高效液相色谱法测定小儿吐泻宁中橙皮苷含量

(湖北省宜昌市食品药品监督检验所，湖北 宜昌 443005)

小儿吐泻宁是由广藿香、姜半夏、陈皮、白术(炒)、茯苓、厚朴(姜制)、甘草7味药组成的中药复方制剂，具有理气和中、健脾化湿的功效，用于小儿脾胃不和引起的吐泻、腹胀、不思饮食等。本品原质量标准[1]无陈皮检验项目，国内外文献也未见报道。为了进一步控制药品质量，确保制剂疗效，笔者采用高效液相色谱法对小儿吐泻宁主要成分陈皮中橙皮苷含量进行了测定，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪;Metter－AE240型电子分析天平。橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110721－200512);小儿吐泻宁(沈阳绿洲制药有限责任公司，批号为20081101，20091101;三精集团中药三厂，批号为090322);甲醇为色谱纯，水为去离子双蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－冰醋酸 －水(35∶4∶61);流速:1.0 mL/min;检测波长:283 nm;柱温:25℃;进样量:5μL。理论板数以橙皮苷计算不低于2000。在此条件下，橙皮苷色谱与相邻干扰峰完全分离，分离度大于1.5(见图1)。

2.2 溶液制备

精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上的橙皮苷对照品71.60 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.716 g/L的对照品溶液。精密称取样品1 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇溶液100 mL，精密称重，置水浴上加热回流30 min，放冷，再称定质量，用甲醇溶液补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取除陈皮外按处方量配制的阴性样品适量，精密称定，按供试品溶液制备方法操作即得阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件测定，记录色谱图(图C)。结果色谱图中，在与橙皮苷相应的保留时间附近无干扰峰检出。

线性关系考察:精密量取对照品溶液 0.5，1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 mL，分别置100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，按拟订的色谱条件测定，以色谱峰面积为纵坐标、进样质量浓度(μg/mL)为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=16.521 X+19.981，r=0.999 9(n=6)。结果表明，橙皮苷进样质量浓度在3.58～143.2 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密量取对照品溶液5 mL，置100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，按上述色谱条件测定，连续进样5次。结果峰面积平均值为636，RSD为0.1%(n=5)，表明仪器进样精密度较好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20081101)溶液，于配制后0，2，4，6，8，10 h 时分别进样测定。结果峰面积平均值为 902，RSD为1.0%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内稳定性较好。

重复性试验:取同一批样品(批号为20081101)，依法制备供试品溶液并测定含量。结果橙皮苷平均含量为5.49 mg，RSD为1.0%(n=5)。

回收率试验:精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上的橙皮苷对照品26.00 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备溶液。称取6份已知含量样品(批号为090322)粉末，每份约0.5 g，精密稳定，分别加入上述对照品贮备溶液10 mL，置100 mL容量瓶中，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

精密称取样品1 g，依法制成供试品溶液，按拟订的色谱条件测定，以外标法计算含量。结果批号为20081101，090322，20091101的样品中橙皮苷平均含量分别为 5.49，5.30，5.43 mg/g(n=3)。

3 讨论

取橙皮苷对照品溶液，进行紫外扫描(200～400 nm)，结果在283.0 nm波长处有最大吸收，故选择283 nm为检测波长。橙皮是小儿吐泻宁的主药之一，橙皮苷是其主要成分，具有多种药理作用，建立测定橙皮苷含量的高效液相色谱法，有利于控制该产品的内在质量。橙皮苷的提取方法有索氏提取法、超声提取法、加热回流提取法，考虑到索氏提取法较烦琐，曾对超声提取法(超声提取时间分别为10，30，60 min)、加热回流提取法(加热回流时间分别为10，30，60 min)进行了考察，发现加热回流提取法比超声提取法效果好、回收率高，且回流30 min已能将制剂中橙皮苷提取完全，故将提取方法定为加热回流30 min。

表1 橙皮苷加样回收试验结果(n=6)

样品含量测定结果显示，不同厂家样品中橙皮苷的含量差异不大，但目前没有一个传统的限度标准。笔者建议，今后在修改标准时可考虑增加小儿吐泻宁中橙皮苷的含量测定，以确保药品质量，保证人民用药安全有效。

方法学考察结果表明，所建立的测定方法操作简单，结果准确，重复性好，空白无干扰，可作为小儿吐泻宁中质量控制方法。

[1]WS3－B－0685－91，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)[S].