嗜水气单胞菌AH1的生物学特性研究

余文杰



嗜水气单胞菌AH1的生物学特性研究

余文杰

（漳州职业技术学院 食品与生物工程系，福建 漳州 363000）

测定了嗜水气单胞菌AH1在TSB培养基中的生长曲线进行研究，结果表明，0-4h属于延滞期，18h时活菌落总数达到最高峰至7.3，28h后细菌后进入衰亡期；并且此过程中活菌数的对数值与OD600呈线性关系y = 17.081x - 0.226。嗜水气单胞菌AH1在生理盐水、PBS和TSB液体中4℃保存的存活状况曲线表明：该菌属于一种生存能力较强的细菌，前期不易死亡，后期死亡较快。

嗜水气单胞菌AH1；生物学特性

嗜水气单胞菌是革兰氏阴性短杆菌，属于一种广泛分布于自然界之中的细菌种类，其致病范围十分广泛，可引起香鱼急性败血症和红口病、黄鳝出血性败血症、鳗鲡的赤鳍病、鲤鱼和金鱼的竖鳞病等运动性气单胞菌败血病，患病后具有较高的死亡率。感染该菌的鱼类，会出现皮肤溃疡，鳃和内脏器官出血，腹部肿胀，眼球突出，肛门红肿突出。此外该菌还会对家畜和人产生致病作用，引起食物中毒，使之产生急性胃肠炎症状、霍乱样腹泻、败血症和蜂窝组织炎等。目前由嗜水气单胞菌引起的腹泻屡见报到,已被证实为腹泻病原菌。因此，对于嗜水气单胞菌，尤其是其致病性菌株的研究现在已成为一个国内外水产界、兽医学界和医学界的热门话题。本文运用微生物生长测定方法对嗜水气单胞菌AH1的生物学特性进行了研究，为该菌相关疾病的防治和相应疫苗的设计奠定基础。

1 实验部分

1.1 主要原料和试剂

嗜水气单胞菌AH1菌株由漳州师范学院生物系提供，LB营养琼脂、TSB液体培养基、NaOH、盐酸和无水乙醇等一般性分析纯原料或试剂。

1.2 实验方法

1.2.1 嗜水气单胞菌AH1的生长培养

将菌种从超低温冰箱中取出，接种在LB琼脂上；挑取单菌落接种于TSB液体培养基，在28℃下培养18h作为种子液，同时将平板放在4℃条件下保存备用；按照1：1000的量将菌液接种于200mL的TSB液体培养基中于28℃摇床振荡培养，每隔2h取1mL菌液进行菌落总数的测定，并用分光光度计测定菌液的OD600值。

1.2.2 嗜水气单胞菌AH1在不同溶液中生存时间的测定

按1：10将菌液分别保存于生理盐水、PBS和TSB中，置于4℃条件下保存，采用涂布平板法每隔24h测定不同溶液中细菌的活菌数，观察嗜水气单胞菌在不同溶液中的存活时间。

2 结果与讨论

2.1 嗜水气单胞菌AH1的生长曲线

嗜水气单胞菌AH1在TSB培养基中培养时，该菌落总数及0D600值随时间变化曲线如图1所示。从图中可以看出，种子液接种后前4h嗜水气单胞菌的菌落总数对数值相对较低，处于延滞期；4h之后菌落总数开始迅速上升，进入对数生长期，培养18h左右，培养基中的活菌落总数的对数值上升至最高峰达到7.3；19h至28h，嗜水气单胞菌的菌落总数开始逐渐稳定，为稳定期；28h开始嗜水气单胞菌AH1菌落总数对数值略为下降，进入衰亡期。该菌的OD600值在4h之后开始显著地上升，这个上升期一直持续到19-20h，并在20h附近OD600达到最高峰1.8，而在30h后OD值又开始小幅下降。以上分析可得：嗜水气单胞菌AH1在TSB培养基中培养时，0-4h属于延滞期，期间细胞数目没有显著的增加，OD600的数值也几乎为零；从4h起至18h，细菌处于对数生长期，菌体以几何数增加，增长速度快，期间OD600迅速上升；19-28h是稳定期；第28h后进入衰亡期，此时OD600略有下降。

图1 菌落总数及吸光值（OD600）与时间的关系图

2.2 嗜水气单胞菌AH1生长过程中OD600与活菌数的关系

挑取单菌落接种于28℃的固体培养基中培养，一定时间后用TSB洗下菌苔，稀释成不同的OD值，测其活菌数；如图2所示为嗜水气单胞菌在TSB中的活菌数与OD值的关系，从图中可以看出，当OD600值小于1时，OD600值与其活菌数呈现出良好的线性关系（y=17.081x-0.226）,因此当OD600值小于1时，可以准确地从表中读出相对应的活菌数。

2.3 嗜水气单胞菌AH1生长过程中pH值的变化

嗜水气单胞菌AH1在TSB培养基中培养时，培养基的pH值随培养时间的变化规律如图3所示，由图3的曲线可以看出，该菌在培养过程中产酸能力较强，在培养过程中培养基的pH值下降得非常快，培养时间为18h左右时，培养基的pH值降至最低，此时pH仅为6.3左右；培养时间在18-30h之间，培养基的pH趋于稳定；30h后，培养液的pH值略微上升并稳定在6.6。

2.4 嗜水气单胞菌AH1在不同溶液中的生存时间的测定

嗜水气单胞菌AH1分别保存于生理盐水、PBS和TSB培养基中，置4℃条件下，间隔24h测定不同溶液中的细菌的活菌数，其结果如图4所示。由图4可看出，嗜水气单胞菌AH1是一种生存能力较强的细菌，不管是在生理盐水、PBS溶液还是TSB培养基中，前期都不容易死亡，后期则死亡较快。表明该菌抗逆性较强，给致病性的嗜水气单胞菌的杀灭带来了一定的难度。

图2 嗜水气单胞菌AH1在生长过程中OD600值与活菌数的关系

图3 pH值随时间变化

图4 嗜水气单胞菌AH1在不同溶液中的生存时间

3 结论

（1）嗜水气单胞菌AH1在TSB培养基中培养时，0-4h属于延滞期，期间细胞数目没有显著的增加，OD600的数值也几乎为零；从4h起至18h，细菌处于对数生长期，菌体以几何数增加，增长速度快，期间OD600迅速上升；19-28h是稳定期；第28h后进入衰亡期，此时OD600略有下降。

（2）在OD600值小于1.0的情况下，嗜水气单胞菌AH1的OD600值与活菌数之间满足线性关系y = 17.081x -0.226，当OD600值小于1时，可以准确地从图中读出相对应的活菌数。

（3）嗜水气单胞菌AH1的产酸能力较强，当培养进行了18h后培养基的pH值便会降至最低点6.3，当培养进行了30h之后，培养基的pH值会逐渐上升并稳定在6.6。嗜水气单胞菌AH1的这一特点，可以为今后该病原菌的生理鉴定提供一定的参考与借鉴。

（4）嗜水气单胞菌AH1是一种抗逆性比较强的细菌，若用生理盐水、PBS或者TSB培养基培养该菌，其前期活菌数均不会发生明显变化，后期则死亡较快。这表明该菌属于一种生存能力较强的细菌，这给致病性的嗜水气单胞菌的杀灭带来了一定的难度。

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Studies of Aeromonas hydrophila AH1Biological Characteristics

YU Wen-jie

(Zhangzhou institute of technology, Department of Food and Biology Engineering，Fujian Zhangzhou 363000，china）

The growth curve of Aeromonas Hydrophila AH1was studied cultured in TSB medium. The first four hours was its lag phase, , this bacteria entered logarithmic phase in 18th hour, in which the logarithm of the bacteria number reached 7.3. it came to the decline phase after the twenty-eighth hours. In addition, the logarithm of the bacteria number and the OD600had linear relationship of y=17.081x-0.226. Aeromonas Hydrophila AH1was stored in physiological saline, PBS and TSB in 4℃ to determine its ability of survivability, which suggested Aeromonas Hydrophila AH1could survive stress environment well. Most of bacteria could survive in the first time，but the ratio of death increased in the following days.

Aeromonas Hydrophila AH1; Biological characteristics

2011－07－15

余文杰（1977－），男，福建漳州人，助教，硕士，从事生物科学的教学及科研工作。

Q939.96

A

1673-1417（2011）03-0034-04

（责任编辑：季平）