面积也差别很大，根本无法对样品进行定性和定量，这时候需要检查色谱柱和各金属细管的连接处，可能是连接处的塑料套因连接时未按要求而变形了，因其一旦变形就没法修复，所以换一个新的，按要求套上即可。（2）高压输液泵容易出现的问题是：①压力升不上去：检查一下桌面上是否有漏下的液滴，如果有拧紧漏液处即可。②压力过高：看一下抽取流动相的塑料管里是否有气泡，如果有，则按一下Stop，这时候千万别抽气泡，等压力降下来，最好到0Psi，这时候抽出气泡。如果在过高的压力下抽气泡，后果会非常严重，流通池会被鼓破，无法分析样品，并且会给你带来很多困惑，当然如果有经验的话会及时发现，因为流通池破了后会流出蓝色的墨水样的液体。（3）检测器容易出现的问题：①流通池：以上已经提过了，如果流通池破了，则需要及时更换。②氘灯：氘灯的寿命一般为2000h，如果检测器打不开了，则说明氘灯超过其使用期限，需要更换了。在日常检测中，一般在进样品之前开启检测器，样品分析完毕，及时关闭检测器，这样可以延长其使用年限，避免不必要的浪费。（4）工作站容易出现的问题：安装工作站的电脑一般不要进行其他的工作，一旦出现问题，则需重新安装。

3 正确的实验步骤

实验步骤包括样品的处理和流动相的配制。（1）样品的配制：严格按照样品质量标准配制，样品最好现配先做，不要搁置，以防样品分解，导致含量变小。（2）流动相的配制：流动相最好现配先用，尤其含盐量高的流动相。流动相的抽滤需要注意：如果流动相中含有机溶剂，则需要用有机系滤膜，若使用水系滤膜，则滤膜会被溶解入流动相，流动相只能废掉。如果流动相不含有机溶剂则需要用水系滤膜，若用有机系滤膜，则再高的压力也抽滤不下来。同一批样品一定要用同一批流动相。流动相配制好后，要先抽滤，再超声。