益气养荣方对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响*

王振强 ，陈宝义 ，李小江 ，杨文英 ，谢丽娜

(1.河北省泊头市中医医院肿瘤科，泊头 062150；2.河北省泊头市卫生学校，泊头 062150；

3.天津中医药大学第一附属医院，天津 300193；4.河北省徐水县人民医院，徐水 072550）

益气养荣方对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响*

王振强1，陈宝义2，李小江3，杨文英4，谢丽娜1

(1.河北省泊头市中医医院肿瘤科，泊头 062150；2.河北省泊头市卫生学校，泊头 062150；

3.天津中医药大学第一附属医院，天津 300193；4.河北省徐水县人民医院，徐水 072550）

[目的]观察益气养荣方对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响。[方法]将30只Wistar大鼠随机分为空白组、对照组、中药组，每组10只。空白组予腹腔注射生理盐水，剂量为150 mg/kg；后两组均腹腔注射环磷酰胺150 mg/kg复制小鼠骨髓抑制模型，1 d后全部经目内眦眼底取血，检测血常规。中药组予益气养荣方10 mL/kg灌胃，2次/d，连续10 d。检测血常规、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子含量和脾脏指数。[结果]中药组体质量显著高于对照组，并且中药组外周血白细胞及血小板较对照组显著升高，中药组脾脏指数较实验组显著升高。[结论]益气养方汤可以控制大鼠体质量的下降，明显升高放化疗后骨髓抑制所致的外周血白细胞及血小板的减少，同时控制脾脏的增大。

益气养荣方；化疗；骨髓抑制

化疗是抗肿瘤的重要手段之一。其骨髓抑制发生率很高，严重影响化疗的正常进行，使临床疗效降低。抗肿瘤药物通过作用于癌细胞增殖周期的不同环节，抑制核糖核酸（DNA）分裂增殖能力，从而起到对肿瘤的治疗作用。但由于其缺乏特异性，对正常细胞，尤其是增殖旺盛的骨髓造血细胞，也同时造成严重损伤，导致血细胞下降，其中对粒细胞影响最大。尽管现代医学在不断探索新药和新的治疗方法，如：基因重组人粒细胞集落刺激因子（rhG－CSF）和基因重组巨噬细胞集落刺激因子（rh－GM－CSF）等造血细胞集落刺激因子、鲨肝醇、利血生、肌苷、维生素B4、碳酸锂、升白安片等升白细胞药物、成分输血、造血干细胞移植或支持，但因毒副作用其疗效及获益却相对有限[1]。中医认为，化疗后骨髓抑制是以“气虚、阴虚”最为常见。笔者通过大量研究证明，益气养荣方具有可靠改善骨髓抑制的作用，该组方特征是以“扶正为主”，且具有“扶正不留邪，祛邪不伤正”的特点，充分体现了通过调节机体整体生理功能的平衡而发挥改善骨髓抑制的科学指导思想。

1 实验材料

1.1 实验动物 Wistar雄性清洁级大鼠30只，体质量220～250 g，由中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK（京）2004-0001。饲养于天津中医药大学实验动物中心，动物分笼饲养，自由摄食、饮水，室温（20±2）℃，湿度20%～40%。

1.2 实验药物 益气养荣方（黄芪、补骨脂、白芍、鸡血藤、姜黄、太子参、当归等组成。由天津中医药大学第一附属医院药剂科提供生药并煎煮，置无菌盐水瓶中，在80℃恒水浴中浓缩悬蒸成含生药量1.5 kg/L混悬液，4℃保存）。

环磷酰胺（CTX）粉针剂（由江苏恒瑞医药股份有限公司生产。批号：国药准字H32030669，0.2 g/支）；生理盐水（天津大冢制药厂生产）。

1.3 实验试剂 肝素（天津中医药大学研究中心生化实验室提供）；大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子定量（GM-CSF）酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒（由天津华生生物科技有限公司提供）。

1.4 实验仪器 超净工作台；血细胞自动分析仪；光学显微镜；电子天平；毛细玻璃管、大鼠灌胃器、手术剪、移液管；LDZ4-0.8型自动平衡离心机。

2 实验方法

2.1 实验分组及给药 取30只雄性Wistar大鼠，称质量后随机分为空白组、对照组、中药组，每组10只。空白组予腹腔注射生理盐水150 mg/kg；后两组均腹腔注射环磷酰胺7.5 mL/kg。中药组每只大鼠连续10 d予10 mL/kg益气养荣方悬蒸浓缩液灌胃，2次/d。空白组与对照组不予治疗。

2.2 观察指标及方法

2.2.1 大鼠体质量变化情况 于开始给药前1天给每只大鼠称体质量，于末次给药后24 h再次称质量。记录数据，分析。

2.2.2 血常规变化情况 于化疗后24 h各组大鼠全部经目内眦眼底取血，检测血常规。中药末次给药24 h后各组大鼠经目内眦眼底取血，检测血常规。

2.2.3 GM-CSF含量测定 末次给药24 h后各组大鼠经目内眦眼底取血，置于抗凝管内，4℃，3000 r/min离心15 min，取上清液，于－20℃保存。采用双抗体夹心ABC-ELISA法，具体操作按天津华生生物科技有限公司提供的GM-CSF ELISA试剂盒进行检测，通过血清样品的OD值可在绘制的标准曲线上查出相应的GM-CSF的浓度。

2.2.4 脾脏指数测定 大鼠颈椎脱臼处死后，剥离脾脏后于万分之一电子天平称质量，称质量后计算脾脏指数。

脾脏指数=脾脏质量（mg）/小鼠质量（g）

2.2.5 统计学方法 使用SPSS 13.0统计软件数据包处理，所有实验数据均用均数±标准差（±s）表示，治疗前后比较采用配对t检验，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD方法。P<0.05为差异有显著性。

3 实验结果

3.1 大鼠体质量变化 见表1。

表1 治疗前后大鼠体质量变化情况(±s)Tab.1 Rat body weight change before andafter treatment(±s)g

表1 治疗前后大鼠体质量变化情况(±s)Tab.1 Rat body weight change before andafter treatment(±s)g

注：与对照组比较，▲P＜0.05。

组别空白组对照组中药组n 10 10 10治疗前253.9±11.55 246.0±17.87 245.6±12.40治疗后257.7±16.27 213.0±11.23▲255.3±13.7▲

由表1可见，造模前各组大鼠体质量无明显差异（P>0.05），具有可比性。造模后模型组大鼠体质量明显低于空白组（P＜0.05）。治疗后，中药组与对照组大鼠体质量虽均低于空白组（P＜0.05），但中药组大鼠体质量高于对照组，有显著性差异（P＜0.05）。说明对照组大鼠生长缓慢，而中药组则对大鼠生长的影响相对较轻，提示中药益气养荣汤对化疗后骨髓抑制大鼠的生长缓慢有一定的拮抗作用。

3.2 各组治疗前后血常规变化情况 见表2。

由表2可见，中药组在治疗前后，白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HGB）的差异均具有显著性差异（P<0.05）。说明中药组可以升外周血中高白细胞及血小板数值，降低红细胞数值。对照组在治疗前后，WBC、PLT的差异均具有显著性差异（P<0.05），可见对照组可以升高外周血中白细胞数值，降低血小板数值。在WBC变化方面，中药组治疗前后P<0.01，差异具有显著性。

表2 各组治疗前后血常规的变化比较(±s)Tab.2 Change of blood routine before and after treatmentof each group(±s)

表2 各组治疗前后血常规的变化比较(±s)Tab.2 Change of blood routine before and after treatmentof each group(±s)

组别空白组对照组中药组n 10 10 10 10 10 10治疗前治疗后治疗前治疗后治疗前治疗后WBC（×109/L）9.58±0.84 8.84±0.88 2.28±1.30 2.51±1.70 1.98±0.22 9.22±2.38 RBC（×1012/L）7.89±0.31 8.04±0.57 7.14±0.81 6.27±0.58 6.65±0.4 5.05±0.71 PLT（×109/L）163.7±35.49 152.2±31.12 87.2±11.31 81.7±10.65 79.2±10.01 124.3±29.6 HGB（g/L）148.7±4.83 149.2±9.36 142.8±11.08 130.8±3.70 137.5±8.45 132.1±11.38

3.3 各组大鼠脾脏指数的变化 脾脏指数=脾脏质量/大鼠体质量。空白组、对照组和中药组（每组各10 只） 的脾脏指数分别为 1.85±0.13，2.07±0.86，3.40±1.12。表示空白组与对照组相比差异具有显著性（P<0.05），说明对照组较空白组脾脏指数明显升高，中药组与对照组比较差异具有显著性（P<0.05），说明中药组在脾脏指数较对照组升高，中药组与空白组比较，差异不具有显著性（P>0.05）。

3.4 GM-CSF的含量变化 与空白组、对照组和中药组 GM-CSF的含量分别为 230.1±9.55，216.0±12.87，212.6±10.4。各种大鼠GM-CSF的含量具有明显差异。对照组和中药组含量变化较空白组有显著差异（P＜0.05）。中药组与对照组相比，两组GM-CSF的含量的变化差异具有显著性（P＜0.05）。

4 讨论

在恶性肿瘤的临床治疗中，化疗已成为一个重要的治疗手段，并发挥了巨大的作用，然而也存在着化疗药物的毒性反应这一主要问题。因此，研究既能提高化疗药物的疗效，又能减轻其毒副作用的药物显得十分重要，在此方面，中医药具有不可替代的、独特的优势。

中医认为，化疗后骨髓抑制导致白细胞减少，血小板减少，甚至出现全血减少的临床表现，可将其归属于中医的“虚劳”、“血虚”范畴。中医认为[2]正气亏虚是肿瘤发生的一个病因，而放疗作为一种“热毒之邪”，进入人体后进一步耗伤气血，热毒之邪可导致使脏腑气血失调，气血生化受到阻碍，阴阳失和，脏腑亏损，因此治疗上应以补虚为主。笔者根据临床经验进一步研究发现放疗后骨髓抑制是以“气虚、阴虚”最为常见。由于阴血亏耗，阴虚无以载气，而致气散阴耗；加之阴血渐耗，精不化气，而导致阴损气耗。故临床上常见气血两虚，气阴两虚证候。故针对其病因病机，从文献上分析，在治疗化疗引起骨髓抑制的传统方剂中，多见于补气、养血及扶正的方剂，多以益气养血为治疗大法，根据此法则笔者研制益气养荣方由黄芪30 g，补骨脂15 g，白芍30 g，鸡血藤15 g，姜黄20 g，太子参15 g，当归 15 g等组成，治疗放化疗后骨髓抑制在临床中取得了显著的效果，说明中医药在改善患者生活质量方面具有显著优势。通过上述实验研究，笔者对于益气养荣汤及益气养血法治疗放化疗后骨髓抑制现象有了更加深入的认识，为笔者今后进一步研究中医药在恶性肿瘤治疗中的作用提供了理论依据。

[1] 孙迎红，杜昭林，孟 丽，等.两种方法注射rhG-CSF治疗化疗所致骨髓抑制疗效比较[J].山东医药，2005，45(16):52-53.

[2] 张代钊.中西结合治疗放化疗毒副作用[M].北京:人民卫生出版社，2001：28-30.

Influence of Yiqi Yangrong decoction on mice with bone marrow depression induced by chemotherapy

WANG Zhen-qiang1,CHEN Bao-yi2,LI Xiao-jiang3,et al
(1.Botou TCM Hospital,Botou 062150,China;2.Hebei Botu Health School,Botou 062150,China;3.The First Affiliated Hospital ofTianjin University of TCM,Tianjin 300193,China)

[Objective]To observe the effect of Yiqi Yangrong decoction on mice with bone marrow depression induced by chemotherapy.[Methods]Thirty Wistar rats were randomly divided into blank group,control group,TCM group and each group composed of 10 rats.The rats of blank group was treated by intraperitoneal injection of physiological saline,150 mg/kg.After intraperitoneal injection of cyclophosphamide,150 mg/kg,the rats of both groups were suffered from bone marrow inhibition.One day after blood sample was obtained through inner canthus puncture for blood routine testing.In Chinese medicine group Yiqi Yangrong decoction,10 ml/kg,was given per oral,twice daily for 10 days.The blood routine test,granulocyte-macrophage-JiLa stimulating factor content and spleen index were measured.[Results]The body weight in Chinese medicine group was significantly higher than that of control group.Peripheral blood leukocytes and platelet were also significantly increased.Spleen index in Chinese traditional medicine group was significantly increased compared with the experimental group.[Conclusion]Yiqi Yangrong decoction can control rat weight dropping,significantly increase the decreasing of peripheral leukocyte and platelet induced by marrow inhibition caused by radiation and chemotherapy,at the same time control of the enlargement of the spleen.

Yiqi Yangrong decoction;chemotherapy;Bone marrow depression

R285.5

A

1672-1519(2011)01-0056-03

河北省中医药管理局指令项目（2010198）。

王振强（1977-），男，副主任中医师，主要从事肿瘤中医、中西医结合临床及基础研究。

2010-08-20）