敦煌前列宝对慢性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中IL-8、TNF-α含量及病理组织形态的影响*

安耀荣,朱向东,丁文君,程畅和

(1.甘肃中医学院,甘肃兰州 730000;2.甘肃省中医药研究院,甘肃兰州 730050)

慢性非细菌性前列腺炎是男性泌尿系统常见病、多发病,好发于青壮年[1]。其病因及发病机制目前尚不完全清楚,属难治性疾病,临床缺乏有效的治疗方法和药物。本研究所用敦煌前列宝以敦煌出土卷子《辅行诀脏腑用药法要》中所载“大泻肾汤”为基础,依据慢性前列腺炎临床表现加减化裁而成,经临床反复运用,疗效肯定。

1 材料与方法

1.1 动 物

SPF级雄性Wistar大鼠50只,3月龄,体质量(240±20)g,由甘肃中医学院动物实验中心提供,实验动物质量合格证号:SCXK(甘)2004-0006。全部实验操作均于SPF级动物实验室进行,设施使用合格证号:SYXK(甘)2004-0006。

1.2 药品与试剂

敦煌前列宝由茯苓、生甘草、制大黄、黄芩、赤芍、干姜、川牛膝、益母草按特定比例组成。药材由甘肃中医学院附属医院中药房提供,煎煮后过滤去渣,水浴浓缩滤液,使每毫升药液含生药 1.72 g。前列泰胶囊,陕西东泰制药有限公司产品,批号为z20050003;消痣灵注射液,北京第四制药厂产品,批号为 0710312,实验前用生理盐水配制成 25%消痣灵注射液,标记备用;白细胞介素-8(IL-8)放免试剂盒,兰州军区总医院安宁分院核检验科提供,批号为S20063089;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)放免试剂盒,中国原子能科学研究所提供,批号为S10940082。

1.3 主要仪器

Biofuge Fresco低温高速离心机,德国贺力氏(Heraeus)公司产品;BS124s电子分析天平,德国赛多利斯(Sartorius)公司产品;UV-2401 PC型紫外分光光度计,日本岛津公司产品;BH 2型光学显微镜,日本奥林巴斯公司产品;MDF-71超低温冰箱,日本三洋公司产品;HH-601数显恒温水浴箱,江苏省金坛市恒丰仪器厂产品。

1.4 动物分组

动物适应性喂养 1周后,称重,按体质量编号,并按随机数字表法选取 8只为正常对照组,其余动物造模后选取 40只称重后按随机数字表法分为模型对照组,前列泰胶囊组,敦煌前列宝高、中、低剂量组 5组,每组 8只。

1.5 模型的建立与给药

根据文献,将实验大鼠用10%水合氯醛(250～300μg/g)麻醉,无菌操作下取下腹部正中切口约1 cm,直达腹腔,提出膀胱及两侧精囊,暴露附属于精囊内侧的前列腺背叶,注入前列腺双侧背叶 25%消痔灵注射液共0.2m L,缝合肌肉、皮肤。创口处喷庆大霉素注射液以防感染。造模期 7 d。造模成功后模型对照组、正常对照组按用药组的方法,每日灌服蒸馏水;敦煌前列宝高、中、低剂量组予敦煌前列宝汤液 10μL/g灌胃,分别相当于 17.2,8.6, 4.3 g/kg生药;前列泰胶囊组予前列泰胶囊用蒸馏水配制成混悬液10μL/g灌胃,相当于0.66 g/kg生药。各组大鼠每日给药 1次,连续 30 d。

1.6 检测指标

于末次给药后24 h,称大鼠体重,颈椎脱臼法处死动物,取出前列腺组织,剥离被膜及周围脂肪组织,生理盐水涮洗,滤纸吸干,电子天平称重,计算各组大鼠前列腺指数,即前列腺湿重/体质量。将各组大鼠前列腺以中轴均分 2份,右侧部分保存于 4%多聚甲醛/0.1M PBS(pH 7.2)固定液中,室温下经水洗、梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋等处理后,切片备用。HE染色制作病理切片,镜下观察前列腺局部病理变化。左半侧组织匀浆,将匀浆液以3 000 r/min离心15min,将上清液分装2个试管,按照试剂盒说明书采用放免法检测IL-8、TNF-α。

1.7 统计学方法

采用SPSS 16.0统计分析软件处理。计量资料数据以均数(BZ_139_2138_999_2156_1045)±标准差(s)表示,各组间比较采用单因素方差分析,各个实验组的两两比较采用最小显著性差异法LSD-t法。以P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结 果

2.1 敦煌前列宝对慢性前列腺炎模型大鼠一般情况的影响

造模期间,正常对照组动物毛色光泽,食欲良好,活动自如,垫料干湿适中;模型组动物逐渐显现食欲减少,毛色略显枯槁,自主活动减少,垫料明显偏湿,气味腥臊。治疗开始后,前列宝各剂量组及前列泰胶囊组动物经处理状态逐渐恢复。实验期间,各组动物均无死亡。

2.2 敦煌前列宝对慢性前列腺炎模型大鼠前列腺湿质量及腺体指数水平的影响

模型对照组前列腺指数与正常对照组对比显著增高,差别有统计学意义(P＜0.05)。进行药物干预后,前列泰胶囊组及敦煌前列宝高剂量组大鼠前列腺指数较模型对照组降低,差别有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);敦煌前列宝中、低剂量组与模型对照组对比,差别无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 各组大鼠前列腺湿质量、体质量及腺体指数水平对比 g,±s

表1 各组大鼠前列腺湿质量、体质量及腺体指数水平对比 g,±s

注:与正常对照组对比,*P＜0.05;与模型对照组对比,#P＜0.05。

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2.3 敦煌前列宝对慢性前列腺炎模型大鼠前列腺组织匀浆IL-8、TNF-α含量的影响

与正常对照组对比,模型对照组大鼠前列腺组织匀浆中细胞因子IL-8和TNF-α高表达,差别有统计学意义(P＜0.05)。治疗后,敦煌前列宝各组局部前列腺组织细胞因子IL-8和TNF-α表达显著减轻,与模型对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05)。见表 2。

表2 各组大鼠前列腺组织匀浆IL-8、TNF-α含量对比 ng·L-1,±s

表2 各组大鼠前列腺组织匀浆IL-8、TNF-α含量对比 ng·L-1,±s

注:与正常对照组对比,*P＜0.05;与模型对照组对比,#P＜0.05,##P＜0.01。

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2.4 敦煌前列宝对慢性前列腺炎模型大鼠前列腺组织病理学的影响

正常腺体组织柔软,有光泽,弹性好,与周围组织无粘连,易分离。模型对照组腺体明显增大,与周围组织粘连较重,部分组织表面可见暗红色或灰白色片状结节。前列泰胶囊组腺体中度增大,与周围组织有粘连,弹性较差,部分组织表面呈暗红色,其程度较模型组明显减轻。敦煌前列宝各剂量组腺体与周围组织也有轻度粘连,腺体较柔软,表面有光泽,但腺体较正常组织有轻度的肿胀。见图 1～6。

图6 敦煌前列宝高剂量组 (HE染色,100×)

3 讨 论

中医典籍中虽无前列腺炎病名,但针对其病因病机已有了深入的论述。历览诸家之言,湿热是其主要病因病机,精浊瘀阻是主要病理变化,肾虚是后期疾病演变结果。敦煌前列宝是在出自敦煌出土卷子《辅行诀脏腑用药法要》所载“大泻肾汤”的基础上,依据慢性前列腺炎肾虚为本,湿热、血瘀为标的病机本质,加减化裁而成。“大泻肾汤”以茯苓为君,淡以利窍,甘以助阳;重用大黄为臣,以清泄湿热、活血化瘀之用;辅以黄芩,清热燥湿、泻火解毒,独特之处,在荡涤祛实之中,妙用芍药护阴;佐以干姜温阳辛开,阴阳并调,气化以行。敦煌前列宝方中又酌加川牛膝、益母草以奏活血化瘀、利尿通淋之效。大量研究提示,在前列腺液中测到IL-8即可考虑为前列腺的感染[2-3];TNF-α是主要的促纤维化性细胞因子,可刺激成纤维细胞增殖和分泌ECM增多,同时通过细胞因子调节网络的协同作用参与促进纤维化;且刺激活的成纤维细胞一方面可自分泌TNF-α[4],另一方面可吸引白细胞向炎症部位浸润,进一步分泌细胞因子。本研究采用传统的前列腺内注射消痣灵方法成功复制了慢性非细菌性前列腺炎动物模型,并且以促炎细胞因子白介素IL-8和促纤维化性细胞因子(TNF-α)为观察指标,研究结果表明敦煌前列宝可明显改善实验性慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织的炎症状态及病理损伤,降低局部相关细胞因子IL-8和TNF-α的表达,为其临床治疗慢性前列腺炎提供理论依据,也为敦煌古方的临床开发提供基础技术资料。

[1]王琦.王琦男科学[M].北京:中国中医药出版社,653.

[2]Miller LJ,Fischer KA,Goralnick SJ,et al.Interleukiirlo levels in seminal Plasma:imPlications for chronic Prastatitischronic Pelvic Pain syndrome[J].JUrol,2002,167(2Pt1): 753-756.

[3]李宏军,商学军,黄宇烽.IL-10、IL-8在慢性前列腺炎中的改变及意义[J].中华男科学杂志,2004,10(7):486-487.

[4]张俊.肿瘤坏死因子在肾脏病中的作用[J].安徽中医学院学报,1998,17(5):62-64.