植物油提取新工艺得到的五味子提取物对小鼠睡眠影响的实验研究

徐仲航,金向群

（1.东北师范大学附属中学,吉林 长春130021;2.吉林大学药学院,吉林 长春 130021）

研究表明,五味子中镇静、催眠作用主要活性成分为木脂素类化合物[1]。本研究前期采用植物油提取新工艺方法得到了木脂素含量和提取率均较高的五味子提取物,该方法具有提取工艺简便、无污染、条件温和等优点。为进一步验证采用新工艺得到的五味子提取物是否具有改善睡眠活性,采用小鼠直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验[2]对其改善睡眠作用进行评价。

1 材料与方法

1.1 主要材料

昆明种小白鼠,雄性,体重18-21 g,吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供,生产许可证号:SCXK-（吉）2007-0003;

五味子提取物,淡黄色油状液滴（本实验前期制备）。每克提取物中含五味子生药量0.4 g,含五味子甲素0.3mg,含五味子乙素0.4mg。

1.2 动物分组及给药方法

小鼠随机分为对照组及五味子提取物低、中、高剂量组,每组12只。对照组给予橄榄油20m l/kg/d灌胃,五味子提取物低、中、高剂量组分别给予五味子提取物150、300、600mg/kg/d,连续灌胃15 d。

1.3 实验方法及观察指标

1.3.1 五味子提取物对直接睡眠的影响 动物末次给予橄榄油及不同剂量五味子提取物1 h后,观察各组小鼠是否出现睡眠现象,记录入睡动物数及睡眠时间。

1.3.2 五味子提取物对阈剂量戊巴比妥钠睡眠时间的影响 实验前确定使动物100%入睡,又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量（45mg/kg）。动物末次给予橄榄油及不同剂量五味子提取物1 h后,给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠10 ml/kg,以翻正反射消失为指标,观察五味子提取物能否延长阈剂量戊巴比妥钠的睡眠时间。

1.3.3 五味子提取物对阈下剂量戊巴比妥钠睡眠发生率的影响 实验前确定戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量（26mg/kg）,即85%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量。动物末次给予橄榄油及不同剂量五味子提取物1 h后,各组动物腹腔注射戊巴比妥钠10m l/kg,记录30min内入睡动物数（翻正反射达1min以上者）,计算入睡动物发生率。

1.3.4 五味子提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响 实验前确定动物100%入睡,但又不使睡眠时间过长的巴比妥钠剂量（260 mg/kg）。动物末次给予橄榄油及不同剂量五味子提取物1 h后,给各组动物腹腔注射巴比妥钠10 ml/kg,以翻正反射消失为指标,观察五味子提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。

1.4 统计学方法

采用SPSS10.0统计软件中单因素方差分析进行均值比较,方差齐时,各组间两两比较采用Tamhane's法,小鼠入睡发生率应用卡方检验。

2 结果

2.1 五味子提取物对小鼠直接睡眠的影响 小鼠连续灌15 d后,对入睡动物数、睡眠时间进行方差分析。结果表明,五味子提取物150、300、600mg/kg组与对照组比较,入睡动物数及睡眠时间均无显著差异（P＞0.05）。

2.2 五味子提取物对阈剂量戊巴比妥钠睡眠时间的影响 小鼠连续灌胃15 d后,各组动物腹腔注射阈剂量戊巴比妥钠,对睡眠时间进行单因素方差分析,结果表明,睡眠时间组间有差异,F值为5.998（P＜0.05）,与对照组相比,五味子提取物300、600 mg/kg组小鼠睡眠时间明显延长（P＜0.05）,150 mg/kg组小鼠睡眠时间与对照组比较无显著性差异（P＞0.05）,见表1。

表1 五味子提取物对阈剂量戊巴比妥钠睡眠时间的影响（n=12）

2.3 五味子提取物对阈下剂量戊巴比妥钠睡眠发生率的影响 小鼠连续灌胃15 d后,各组动物腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量,对入睡动物发生率进行卡方检验,结果表明,睡眠发生率有组间差异,χ2值为5.971（P ＜0.05）,与对照组相比,五味子提取物600 mg/kg组睡眠发生率明显提高（P＜0.05）,150、300 mg/kg组小鼠的睡眠发生率与对照组比较均无显著差异（P＞0.05）,见表2。

表2 五味子提取物对阈下剂量戊巴比妥钠睡眠发生率的影响（n=12）

2.4 五味子提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响

小鼠连续灌胃15 d后,各组动物腹腔注射巴比妥钠,对睡眠潜伏期进行单因素方差分析,结果表明睡眠潜伏期有组间差异,F值为3.410（P＜0.05）,与对照组相比,五味子提取物600mg/kg组小鼠睡眠潜伏期明显缩短（P＜0.05）,150、300 mg/kg组小鼠睡眠潜伏期与对照组比较均无显著性差异（P＞0.05）,见表3。

表3 五味子提取物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响（n=12）

3 讨论

睡眠是人类的基本行为,也是生命过程中的一种重要生理现象,对人类的生活和健康有着重要的影响,作为生命所必须的过程,是机体复原、整合和巩固记忆的重要环节,是健康不可缺少的组成部分,良好的睡眠可以使人消除疲劳,更好地恢复精神和体力,保持良好的觉醒状态,可以提高工作和学习效率,因此,睡眠质量问题受到越来越多的关注。

睡眠障碍是严重危害人类健康的常见疾病之一,在世界上仍是一个没有得到充分重视和良好解决的公共卫生问题。随着现代社会人类生活节奏的加快,学习和工作压力的提高,无论是成人还是青少年,很多人被睡眠障碍所困扰,长时间的睡眠障碍会带来较大的身心损害,能够安全、有效保证高质量睡眠对各年龄人群高效率工作、学习具有重要意义。目前临床上使用的具有镇静催眠作用的化学合成类药物在延长睡眠时间的同时,都会出现不同程度的副作用如头晕、乏力、困倦、注意力不集中,甚至暂时性健忘和宿醉现象,并可产生依赖性,在应用方面受到一定的限制,因此,需要安全、有效、无依赖性的药物及功能食品,而天然植物或药物在此方面可能具有较大优势,开发药效显著、副作用小、安全且具有改善睡眠作用的产品尤为重要。传统医学认为五味子具有补肾益气、镇静安神之功效,其用于神经衰弱、心悸失眠等症,并取得了良好的治疗效果[3]。

中药五味子的主要活性成分为木脂素类化合物。目前,国内外对五味子木脂素的提取工艺及药理学作用已有相关研究。一方面目前使用的水、有机溶媒、超临界提取等方法,由于提取工艺方面均存在一定的弊端,限制了五味子资源的开发与利用,另一方面由于目前较复杂的提取工艺,在对提取物药理学研究中,显现出复杂的量效关系,难以为进一步可批量生产药品或保健食品提供剂量参考[4-7]。

本研究在植物油新工艺提取五味子木脂素基础上,采用小鼠直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验对其改善睡眠作用进行评价。结果显示,五味子提取物剂量达到600mg/kg/d时,可明显延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间,明显提高戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率,明显缩短巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期,同时在实验中观察到对直接睡眠小鼠的入睡动物数、睡眠时间均无明显影响。研究结果表明植物油新工艺方法得到的五味子提取物有明显改善小鼠睡眠的作用,为后期产品开发提供了较为科学的理论依据和剂量参考。中药五味子具有镇静、催眠、益智、抗衰老、提高人体免疫力等多种药理作用,本研究进一步验证了其改善睡眠的作用。本研究发现的简便、高效提取五味子木脂素的新方法及改善睡眠作用药效学研究结果对五味子资源的开发具有广泛的应用前景,并可能获得一定的经济效益和社会效益,尚需对其进行进一步的毒理学及改善睡眠作用机制研究,为五味子的开发利用提供深层次的科学依据。

致谢:感谢吉林大学药学院提供的良好实验条件,感谢于晓风、曲绍春二位老师在药理学实验方法方面给予的悉心指导。

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[5]Min Zhu,Yan Cao,Guorong Fan.Microwave-Assisted Extraction and Fingerprint Studies of Schisandra Chinensis（Turcz.）by High Performance Liquid Chromatography[J].Journal of Liquid Chromatography&Related TechnologiesJSep Sci.2007,30（1）:67.

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