白头翁汤中主要成分导入合谷穴对皮肤微血管舒缩振幅的作用＊

宣颖超 张 涛 郭 洋 吴 洁 杨李健 穆 祥

白头翁汤中主要成分导入合谷穴对皮肤微血管舒缩振幅的作用＊

宣颖超1张 涛1郭 洋2，3吴 洁1杨李健1穆 祥1

白头翁汤出自张仲景的《伤寒论》，由白头翁、黄连、黄柏、秦皮四味中药组成，具有清热解毒、凉血止痢之功效［1］。白头翁汤发挥药效的物质基础是汤剂中的化学成分，主要为生物碱类、香豆素类、皂苷类等［2］。近来有研究发现，这些中药成分的作用与提高微血管舒缩活动振幅之间有明显相关性。白头翁汤中具有提高微血管舒缩活动振幅作用的成分目前尚不清楚。本试验对白头翁汤及其主要成分舒缩微血管功效进行比较分析，为该汤剂有效成分的深入研究提供实验基础，更为从改善微循环角度研究中药成分的作用机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器设备

Perilont激光多普勒血流灌注仪（瑞典Perimed公司，主机型号PeriFlux system 5000，探头型号Probe481-1）；离子导入仪（瑞典Perimed公司，主机型号PF382b，导药电极型号PF383，分散电极型号PF384）；WQ6F30经络定位仪（北京海淀区东华电子仪器厂）；电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；电子分析天平（梅特勒—托利多仪器有限公司）；旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司，型号R1002B）。

1.2 主要试剂与药品

白头翁汤药材饮片：白头翁、黄连、黄柏、秦皮均购自北京同仁堂。白头翁汤主要化学成分（标准品）盐酸小檗碱（纯度＞98%）、白头翁素（纯度＞98%）：购自中国药品生物制品检定所；盐酸药根碱（纯度＞98%）、盐酸巴马汀（纯度＞98%）、秦皮甲素（纯度＞98%）：购自上海融禾医药科技发展有限公司；秦皮乙素（纯度≥98%）、白头翁皂苷B4（纯度≥97%）：购自上海同田生物技术有限公司。

1.3 中药溶液配制

1.3.1 白头翁汤溶液制备：根据药典中白头翁汤处方称取白头翁60g、黄连30g、黄柏45g、秦皮60g饮片，加饮用水煎煮三次，第一次加10倍量煮沸30min，16层纱布过滤；药渣再分别加8倍量、6倍量饮用水进行第二次、第三次煮沸、过滤。合并三次滤液，布氏漏斗再抽滤。

滤液放冷后，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为75%，密闭，置4℃冰箱静置24～48h后，取上清液减压浓缩至稠膏状，回收乙醇。膏液于70℃鼓风干燥箱中干燥至恒重，得白头翁汤浸膏。称取适量白头翁汤浸膏，溶于生理盐水中，混匀，制成1g／ml的白头翁汤溶液用作以下实验。

1.3.2 各种化学成分的溶液制备：精密称取盐酸小檗碱3mg，加入1ml生理盐水，制成每1ml含盐酸小檗碱3mg的贮备液。盐酸药根碱溶液、盐酸巴马汀溶液、秦皮甲素溶液、秦皮乙素溶液、白头翁素溶液、白头翁皂苷B4溶液的制备方法同盐酸小檗碱。

1.4 实验对象及选穴

随机选取8名20～26岁身体健康的在校大学生（男女各半）作为试验对象。

根据白头翁汤处方的归经属性，取受试者阳明大肠经上的合谷穴作为受试穴位。受试者静坐20～30min后，用75%酒精棉球清洁受试者合谷穴及周围皮肤，待酒精挥发后，使用经络定位仪，在解剖学位置定位并标记。

1.5 穴位导药

激光多普勒系统预热30min后，将离子导入仪的导药电极固定于合谷穴，探头与皮肤紧贴，在多普勒荧屏上观察穴位区微血管舒缩活动，如出现频率和振幅不规则图谱，则适度调整激光探头位置，记录穴区微血管舒缩活动4～6min，之后用微量移液器吸取200μl的1g／ml白头翁汤溶液注入导入电极衬垫上，打开PF382b电源，设定好导药时间和电流，导药结束后继续观察8～10 min。从每位受试者导药前后微血管舒缩活动振幅图像中分别选取5段数据计算导药前后穴区振幅（PU）平均值及振幅变化幅度。

导药前（后）振幅＝（PUmax—PUmin）／5

振幅变化幅度＝导药后振幅平均值—导药前振幅平均值

同上，在合谷穴分别导入200μl的3mg／ml的盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁素、白头翁皂苷B4，记录并保存导入前后穴区微血管舒缩活动图谱。

以生理盐水作为空白对照。

1.6 统计学处理

用SPSS16.0统计学软件处理数据，计量资料用均值±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为有统计学差异。

2 结 果

实验结果见表1和图1～图3。结果显示：与导药前比较，分别导入白头翁汤、盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁皂苷B4、白头翁素以及生理盐水后，穴区皮肤微血管舒缩振幅均有不同程度的变化，其中穴区导入白头翁汤、盐酸小檗碱、盐酸药根碱（图1～图3）极显著地提高了皮内微血管舒缩振幅（P＜0.01）；导入盐酸巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁素、白头翁皂苷B4对穴区皮肤微血管舒缩振幅无显著影响（P＞0.05）。

表1 白头翁汤及其主要成分导入合谷穴前后皮肤微血管振幅比较（±s，n均＝8）

表1 白头翁汤及其主要成分导入合谷穴前后皮肤微血管振幅比较（±s，n均＝8）

注：与导药前振幅比较，1）P＜0.01

组 别 导药前振幅 导药后振幅 振幅变化幅度白头翁汤组 72.00±14.10 162.20±8.801）90.20盐酸小檗碱组 54.10±5.10 156.70±9.401） 102.60盐酸药根碱组 29.60±0.80 69.50±7.701） 39.90盐酸巴马汀组 36.80±7.10 34.40±9.80 -2.40秦皮甲素组 88.80±8.70 87.50±4.40 -1.30秦皮乙素组 58.70±3.20 55.70±4.90 -3.00白头翁皂苷B4组 69.60±6.50 66.10±2.20 -3.50白头翁素组 39.50±4.60 41.70±8.60 2.20生理盐水组29.70±4.60 31.10±0.70 1.40

图1 白头翁汤对微血管舒缩振幅的影响

3 讨 论

白头翁汤出自张仲景的《伤寒论》。通过对其药理作用的研究发现，白头翁汤对细菌性痢疾具有良好的治疗效果。对志贺氏、施氏等痢疾杆菌以及金黄色葡萄球菌、卡他球菌、表皮葡萄球菌等都具有明显的抑制作用［3］。近期有研究报道，中药（包括白头翁汤）穴位导入具有与针灸相似的作用原理，能通过改善穴区微循环状态而达到治疗疾病的目的。本文作者根据白头翁汤的归经属性，选择人合谷穴导入白头翁汤及其主要化学成分后，发现白头翁汤具有明显提高合谷穴区皮肤微血管舒缩振幅的效果，而这种效果可能主要由其化学成分小檗碱和药根碱起作用。为中药改善微循环研究提供了理论和方法学依据。

图2 盐酸小檗碱对微血管舒缩活振幅的影响

图3 盐酸药根碱对微血管舒缩振幅的影响

微血管作为微循环系统重要组成之一，能够自发地出现周期性管径变化和血流变化，且与心跳、呼吸无关，在调节组织、细胞的物质、信息、能量传递方面发挥重要作用［4］。有研究者在观察针灸对微血管自律运动的影响时发现，针灸具有改善穴区皮肤微血管舒缩振幅的效果［5］。修瑞娟等［6］针刺健康成人的尺泽穴，发现针刺后穴位局部皮肤微血管自律运动频率基本不变，但振幅增加60%以上，提示针刺能提高微血管自律运动振幅。周智慧等［7］研究发现人参水煎液、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re均能显著提高穴位区微血管舒缩活动的振幅。穆祥［8］从中（兽）医学的诊断、证候、药性等与微血管功能状态进行相关性分析后认为，中药方剂防治疾病的作用机理之一在于调控和改善微血管功能。本实验发现白头翁汤及小檗碱、药根碱均具有显著提高穴区皮肤微血管舒缩振幅的作用，进一步说明中药导入与微血管调节之间存在很大的相关性。

本实验所用白头翁汤中各种化学成分在提高穴区微血管舒缩活动振幅方面存在差异，其中生物碱类作用大于香豆素类、皂苷类，而生物碱类成分中小檗碱＞药根碱＞巴马汀，这为白头翁汤中有效成分的筛选及其成分制剂的开发提供了基础，其中小檗碱及药根碱显著提高穴位区微血管舒缩振幅的实验结果，补充了相关研究的空白。然而，白头翁汤化学成分极其复杂，其它同样具有提高穴位区微血管舒缩振幅作用的成分，有待进一步分离、研究。

本文第一作者简介：

宣颖超（1985～），男，满族，硕士研究生，主要研究方向为中兽医药

1 张保国，梁晓夏，刘庆芳.白头翁汤现代药效学研究.中成药，2009，31（4）：607～608.

2 朱华旭，丁林生.白头翁汤汤剂化学成分的分离研究.中成药，1999，21（6）：313～317.

3 王瑞锋，王 雪.白头翁汤的药理作用与临床应用.中医学报，2010，25（2）：270～271.

4 杨国栋.微循环障碍与莨菪类药的临床应用.北京：人民卫生出版社，1999：13～21.

5 赵平平，洪俪凤.针灸对微血管自律运动（微循环）影响的研究概况.甘肃中医，1999，12（2）：45～48.

6 修瑞娟，程 军，张 静.针刺对微血管自律运动的影响.中华医学杂志，1988，68（9）：489～490.

7 周智慧，张 涛，徐克伟，等.人参及其主要活性成分对穴位区皮内微血管舒缩活动振幅的影响.北京农学院学报，2010，25（4）：24～25.

8 穆 祥.中药方剂的作用机制探讨.中兽医药研究进展―中国畜牧兽医学会中兽医学分会2003年学术研讨会论文集.西安：西北农林科技大学出版社，2003：49～54.

白头翁汤中主要成分导入合谷穴对皮肤微血管舒缩振幅的作用

宣颖超，张 涛，郭 洋，等／北京农业大学兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京102206

目的：观察白头翁汤及其主要化学成分导入合谷穴前后皮肤微血管舒缩振幅的变化。方法：选取阳明大肠经上的合谷穴作为导药穴位，利用离子导入仪将白头翁汤及小檗碱、药根碱、巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁皂苷B4、白头翁素导入受试者合谷穴皮肤，并用激光多普勒血流仪记录导药前后穴区皮肤微血管舒缩振幅的变化。结果：白头翁汤、小檗碱和药根碱显著提高了穴区皮肤微血管舒缩活动的振幅（P＜0.01），巴马汀、秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁素、白头翁皂苷B4对穴区皮肤微血管舒缩活动振幅影响差异无显著性统计学意义（P＞0.05）。结论：小檗碱和药根碱是白头翁汤提高微血管舒缩活动振幅的主要成分。

Effect of Components of Pulsatilla Decoction on Amplitude of Cu t a n e o u s Mi c r o v a s omo t i o n a t He g u Ac u p o i n t

／Xuan Yingchao，Zhang Tao，Guo Yang，et al／Beijing Key La-boratory of Traditional Chinese Veterianry Medicine，Beijing University of Agriculture，Beijing 102206

Pulsatilla decoction；Microvasomotion amplitude；Hegu acupoint

R331.3＋5

A

1005—1740（2011）02—0001—03

国家自然科学基金项目（30972209）、北京市属高等学校人才强教深化计划"学术创新团队建设计划"项目（PHR201007142）资助

1北京农学院兽医学（中医药）北京市重点实验室，邮政编码 北京102206；2吉林大学畜牧兽医学院；3沈阳农业大学畜牧兽医学院； 通讯作者：穆 祥，E-mail：muxiang1109＠sina.com本文2011—02—24收到，2011—03—22修回，2011—03—28接受

Objective：To investigate the effect of the components of pulsatilla decoction on amplitude of cutaneous microvasmotion at acuppoints.Meth-od：Hegu acupoint of Yangming large intestine meridian was the tested acupoint，pulsatilla decoction，berberine，jatrorrhizine，palmatine，escu-lin，aesculetin，anemoside B4and anemonine were imported to the cuta-neous acupoint of the subjects by the lontophore device.The laser doppler monitor was used to record the change of the amplitude of the mi-crovasomotion before and after importing these medicine.Results：The amplitude of cutaneous microvasomotion at acupoints was apparently im-proved after importing the berberine and jatrorrhizine（P＜0.01）.How-ever，the amplitude of cutaneous microvasomotion at acupoints was not significantly improved after importing the palmatine，esculin，aesculetin，anemoside B4and anemonine（P＞0.05）.Conclusion：Both the berberine and jatrorrhizine are the main components that could improve the ampli-tude of cutaneous microvasomotion at acupoints.

白头翁汤 小檗碱 药根碱 微血管舒缩活动振幅 合谷穴

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