宫颈鳞状细胞癌组织中Smac、Livin的表达及意义

林 静，侯巧燕，农林琳，乐江华*

(1桂林医学院附属医院，广西 桂林 541001;2桂林医学院)

宫颈鳞状细胞癌的发生和发展是一个复杂的病理过程，经历从正常上皮→子宫颈上皮内瘤变→子宫颈癌几个阶段。2008年1月～2009年10月，我们采用免疫组化法检测了宫颈鳞状细胞癌组织中线粒体促凋亡蛋白(Smac)、存活蛋白(Livin)的表达，旨在进一步了解宫颈鳞状细癌的发生、发展机制。

1 材料与方法

1.1 材料 选取桂林医学院附属医院手术切除的宫颈鳞状细胞癌组织标本12份(宫颈癌组)，均为女性，年龄5～57岁。所有病例均经病理确诊，且术前均未行放、化疗。另选32份宫颈上皮内瘤变组织(内瘤变组)和9份正常宫颈组织(正常组)作对照。三组一般资料无统计学差异。主要试剂:组织芯片(桂林泛普生物技术有限公司协助制作)，免疫组化染色多克隆抗体Smac(美国Santa Cruz Biotechnology公司)，免疫组化染色多克隆抗体Livin(武汉博士德公司)，二抗试剂盒(福建迈新公司)。

1.2 Smac、Livin表达检测 所有标本均经10%甲醛液固定，常规石蜡包埋。用特制的组织芯片制作器，将以上组织蜡块制作成组织芯片，共53个组织芯粒，星形细胞瘤Ⅲ级1例，备用。每芯直径1.5 mm，厚度4 μm。采用成人胃标本组织切片作为阳性对照。免疫组化染色操作严格按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木精复染，抗原修复。用已知阳性胃组织标本作阳性对照;以PBS代替一抗作阴性对照。一张组织芯片染一种抗体，用1张芯片做常规HE染色对照。结果判断标准:Smac及Livin阳性细胞均为胞质着色，均呈棕黄色。参照Bachtiary等［1］方法，高倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数200个细胞，共1000个，染色弱者、清晰者、强者分别记为1、2、3 分;阳性细胞数 ＜1.0%为 0 分，1.0%～10.0%为 1 分，11.0% ～50.0%为 2 分，51.0% ～80.0%为3分，＞80.0%为4分，综合两项评分总分。总分≥3分为Smac、Livin阳性表达，总分＜3分为阴性表达。免疫组化结果由两位病理学专家独立阅片确定，不一致之处协商后统一意见。分析Smac、Livin表达的相关性。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，数据采用Fisher确切概率法或χ2检验、R×C表资料的相关分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Smac、Livin表达 宫颈癌组、内瘤变组、正常组Smac的阳性表达率分别为91.67%、62.50%、0，宫颈癌组、内瘤变组阳性率均高于对照组，宫颈癌组阳性率高于内瘤变组(P均＜0.01);Livin的阳性表达率分别为 91.67%、90.63%、22.22%，宫颈癌组、内瘤变组阳性率均明显高于对照组(P均＜0.01)。

2.2 相关性分析 宫颈鳞状细胞癌中Smac、Livin表达呈正相关(χ2=5.3242，P ＜0.05)。

3 讨论

Smac是一种凋亡因子，可以与多种凋亡蛋白抑制剂(IAPs)分子结合，是目前发现的惟一存在于哺乳动物细胞中直接抑制IAPs的蛋白。Smac在细胞受到各种凋亡刺激时与细胞色素c一起从线粒体释放出来与IAPs结合，解除IAPs对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)的抑制作用，进而促进细胞凋亡［2］。Yoo等［3］用免疫组化分析 Smac的表达，结果显示癌中表达率为62%，在肉瘤中表达率为22%，表明其在不同肿瘤组织中的表达不同。但包仕廷［4］等研究表明，Smac在肝细胞癌中低表达，而在癌旁组织和正常肝组织中高表达。本研究宫颈癌组、内瘤变组Smac阳性率均高于对照组，此与Krepela［5］等在非小细胞肺癌中的报道相符。

IAPs是一类内源性细胞凋亡抑制因子，在很多物种中起着抑制凋亡的作用，其过度的表达引起细胞凋亡不足与肿瘤的发生发展密切相关。Livin作为人类IAPs家族的新成员，有明显的抗细胞凋亡作用，主要通过与介导细胞凋亡的下游效应分子，即激活形式的Caspase-3和Caspase-7结合，并抑制其活性而发挥作用。文献报道，Livin在大多正常成人组织中低表达或不表达，而在多数恶性肿瘤中高表达。本研究宫颈癌组、内瘤变组Livin阳性率均高于对照组，此与Hariu等［6］在肺癌中的报道一致，表明Livin有可能促进了宫颈癌的发生发展。本研究还发现，宫颈鳞状细胞癌中Smac、Livin表达呈正相关，提示两者可能共同参与细胞凋亡通路的调节，而促进宫颈鳞状上皮病变的发生发展。

总之，Smac和Livin表达与宫颈鳞状细癌的发生发展密切相关，两者表达相关性提示可能共同参与细胞凋亡通路的调节。

［1］Bachtiary B，Schindl M，Potter R，et al.Overexpression of HIF-1α indicates diminished response to radiotherapy and unfavorable prognosis in patients receiving radical radiotherapy for cervical cancer［J］.Clin Cancer Res，2003，9(6):2234-2240.

［2］Shivapurkar N，Reddy J，Chaudhary PM，et al.Apoptosis and lung cancer:a review［J］.J Cell Biochem，2003，88(5):885-898.

［3］Yoo NJ，Kim HS，Kim SY，et al.Immunohistochemical analysis of Smac/DIABLO expression in human carcinomas and sarcomas［J］.APMIS，2003，111(3):382-388.

［4］包仕廷，桂水清，林木生，等.Smac和Survivin基因在肝癌中的表达及与细胞凋亡的关系［J］.中华实验外科杂志，2005，22(9):1062-1063.

［5］Krepela E，Prochazka J，Fiala P，et al.Expression of apoptosome pathway-related transcripts in non-small cell lung cancer［J］.J Cancer Res Clin Oncol，2006，132(1):57-68.

［6］Hariu H，Hirohashi Y，Torigoe T，et al.Aberrant expression and potency as a cancer immunotherapy target of inhibitor of apoptosis protein family.Livin/ML-IAP in lung cancer［J］.Clin Cancer Res，2005，11(3):1000-1009.