1例Beagle犬的糖尿病建模分析*

周贤用 傅红兴 刘云西 李 慧 徐 逸 朱靓靓温州医学院药学院，浙江 温州 325035

随着糖尿病患者在中国的日益增多，糖尿病的治疗研究也成为了医药工作者的一个重要研究方向。糖尿病动物模型的制备对糖尿病的治疗研究非常重要，而Beagle犬因体积大、体质强，其糖尿病症状表现与人相似，是糖尿病治疗研究中重要的动物模型。

本研究采用文献报道的链脲佐菌素（STZ）和四氧嘧啶（Alloxan）联合进行血管内给药[1-2]，较好的获得了糖尿病Beagle犬模型，但实验犬最终因长时间不进食而死亡。本研究对此例Beagle犬糖尿病的造模经过和结果进行阐述和分析，以供大家建模参考。

1 材料与方法

1.1 动物

Beagle犬，♂，体重15 kg，由温州医学院实验动物中心提供。

1.2 材料

链脲佐菌素（Sigma，美国）；四氧嘧啶（Sigma，美国）；柠檬酸（苏州工业园区东方化工厂）；柠檬酸三钠（苏州工业园区东方化工厂）；低精蛋白锌胰岛素注射液（江苏万邦生化医药股份有限公司）；生理盐水（市售）。

1.3 仪器

血糖仪及血糖试纸（德国POLYGREEN，博士医生血糖监测系统）。

1.4 实验方法

1.4.1 药物溶液的配制[1-2]0.1 mol/L柠檬酸缓冲液的配制：称取柠檬酸2.1 g加入双蒸水100 mL中配成A液；称取柠檬酸三钠2.94 g加入双蒸水100 mL中配成B液；用时将A、B液按一定比例（1︰1.32）混合，即是所需配置STZ的柠檬酸缓冲液（pH=4.5）。

称取STZ 1.2 g，加至10 mL柠檬酸缓冲液中，搅拌溶解即得120 mg/mL链脲佐菌素溶液。称取Alloxan 2 g，加至10 mL柠檬酸缓冲液中，搅拌溶解即得200 mg/mL的四氧嘧啶溶液。

1.4.2 造模步骤 Beagle犬造模前先稳定饲养1周，每天记录犬的进食量、摄水量、活动状况。造模前禁食24 h，前臂静脉采血测正常情况下空腹血糖值。称重，先背部皮下注射阿托品（0.05 mg/kg），注射20～30 min后再行陆眠宁注射，等犬完全麻醉后，右前肢剃毛、消毒；麻醉下行股静脉穿刺，留置导管，经导管分别注入上述浓度的四氧嘧啶（50 mg/kg）和链脲霉素（30 mg/kg）溶液，在密封式静脉留置针上静脉滴注葡糖糖/生理盐水。

1.4.3 血糖测定及饲养护理 在药物诱导前、诱导后定时取静脉血测定血糖值，分别在第1、8、10、13 h经皮下注射50%的葡萄糖溶液5～10 mL；以后分别在第20、24、48小时及第7、14天采血做同样测定；24 h后开始给予胰岛素，初始剂量为2 U/d，并根据血糖的变化确定胰岛素的用量。定期称重及必要时进行血液生化和血常规检测。

2 结果

2.1 给药后犬的反应

Beagle犬经静脉注射药物1 h后开始有呕吐反应，此时测血糖显示“LOW”，及时静脉推注50%葡萄糖注射液5 mL；犬在24 h内多次呕吐，状态低迷，至第26小时时突然全身剧烈抽搐，呈晕厥状，及时送宠物医院抢救（怀疑为酸中毒，及时用保肝、保胃和碳酸氢钠中和酮症酸等治疗）后缓解。第3日犬恢复饮食，但进食的1周内也有多次呕吐，小便失禁，血糖和尿糖均较高；至第14日开始犬几乎未进食了，每天用葡萄糖/生理盐水维持，必要时2～3 d给予一次静脉滴注脂肪乳100 mL；但治疗期间连喝水都吐，直至第26日死亡。

2.2 血糖的变化

给药前后Beagle狗的血糖变化如下图1。糖尿病模型成模标准[3]：四氧嘧啶、链脲霉素联合给药后24 h血糖升高，48 h以后血糖＞11.1 mmol/L，且持续2周维持在此高血糖水平。本Beagle犬的血糖变化基本符合高血糖要求，但由于其进食不规律，血糖波动较大。

图1 造模前后血糖变化情况

2.3 体重的变化

给药后Beagle犬体重持续下降，见图2。虽在第6日由于恢复饮食后体重略有回升，但最终趋势还是持续下降。

图2 造模前后体重变化情况

2.4 其他糖尿病评价指标

给药后Beagle犬出现多饮、多尿、尿糖阳性、消瘦无力等症状，与糖尿病患者发病体征较吻合。第19日血液生化规检查结果显示血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）277 U，淀粉酶（AMY）560 U，显示有明显肝损和胰腺损伤，血清白蛋白（ALB）33.0，显示营养不良。

Beagle犬于造模第26日凌晨死亡，经尸检，结果发现其胰腺外膜有较多的出血点，胆囊坏死（见图3、4），其他由于长期未进食，胃黏膜和肠黏膜也有多处充血和血丝。

图3 胰腺膨大，有多处出血点

图4 胆囊坏死，有较多胆汁蓄积

3 讨论

STZ和Alloxan因体内半衰期较短，且溶液中不稳定，宜现配现用，且要求快速注射。四氧嘧啶最好在冰浴上避光操作，并在配完后30 min内用完。

建模后犬最危险的时间是在给药后24 h内，血糖的剧烈波动和药物对器官的急性损伤极易导致动物的低血糖或高酮症酸中毒死亡。

本实验虽参考文献[1-2]的给药剂量，但在造模过程中对犬显示了较大的毒性，可能文献是30年前的剂量，至今由于药品质量的改进或犬的个体差异导致犬在短期内死亡。因此建议建该模型时可考虑采用小剂量多次给药，对动物机体的损伤可能较小。

[1]Black HE, Rosenblum IY，Charles CC.Chemically induced（streptozotocinalloxan） diabetes mellitus in the dog biochemical and ultrastructural studies[J].AM J Path, 1980, 98(2):295-305.

[2]刘晟，王维，罗贤明，等.药物诱导狗I型糖尿病的研究[J].湖南医科大学学报，2000，25（2）：125-128.

[3]陈道瑾，黄建华，孙维佳，等. 狗全胰切除制作实验性糖尿病模型[J].中华实验外科杂志，1992，9（1）：30-31.