气相色谱法测定氯雷他定原料的残留溶剂

李萍

(昆明积大制药有限公司，云南昆明650106)

气相色谱法测定氯雷他定原料的残留溶剂

李萍

(昆明积大制药有限公司，云南昆明650106)

用毛细管柱气相色谱法建立氯雷他定残留溶剂(甲苯、乙腈)的测定方法。结果表明:本测定法方法简单、结果准确、重现性好，可用于氯雷他定原料中甲苯、乙腈2种残留溶剂的同时测定。

气相色谱法;氯雷他定;残留溶剂;测定

氯雷他定为昆明积大制药有限公司研制的新型、强效抗过敏药，于2004年批准上市。批准的适应症为用于缓解过敏性鼻炎有关的症状，亦适用于缓解慢性荨麻疹、瘙痒性皮肤病及其他过敏性皮肤病的症状及体征。属长效三环类抗组胺药，竞争性地抑制组胺H1受体，抑制组胺所引起的过敏症状，无明显的抗胆碱和中枢抑制作用。氯雷他定在合成工艺中使用了甲苯、乙腈作为溶剂，这些溶剂会对人体的健康和环境造成危害。在生产中完全除去这些溶剂是非常困难的，但必须确保产品中的残留量是人体可以接受的，ICH对各类溶剂残留量有着严格的规定。目前溶剂残留量测定的进样方式有顶空进样法和溶剂直接进样法，本研究建立了毛细管柱气相色谱法，以直接进样的方式测定2种溶剂(甲苯、乙腈)的残留，方法简便、重现性好。

1 仪器与试剂药品

仪器:日本岛津GC－2010气相色谱仪;FID检测器;载气为高纯氮气;Shimadzu GC solution色谱工作站;SE30－(60m×0.53mm×5μm)毛细管柱，固定相为100%二甲基聚硅氧烷。

试剂药品:氯雷他定原料(批号:090801、090802、090803)，由昆明积大制药有限公司生产;二甲基亚砜DMSO(AR);甲苯(AR);苯(AR);乙腈(HPLC)。

2 溶液的配制

①空白溶液:二甲基亚砜DMSO。

②内标溶液:精密称取苯30.5mg，置100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度，制得305μg/ml的内标液。

③对照储备液:精密称取甲苯452.4mg，乙腈202.8mg，置100ml容量瓶中，用DMSO稀释至刻度;取稀释液10.0ml置250ml容量瓶中，用DMSO稀释定容至刻度，得到浓度为甲苯180.96μg/ml、乙腈81.12μg/ml的对照储备液。

④对照液:精密量取2.5ml对照储备液③于10ml容量瓶中，精密加内标溶液②1.0ml，用DMSO定容至刻度，得到甲苯45.24μg/ml、乙腈20.28μg/ml的对照液。

3 实验方法及结果

3.1 色谱条件和色谱图

采用SE30－(60m×0.53mm×5μm)毛细管柱，固定相为100%二甲基聚硅氧烷;以氮气为载气，FID检测器250℃，采用程序升温，柱温为60℃，保持5.0min，以15℃/min的速度升温至200℃，保持3min，进样口温度250℃，70KPa(恒压模式)，分流直接进样，分流比1∶5，进样体积:1.0μl。内标法计算残留溶剂的含量。对照溶液和空白溶液色谱图见图1。

3.2 系统适应性试验及结果

上述对照液色谱中甲苯、乙腈、苯峰与相邻峰的分离度＞2，理论塔板数均＞10000，拖尾因子符合中国药典的要求。

3.3 专属性

(1)溶液配制

⑤供试液:精密称取样品0.5102g，置10ml容量瓶中，精密加内标溶液②1.0ml，用DMSO溶解，并稀释至刻度。

⑥空白+乙腈+苯+甲苯:精密加内标溶液②1.0ml及对照储备液③2.5ml置10ml容量瓶中，用DMSO溶解，并定容至刻度。

⑦空白+乙腈:用10μl微量进样器量取2.5μl(约2mg)乙腈于100ml容量瓶中用DMSO定容至刻度，乙腈浓度约20μg/ml。

⑧空白+乙腈+苯:用10μl微量进样器量取3.0μl(约2.5mg)苯于空白+乙腈⑦中，苯浓度约25μg/ml。

(2)根据测定方法，分别进样空白溶液①、空白+乙腈⑦、空白+乙腈+苯⑧、对照溶液④、供试液⑤、空白加+乙腈+苯+甲苯⑥，并记录相应色谱图。根据各图谱中组分保留时间定性，主要组分色谱峰的保留时间及其相对于DMSO的相对保留时间见表1。结论:符合专属性试验要求，本方法具备较强的专属性，能正确鉴定和检出甲苯、乙腈。

表1 各组分色谱峰保留时间及分离度

3.4 线性和范围

(1)对照液系列配制。精密量取0.25、0.5、1.0、1.5、2.5、3.0、4.0ml对照储备液③分别于7个10ml容量瓶中，分别精密加内标溶液②1.0ml，用DMSO定容至刻度。

(2)按测定方法，依次进样对照液系列1μl，记录相应色谱图。将各浓度下溶剂组分面积比Ar/Ai的平均值对浓度进行线性回归，计算方法的线性方程和相关系数，并确定方法的线性范围。结果见表2。

表2 甲苯乙腈工作曲线回归方程

(3)线性回归曲线图

由图2、图3可以看出:乙腈在2.028～32.448μg/ml浓度范围内，面积比Ar/Ai与其浓度成良好的直线性关系;甲苯溶剂在4.524～72.384μg/ml浓度范围内，面积比Ar/Ai与其浓度成良好的直线性关系。

3.5 精密度

3.5.1 重复性

精密量取2.5ml对照储备液③于10ml容量瓶中，精密加内标溶液②1.0ml，用DMSO定容至刻度。按方法测试，连续进样8次，记录相应色谱图，统计面积比Ar/Ai的精密度RSD。统计测试结果为:乙腈RSD为0.5%，甲苯RSD为0.4%。说明乙腈、甲苯测试结果均符合重复性试验精密度要求。

3.5.2 中间精密度

在不同时间由不同人员进行中间精密度的测试，测试方法同3.5.1，记录相应色谱图，统计面积比Ar/Ai的精密度RSD值。统计重复性测试结果和中间精密度测试结果共16次的精密度RSD值，统计测试结果为:乙腈RSD为0.7%，甲苯RSD为0.4%。说明乙腈、甲苯测试结果均符合中间精密度试验精密度要求。对两组测试结果进行F检验统计分析，结果为:乙腈F统计值2.02，甲苯F统计值1.20，均小于F(7，7，0.05)值3.79。说明不同的分析人员在不同的日期按本方法测试，测试结果稳定，无显著性差异，符合中间精密度试验要求。

3.6 定量限LOQ和检测限LOD

用DMSO稀释对照储备液③至一定浓度，按本方法进行测试，并记录相应色谱图。根据乙腈、甲苯峰的信噪比来确定其检测限和定量限。检测限的信噪比不低于3/1，定量限信噪比不低于10/1。乙腈检测限为0.234μg/ml，定量限为0.782μg/ml;甲苯检测限为0.167μg/ml，定量限为0.556μg/ml。

3.7 回收率试验

采用加样回收率，精密称取药品约0.5g，置10ml容量瓶中，加入3个不同浓度的对照液，按样品测定的方法进行回收率测定，结果见表3。

表3 回收率计算结果

由表3可看出:①乙腈、甲苯回收率都在90.0%～110.0%以内;②乙腈、甲苯9次回收率测定结果精密度RSD值都不大于5.0%。得出结论:乙腈、甲苯回收率都符合回收率试验要求。

3.8 耐用性

将对照溶液在色谱条件发生小的改变后进行测定，乙腈、甲苯对内标物苯的峰面积比值Ar/Ai的11次测试结果RSD值分别为1.09%、0.39%，测定结果稳定。证明本测定方法在测定条件发生小的变化时仍然准确可靠，具备良好的耐用性。溶液稳定性试验证明溶液放置8h对检测结果几乎无影响。

3.9 样品的测定

将配好的样品溶液和对照溶液分别按3.1色谱条件进样1μl，记录色谱图，按内标法计算含量，乙腈和甲苯均未检出。

4 讨论和结论

4.1 溶剂的选择

根据本药品的残留溶剂性质，分别选择了水、丙酮、异丙醇、二甲基亚砜作为溶剂溶解样品，试验证明药品在水中溶解性不好，在丙酮、异丙醇和二甲基亚砜中能很好地溶解。但是丙酮和异丙醇作溶剂对乙腈的测定有很大的干扰，而二甲基亚砜对甲苯和乙腈的测定均无干扰。故选用二甲基亚砜作溶剂。

4.2 进样方法的选择

残留溶剂的测定方法一般采用顶空进样法和溶剂直接进样法。由于本药品在二甲基亚砜中溶解性良好，所以采用溶剂直接进样法。

4.3 溶液浓度的选择

参照中国药典2005年版第二部附录ⅧP残留溶剂测定法及ICH中对各溶剂限度的规定，分别将对照溶液及线性考察的浓度进行了调整，以满足检测要求。

4.4 色谱柱的选择

对不同极性的毛细管柱如:DB－5、DB－1、HP－INNOWax等进行了多次试验，证明SE－30(60m×0.53mm×5μm)毛细管柱对各溶剂峰均能达到基线分离，所以选择SE－30(60m×0.53mm×5μm)毛细管柱。

4.5 对柱温等色谱条件的选择

经多次试验，证明乙腈、苯和甲苯在柱温为60℃能达到基线分离，但二甲基亚砜沸点高，保留时间长。故选择采用程序升温，即:60℃保持5.0min，以15℃/min的速度升温至200℃，保持3min。可以使二甲基亚砜尽快被载气带出，缩短检测时间，提高工作效率。

4.6 试验结论

根据中国药典2005年版第二部附录ⅧP残留溶剂测定法及ICH的规定，甲苯和乙腈均属于二类有机溶剂，应在工艺中限制使用。结果3批样品均未检出甲苯和乙腈，说明本品的生产工艺能较好地除去上述2种有害溶剂，合成工艺较为合理。

Determination of Residual Solvents in Loratadine by Gas Chromatography Method

LI Ping
(Kunming Jida Pharmaceutical Ltd.，Kunming Yunnan 650106 China)

The determination method of residual solvents in Loratadine by capillary gas chromatography was studied.The experimental results showed that the method can determine the toluene and acetonitrile in the residual solvents at the same time with accurate results and good reproducibility.

gas chromatography;Loratadine;residual solvent;determine

X83

A

1673－9655(2011)06－0084－03

2011－05－25