高效液相色谱法测定赤芍合剂中芍药苷含量

(湖北省恩施土家族苗族自治州药品检验所，湖北 恩施 445000)

赤芍合剂是以赤芍为主药制成的医院制剂，由湖北民族学院医学院附属医院根据经验处方研发而成，具有清热凉血、散瘀止痛功效，临床上广泛用于缺血性脑血管疾病和各种高黏血症，疗效确切。为有效控制药品质量，笔者采用高效液相色谱法测定方中主药赤芍有效成分芍药苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Hitachi L－7100型高效液相色谱仪(日本日立)，包括Hitachi L－7420型紫外检测器，7725i型定量进样阀，T2000色谱数据处理软件。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110736－200630);赤芍合剂(湖北民族学院医学院附属医院，批号分别为070801，071001，080401);乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯化水，其试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.1%磷酸水溶液－ 异丙醇(17 ∶83 ∶0.5);流速:1.0 mL/min;柱温:室温;检测波长:230 nm。在此色谱条件下，芍药苷和其他组分可达基线分离，Rf＞1.5。

2.2 溶液制备

精密量取本品1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)20 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得对照品溶液。取不含赤芍的赤芍合剂模拟复方，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液相应保留时间内几无色谱吸收峰，证明其他原料和辅料对芍药苷的测定无干扰(图1)。

线性关系考察:精密称取60℃下干燥至恒重的芍药苷对照品24.5 mg，置 25 mL 棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取 1，2，3，5，7 mL，置5个10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL，注入色谱仪，测定峰面积。以芍药苷的峰面积(Y)和对照品质量浓度(X)作图，得回归方程 Y=24 957.5+7 993 736 X，r=0.999 9(n=5)。结果表明，芍药苷质量浓度在 0.098 ～0.686 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:在芍药苷质量浓度线性范围内，取高、中、低3种质量浓度的芍药苷对照品溶液，于同一天内连续进样6次，每次10 μL。结果芍药苷峰面积的RSD 为 0.90% ～1.30%(n=6)。

稳定性试验:取同一份供试品溶液，室温(20～25℃)下放置，分别于 0，2，4，6，8，10，12，16，20，24 h 时进样 10 μL 测定。结果含量的 RSD为1.10%(n=10)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批(批号为070801)样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份溶液，分别精密吸取10 μL，重复测定6次。结果芍药苷的含量分别为 9.63，9.44，9.64，9.20，9.25，9.46 g/L，平均 9.44 g/L，RSD=2.0%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密量取已知含量的赤芍合剂样品6份，每份1 mL，分别按高、中、低3个量级加入定量的芍药苷对照品，各份均按样品测定项下方法制成待测溶液，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品3批，按供试品溶液制备项下方法制备溶液，并按上述色谱条件测定和计算含量。结果批号为070801，071001，080401的3 批赤芍合剂中，芍药苷含量分别为 9.1，9.4，9.2 g/L(n=3)。

3 讨论

赤芍合剂是医院制剂，临床试验证明该制剂安全、有效。方中平肝药赤芍为君药，为了保证药品质量，笔者以赤芍中芍药苷为质量控制指标，采用高效液相色谱法测定制剂中芍药苷含量。取芍药苷对照品溶液(100 μg/mL)，在200～400 nm波长范围内扫描，结果在280 nm和320 nm波长处有最大吸收，280 nm波长处杂质峰较多，峰形较差，故选择320 nm为测定波长;比较了加热回流和超声提取两种方法，效果均好，但超声提取简便快速，故采用超声提取法;比较了乙醇、甲醇两种提取溶剂，甲醇较好;比较了提取时间(15，20，30 min)，结果超声提取20 min即可提取完全;分别试验了乙腈－0.1%磷酸水溶液－ 异丙醇(17 ∶83 ∶0.5)[1]、乙腈－0.1%磷酸水溶液(14∶86)[2]、乙腈－水(60∶40)[3]3种流动相，结果乙腈－0.1%磷酸水溶液－异丙醇(17∶83∶0.5)可改善芍药苷峰形，减少峰拖尾，分离效果最佳，保留时间适当，理论板数符合规定。本试验结果表明，高效液相色谱法用于赤芍合剂的质量控制，方法简便、快速、稳定、实用，结果准确。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:428.

[2]张 耕，张 红.高效液相色谱法测定脑缺血合剂中芍药苷的含量[J].中国医院药学杂志，2009，29(9):777.