中药利湿活血方对酒精性肾损害大鼠尿单核细胞趋化蛋白-1及β2-微球蛋白的影响*

陶小红,吕晓云,邱 皓,刘 文,滕玉莲,刘明龙

(1.甘肃省第二人民医院肾内科 ,甘肃兰州 730000;2.兰州大学,甘肃兰州 730000; 3.兰州大学第一医院 ,甘肃兰州 730000)

酒精可损害全身多脏器功能,肝脏、小肠、胃、胰腺、神经系统等均可不同程度受累[1-2]。近些年来,酒精对肾脏的损害也开始被人们关注。乙醇极易吸收入血,体内代谢过程中氧化耗能、离子紊乱和代谢产物的毒性均可导致以肾小管-间质损害为主的病理改变[3],而慢性肾小管 -间质损害最终会进展至肾间质纤维化。肾纤维化是多种慢性肾病的共同病理基础,是慢性肾病向终末期肾病进展的重要途径。本研究在建立动物模型的同时,以复方中药活血利湿方(huoxue lishi prescrip tion,HLP)灌胃处理大鼠,观察HLP对酒精性肾损害大鼠的保护作用,以期为酒精性肾损害寻求一种理想的中医药防治措施。

1 材料与方法

1.1 动 物

清洁级Wistar大鼠66只,雄性,体质量(178± 18)g,由兰州大学医学实验动物中心提供,动物质量合格证号:甘动准14-006。

1.2 药品与试剂

HLP由黄芪、当归、红花、连翘、白茅根、薏苡仁等药物组成,水煎制剂,由兰州大学药学院生药研究所监制。血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)试剂盒,均由南京建成生物工程研究所提供,批号依次 161278-01,161778-01,20100402;大鼠单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoatt-ractant protein-1、MCP-1)试剂盒,R＆D公司产品,批号GD20100511;无水乙醇,为分析纯,沈阳化学试剂厂产品,批号20100412。

1.3 动物分组与模型的建立

参照文献[4]将Wistar大鼠随机分为正常对照组 18只、模型对照组 24只、中药组 24只。正常对照组给予生理盐水 20 mL灌胃,3次/d,共 12周。模型对照组给予乙醇灌胃造模,3次/d,共12周,其中第1—4周每日400 mL/L乙醇8 g/(kg·d);第5—8周每日500m L/L乙醇9 g/(kg·d),第9—12周每日500 mL/L乙醇10 g/(kg·d)。中药组在造模的同时,于第 2周开始,加用活血利湿方水煎剂每日4m L/kg,分2次灌胃,共12周。

1.4 检测指标

1.4.1 一般情况

观察各组大鼠活动状态,毛发光泽度,进食、饮水情况、体质量变化及呼吸情况。

1.4.2 血BUN、Scr

于第 4,8,12周末从大鼠眼底静脉丛采集血样,分离血清,分别以脲酶 -波氏比色法、苦味酸法测定BUN、Scr。

1.4.3 尿MCP-1及β2-MG

于第 4,8,12周末以代谢笼收集大鼠尿液样品,按试剂盒说明以ABC-ELISA法检测尿MCP-1,以放射免疫法检测β2-MG。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计分析软件进行单因素方差分析。数据以均数(BZ_139_2138_999_2156_1045)±标准差(s)表示,两组间比较用Q检验。以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结 果

2.1 HLP对酒精性肾损害大鼠一般情况的影响

正常对照组大鼠无异常表现。模型对照组大鼠大多表现为毛色晦暗,被毛松乱,食欲不佳,行动、反应迟钝,呼吸节律不整,少数出现抽搐、癫痫样发作,且随着灌胃时间的延长而明显。中药组大鼠被毛较细腻、柔顺、有光泽,行动、反应较活跃,呼吸较平稳,进食及饮水量较正常对照组略减少,少数表现为运动平衡能力下降、四肢无力。第 12周末模型对照组与中药组大鼠体质量分别为(206±22)g、(223± 24)g,均低于正常对照组(265±28)g,差别有统计学意义(P＜0.05)。表明造模成功,模型对照组大鼠已出现形态、外观及生理活动的改变,经过中药处理后上述改变有所减轻。

2.2 HLP对酒精性肾损害大鼠肾功能的影响

与正常对照组对比,模型对照组大鼠血清BUN、Scr升高,差别有统计学意义(P＜0.01)。与模型对照组对比,中药组BUN、Scr降低,差别有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。见表1。

表1 各组大鼠BUN、Scr变化对比 mmol·L-1,±s

表1 各组大鼠BUN、Scr变化对比 mmol·L-1,±s

注:与正常对照组对比,**P＜0.01;与模型对照组对比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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2.3 HLP对酒精性肾损害大鼠尿MCP-1、β2-MG的影响

与正常对照组对比,模型对照组尿 MCP-1、β2-MG水平升高,差别有统计学意义(P＜0.01)。与模型对照组对比,中药组尿MCP-1、β2-MG降低,差别有统计学意义(P＜0.05和P＜0.01)。见表2。

表2 HLP对大鼠尿MCP-1、β2-MG变化的影响 ±s

表2 HLP对大鼠尿MCP-1、β2-MG变化的影响 ±s

注:与正常对照组对比,**P＜0.01;与模型对照组对比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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3 讨 论

肾脏的血液供应丰富,容易导致乙醇、乙醛的蓄积、浓缩。当饮酒超过了肝脏的代谢能力时,肾脏的负荷会明显增加,发生代谢功能紊乱;此外,毒性的代谢产物等可造成肾小管 -间质损害。酒精性肾脏损害主要是酒精导致了肾间质纤维化的产生[5]。在多种肾脏疾病中,普遍存在随肾间质损伤的加重,肾间质区单核/巨噬细胞浸润聚集、MCP-1阳性细胞增多和MCP-1表达增强,尿MCP-1水平升高。此提示MCP-1通过趋化和激活单核/巨噬细胞的双重作用,参与肾脏疾病的发生、发展,且突出表现在肾小管间质的损伤方面[6-7]。尿 β2-MG升高可较敏感的反映近端肾小管重吸收功能受损,如肾小管 -间质性疾病、药物或毒物或所致早期肾小管损伤等。本研究结果显示,随着酒精刺激时间的延长和剂量的不断加大,模型对照组大鼠精神、活动等状况明显较正常对照组差,肾功能损害逐渐加重,同时伴随尿MCP-1和β2-MG水平升高。经中药活血利湿方灌胃干预处理,上述异常改变均明显得以修复,各项指标接近正常对照组。

活血利湿方中黄芪、当归、枸杞益气养血,当归、红花活血化瘀,连翘、白茅根、薏苡仁清利湿热。诸药合用,共奏扶正祛邪之效。国内研究证实,中医学范畴内的“血瘀证”与肾纤维化密切相关[8],黄芪、当归等补益药为主组成的复方以及化瘀解毒类中药具有明显的抗肾纤维化作用[8-10]。本研究证实,活血利湿方对持续酒精暴露大鼠的整体不良状况具有较好的调节作用,体现了中医学整体观念及方剂理论的优势;该方对酒精性肾损害具有较好的保护作用,有良好的抗酒精性肾纤维化潜能,其机制可能是通过降低尿MCP-1和β2-MG水平来实现的。有关活血利湿方干预酒精性肾损害的机制尚需进一步深入研究。

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