睾丸肉膜囊固定术在大鼠精索扭转模型中的应用*

文焰林，邓显忠，崔 曙，姜 果，鲜述彦，廖 波

(川北医学院附属医院泌尿外科，四川南充 637000)

目前，大鼠精索扭转模型仍被广泛运用于精索扭转及睾丸移植缺血再灌注损伤的实验研究。但以往该模型的建立往往利用缝线缝合睾丸白膜固定扭转模型，或用线结扎精索血管。由于缝线缝合导致血睾屏障的破坏及睾丸炎症性反应，使得精索扭转模型的建立相对后续研究有很大干扰，而用线结扎容易导致结扎处水肿，要求恢复血供时不易解除结扎线。本文就利用睾丸肉膜囊固定术来建立一种对睾丸无损伤、简便易行的大鼠精索扭转模型，为临床病理生理、形态学、缺血再灌注损伤及对健侧睾丸功能影响的进一步研究打下基础。

1 材料与方法

1.1 材 料

选用SD雄性大鼠42只，购自川北医学院动物实验中心［scxn(川)2008－18］，体重(65－219)g，平均120g。手术在川北医学院动物实验中心动物手术室进行。

1.2 方 法

将大鼠称重，利用随机数字表分组编号。用2%戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉后，固定与鼠板上，消毒。用手将左侧睾丸由腹腔推送至左侧阴囊内，剪开阴囊皮肤，用齿蹑提起左侧阴囊皮肤，扩大阴囊皮肤切口，暴露肉膜层，用止血钳充分分离、扩张左侧阴囊皮肤与肉膜层之间的间隙，提起并打开肉膜层，通过肉膜层拉出睾丸、附睾(图1 A)，分离睾丸引带，按要求将精索顺时针扭转720°后维持精索位置不变(图1B)，缝合缩小肉膜层切口，使仅容精索通过，将睾丸、附睾置于阴囊皮肤与肉膜层之间分离的肉膜囊内，拉拢缝合阴囊切口。96小时后(按后续试验要求所选择的时间)打开原切口进入阴囊，见睾丸、附睾缺血坏死(图1C)，以上所有手术操作均严格按照无菌原则进行。

2 结果

手术时间为(3－5)分钟，麻醉后死亡3只，都为体重相对轻的大鼠，其余39只大鼠于手术96小时后打开切口见睾丸、附睾缺血坏死提示建模成功。

3 讨论

精索扭转又称睾丸扭转，好发于青少年，每年25岁以下的青少年发病率为1/4000［1］，成人发病率相对较低，Witherington等［2］统计睾丸扭转患者中成人患者所占比例为39%。目前研究证明一侧睾丸扭转可致同侧睾丸的组织学损伤，对侧睾丸是否受损在解剖和生理方面都有争议，虽然Turner等［3］、Tarhan等［4］认为一侧睾丸扭转对对侧睾丸没有影响。但绝大多数学者认为会导致对侧睾丸功能受损，关于对侧睾丸损伤的发生也存在不同的学说:①交感神经反射学说:部分学者认为双侧睾丸之间的神经反射导致对侧损伤。Shiraishi等［5］通过实验发现一侧睾丸扭转1小时后复位，对侧睾丸组织的NO合成酶(NOS)表达增加，睾丸组织萎缩，生精细胞凋亡增加，认为可能存在神经血管舒缩反射导致对侧的睾丸发生改变。Otcu等［6］观察到一侧睾丸扭转导致健侧生殖股神经交感神经冲动释放增加，推测存在一种自主反射机制，由伤害性刺激激活导致对侧睾丸损伤。②自身免疫学说:由于血生精小管屏?障的破坏，导致激活了例如抗精子抗体、抗间质细胞抗体等免疫反应，引起对侧和患侧睾丸功能受损。Rodriguez等［7］通过实验发现一侧睾丸扭转后复位导致对侧睾丸曲精小管和生殖细胞凋亡，认为由于体液和细胞免疫激活巨噬淋巴细胞系统和肥大细胞等引起肿瘤坏死因子、炎症反应作用导致对侧睾丸生殖细胞凋亡。③缺血再灌注损伤:对侧睾丸的缺血再灌注损伤导致ROS增加和氧自由基等致细胞线粒体等的脂质过氧化反应引起对侧睾丸受损。

关于精索扭转动物模型的研究历史较长，但到目前为止尚无公认的方案。Turner等［8］报道取下腹正中切口，拖出睾丸，切断睾丸引带，分离周围筋膜至附睾头，按要求旋转睾丸制作扭转模型后用6－0单丝线缝合睾丸和阴囊，Abasiyanik等［9］取左侧腹股沟切口，拖出睾丸，按要求扭转睾丸，用11－0无损伤缝合线缝合睾丸白膜和阴囊。Merimsky等［10］取腹部切口，拖出精索睾丸，将精索结扎，保证静脉回流受阻，引起充血性坏死，但又不能完全阻断睾丸血供，按要求保留结扎线到规定时间后去掉结扎线。以上三种是常见的建立精索扭转模型的方法，但关于结扎精索后缺血致对侧睾丸功能受损的报道不尽相同，Savas等［11］也认为结扎引起的缺血导致对侧睾丸功能受损，但Nagler等［12］认为结扎后不会导致对侧睾丸功能受损。关于利用缝线固定睾丸建立模型有很多弊端，Lotan等［13］利用流式细胞术分析利用缝线缝合睾丸固定的方法导致生精细胞萎缩的比例超过肉膜囊固定的方法，并且缝线穿过睾丸实质易导致睾丸炎症性损害，会明显干扰精索扭转的实验相关数据资料。虽然利用线结扎精索的方法没有破坏血睾屏障，不会导致由于缝线破坏睾丸曲细精管引致精子等抗原溢出引起的免疫性反应，但由于大鼠精索细小，结扎后组织水肿，不易拆除结扎线，结扎程度也不易掌握。鉴于一侧精索扭转导致健侧睾丸生精功能受损的机制未明，现三种学说中明确提出了自身免疫学说，所以建立精索扭转模型时必须避免人为的引起睾丸自身免疫反应。Ritchey［14］等介绍利用睾丸肉膜囊固定术是无损伤的睾丸固定术，笔者采用睾丸肉膜囊固定术用于大鼠精索扭转模型的建立，最大程度的模拟了该病的自然发病过程，该建模方法国内外未见报道，此种方法建立大鼠精索扭转模型成功，手术操作简单、出血少，没有损伤睾丸实质，对缺血再灌注损伤、免疫学研究等没有干扰，是建立精索扭转模型的良好方法，值得推广。

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