糖化血红蛋白快速检测技术的应用及问题分析

兵器工业北京北方医院（100089）杨辉

最新资料表明，中国糖尿病患者已经达9200万人以上[1]。糖尿病研究（DCCT）[2]、英国前瞻性糖尿病研究（UKPDS）[3]以及熊本研究（Kumamoto Study）[4]均证明了糖化血红蛋白（HbA1c）水平的下降与微血管并发症发生的风险下降显著相关，这为临床上强化控制血糖、减少糖尿病微血管并发症提供了循证医学证据。HbA1c是长期血糖控制情况的金标准，它反映了一种慢性血糖状态，其特异性的并发症就是血糖长期性增高的结果。

1 仪器和方法

采用快速检测技术，所用仪器为挪威产NycoCard®REAERⅡ。

2 原理

利用硼酸亲和原理在颜色反射计上进行HbA1c快速检测。血液加入试剂中，红细胞立即溶解，使全部的血红蛋白都沉淀，HbA1c特异地与硼酸复合物结合呈蓝色，而未糖化Hb呈红色，通过两者光强度的比例计算出样品中HbA1c的百分浓度。

3 检测步骤及注意事项

3.1 标本采集。加抗凝剂或不加抗凝剂（EDTA、肝素和NaF）的毛细管血和静脉血均可应用。5μl全血加入R1试剂中，摇数下，使全血充分溶解，放置2min，时间要严格控制，后轻混匀，则可开始检测。

3.2 试剂务必在2～8℃储存，避免放在25℃以上或湿度70%以上的环境，勿冰冻。R1试剂要避光保存且必须2～8℃储存。检测时恢复室温或手心紧握30s即可使用。

3.3 含滤膜反映板可储存在室温15～25℃下暗处，避免20%以下及70%以上湿度，洗涤液R2储存在室温15～25℃，使用前需平衡到室温。

3.4 要严格控制5μl全血于R1试剂中，放置2min。在社区医院，因为少有成批检测HbA1c的标本，要用定时器定好时间。

3.5 2min后，重新混匀，得到均匀悬液，取25μl悬液到反应板中，吸管头离反应孔0.5cm以上，将吸管内液体快速加入反应孔中部，悬液渗入滤膜，避免气泡。否则会出现“膜表面有白点”提示，原因是沉淀物未覆盖试验孔的全部表面。此时要重新加样。

3.6 放25μl洗涤液于反应板中，同样要避免气泡。

3.7 反应板要在5min内用仪器读取结果。

3.8 不同批号试剂不能交叉使用。

4 质控和校正

厂家每月会做一次质控和仪器校正。

5 检测过程中常遇到的问题及处理方法

5.1 仪器显示“Hb conc too low”，表示Hb浓度太低，可能的原因是样品的Hb浓度低于可测范围（即小于6g/100ml）。处理方法：重试样品，用10μl全血，加入1个R1试管中，仪器显示正确结果。

5.2 仪器显示“Reduce Hb conc”，表示降低Hb浓度，可能的原因：(1)样品的Hb浓度高于可测范围（即大于18g/100 ml）。(2)加到反应孔的洗涤液量太少。处理方法：第(1)种常见于男性患者。重新采血，混合两个R1试剂于1个试管中，样品5μl，仪器显示正确结果。第(2)种问题很少出现，应重新试验，洗涤液加足25μl。

HbA1c的检验应严格控制各个环节，以保证检验结果的可靠性和准确性，只有这样才能为临床提供有效的信息，并指导临床用药。此方法虽方便快捷，但有其局限性，其精密度和准确度低于其它方法，且对样品中Hb量有较大限制。