女贞子超临界CO2萃取物急性毒性及30 d饲养试验的研究

董 茜，单安山，刘化伟，吕文龙

（东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨 150030）

近年来中药饲料添加剂的研发速度越来越快，由于饲料产业的规模越来越大，加工饲料的产量越来越大，所以引发大面积饲养中毒的潜在性也在增大。由于食物链的蓄积作用，饲料添加剂对人群健康的影响也是一个不可回避的问题。由于女贞子食用毒理学安全性未见有全面评价的报道，因此，本文结合女贞子的产品开发,按国家有关饲料添加剂规范，对其做了安全毒理学评价。为女贞子作为绿色饲料添加剂在畜牧生产中的合理使用提供理论依据，同时也为中草药饲料添加剂的标准化、产业化推广应用，以及利用营养手段调控畜产品的质量和安全提供理论依据。

马德莹等研究表明[1]，日粮中添加1%的女贞子可显著提高蛋雏鸡血清新城疫抗体水平与脾淋巴细胞转化率。李群道等研究表明，日粮中添加1%的女贞子能提高肉仔鸡的抗体效价，显著提高了鸡脾脏淋巴细胞在ConA诱导下的增殖反应[2]。郭晓秋等研究表明，女贞子水提物可提高肉仔鸡抗氧化功能[3]。杨银平等研究发现，在日粮中添加女贞子萃取物可以极显著提高蛋鸡的产蛋率[4]。石莉莎等研究表明，日粮中添加1%的女贞子可明显提高血清中肿瘤坏死因子[5]。陈鹏等研究表明，饲料中添加女贞子原粉可以提高肉仔鸡的生长性能[6]。通过以上研究可知，女贞子具有增强机体生长性能，畜禽免疫机能以及提高机体抗氧化能力等作用。

为了进一步研究女贞子超临界CO2萃取物的性质及其作用，使其能够安全有效的用于临床，按照国家卫生部颁布《食品安全性毒理学评价程序和方法》GB15193进行[7]，对其进行了急性毒性试验，30 d饲养试验。

1 材料与方法

1.1 受试药物

女贞子购于哈尔滨药材批发市场，过60目筛加工粉碎为细末，将女贞子置于65℃烘箱中烘干，置于东北林业大学进行超临界CO2萃取。

1.2 受试动物

昆明系小鼠40只，体重为18～22 g，雌雄各半，由哈尔滨市汉方试验鼠类养殖所提供。Wistar大鼠：体重为70～100 g，雄雌各半，由哈尔滨兽医研究所提供。试验前均在实验条件下饲养观察1周。

1.3 急性毒性试验

取健康小鼠40只，随机分为4个组，每组10只，雄雌各半。试验前禁食16 h，但不限制饮水。试验时，按每千克体重11、13、15 g剂量，一次灌胃。给药后立即观察并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲、排便、体重和死亡情况，即使剖检死亡动物，观察病理变化，取病例器官做病理组织学检查，存活动物继续饲养1周，观察中毒情况。试验结束时，处死所有试验动物，解剖检查，比较各组试验结果。

1.4 30 d饲养试验

将大鼠随机分为4组，每组12只，雌雄各半，分笼饲养。给药前饲养1周。受试物分高、中、低剂量组，分别按每千克体重3.75、2.25、0.75 g剂量掺入正常基础日粮饲喂，对照组饲喂正常基础日粮。连续给予30 d[8]。

2 结果与分析

2.1 小鼠急性毒性试验

结果见表1。

表1 女贞子超临界CO2萃取物对小鼠急性毒性试验结果Table 1 Acute toxicity of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum in mice

试验期间，动物的精神状态良好，采食量正常，饮水正常，毛色正常，体重正常，未见动物有任何中毒表现，无一动物死亡。表明受试物对雌雄小鼠经口LD50均大于15 g·kg－1·BW－1，按急性毒性分级标准属于无毒级物质。

2.2 30 d饲养试验

2.2.1 动物一般表现

试验过程中动物无死亡，精神状态良好，毛色正常，采食正常，饮水正常，无异常行为表现。

2.2.2 各剂量组对动物生长活动的影响

结果见表2。由表2可知，各组动物生长活动正常。受试物剂量组雌、雄动物体重相比较无明显差异，最高剂量组与对照组差异无显著性（P＞0.05）。由此表明，女贞子超临界CO2萃取物对大鼠的体重无影响。

由表3和4可知，女贞子超临界CO2萃取物掺入饲料中饲喂给大鼠30 d，动物未出现异常现象，各受试物剂量组动物体重增长、采食量、总的食物利用率均无明显差异，并且高剂量组动物体重增长、采食量、总的食物利用率与对照组比较无显著差异（P＞0.05），说明女贞子超临界CO2萃取物对动物进食及生长状况无不良影响。

表2 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠体重的影响（±S）Table 2 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on body weight changes in rats（±S）

表2 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠体重的影响（±S）Table 2 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on body weight changes in rats（±S）

性别Sex剂量（g）Dose动物数（只）Number体重（g）Weight 0雌Female第2周Week 2 150.8±13.20 154.5±10.34 149.8±2.50 154.8±10.59 151.5±13.33 156.8±6.18 150.0±15.34 156.3±6.95 0.75 2.25 3.75 0 0.75 2.25 3.75 6 6 666 6 6 6第0周Week 0 85.0±14.72 86.3±13.77 81.3±6.29 83.8±11.09 86.3±13.77 88.8±13.15 87.5±17.08 85.0±12.91第1周Week 1 116.3±15.06 116.8±14.31 114.8±5.19 117.8±11.73 117.0±14.07 119.0±13.44 118.8±15.11 118.8±9.00雄Male第3周Week 3 201.5±7.85 204.3±11.30 201.0±4.32 202.8±10.21 202.0±5.34 206.3±2.50 202.8±5.32 203.3±5.44第4周Week 4 238.5±10.85 247.5±13.30 242.8±5.56 245.8±8.02 239.3±3.86 248.5±2.08 244.3±3.86 248.0±7.07

表3 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠每周采食量的影响Table 3 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on food intake in rats

表4 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠增重及总食物利用率的影响Table 4 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on food utilization in rats

2.2.3 对大鼠血常规的影响

结果见表5。

从血液常规指标统计结果可知，各受试物剂量组的血红蛋白、红细胞、白细胞、血小板之间差异不显著，并且最高剂量组与对照组比较差异无显著性（P＞0.05），亦无剂量－效应关系，而且波动数值都在大鼠血液学正常值范围之内[9－10]，表明女贞子超临界CO2萃取物对大鼠的红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量和血小板均无不良影响，无毒理学意义。

表5 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠血常规检查结果的影响Table 5 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on hemogram in rats

2.2.4 对大鼠血清生化检查的影响

大 鼠 血 清的ALT、 AST、 BUN、 Cr、 Glu、Alb、TP、TCH、TG测定，各受试物剂量组之间对比无显著差异（见表6），并且最高剂量组和对照组之间差异不显著（P＞0.05）。表明女贞子超临界CO2萃取物对肝、肾功能、脂代谢、糖代谢均无不良影响。所测定的数值均在正常值范围内[11]，无毒理学意义。

2.2.5 对大鼠脏器绝对重量及脏/体比的影响

结果见表7、8。

表6 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠血液生化指标的影响Table 6 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on blood components in rats

表7 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠脏器绝对重量的影响Table 7 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on absolute organ weight in rats

表8 女贞子超临界CO2萃取物对大鼠脏/体比的影响Table 8 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on the ratio of spleen to body weight in rats

由表7和8可知，各受试物剂量组之间无显著性差异，并且最高剂量组与对照组比较差异不显著（P＞0.05），而且均在大鼠脏器重量正常值范围内[12]。表明女贞子超临界CO2萃取物对实验动物各脏器的发育以及生长无明显影响。

2.2.6 病理组织学检查

大体解剖肉眼所见：各试验剂量组雌雄大鼠的心、肝、脾、肾、胃肠、睾丸和卵巢与正常对照组比较其外观颜色和脏器大小正常，均未见明显渗出物、增生、水肿、萎缩等病理变化。各剂量组受检脏器均未见有统计学意义的病理变化。

3 讨 论

我国是最早使用中草药作为饲料添加剂的国家[13]，为保障使用的安全，并对女贞子超临界CO2萃取物的进一步开发利用提供可靠的毒理学依据，我们进行了毒理试验。结果表明小鼠经口LD50在15 g·kg－1·BW－1范围内，属于无毒级。女贞子超临界CO2萃取物对大鼠30 d饲养试验结果表明，女贞子超临界CO2萃取物对在实验期间各剂量组的大鼠均未见异常症状和体征，也无死亡情况；女贞子超临界CO2萃取物对大鼠体重增长未见明显影响；女贞子超临界CO2萃取物各剂量组雌、雄大鼠的增重、进食量及食物利用率与对照组相比较均无显著性差异；女贞子超临界CO2萃取物对大鼠的生长发育未见明显影响；女贞子超临界CO2萃取物对大鼠红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白和血小板未见明显影响；女贞子超临界CO2萃取物对大鼠血液生化指标未见明显影响。实验结果还表明，女贞子超临界CO2萃取物各试验组与对照组的大鼠的血清葡萄糖、白蛋白、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、肌酐等生化检查结果均在正常范围内；从女贞子超临界CO2萃取物对大鼠组织检查结果的影响可知，大鼠大体解剖观察和病理组织学观察结果均未发现异常病变。通过镜检可知，心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃、肠、睾丸、卵巢均未见一场病变，未见明显不良影响。

4 结论

通过以上研究结果表明，作为饲料添加剂，从毒理学角度来看，女贞子超临界CO2萃取物在此剂量条件下对动物是安全的，可以放心的食用。

[1]马德莹,单安山,李群道,等.中草药对蛋雏鸡生长性能和免疫功能的影响[J].中国兽医学报,2005,25(1):67－70.

[2]李群道,单安山,马德莹,等.女贞子、五味子与寡糖配伍对肉鸡生产性能和免疫功能的影响[J].畜牧兽医学报,2005,36(4):343－347.

[3]郭晓秋,单安山,赵云,等.女贞子水提物对AA肉仔鸡抗氧化指标的影响[J].动物营养学报,2007,19(1):81－85.

[4]杨银平,单安山,张纬,等.女贞子萃取物对蛋鸡生产性能、蛋品质和免疫功能的影响[C].中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集,2008.

[5]石莉莎,单安山,张纬,等.女贞子对蛋鸡育成期生长发育和免疫功能的影响[J].东北农业大学学报,2009,40(10):79－84.

[6]陈鹏,单安山.女贞子对肉仔鸡生长性能和胴体品质的影响[J].中国饲料,2009(4):15－17.

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[10]崔中林.兽医临床诊疗参数值[M].北京:农业出版社,1990.

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