功劳木的化学成分研究

丛 悦， 王 艳， 王天晓， 李 钦

(河南大学药物研究所，河南开封 475004)

功劳木为小檗科植物阔叶十大功劳Mahonia bealei(Fort)Carr.的干燥茎。广泛分布于我国长江以南各省。功劳木味苦，寒，具有清热燥湿、泻火解毒之功效，主治湿热泻痢、黄疸、目赤肿痛、疮疖、痈肿、黄疸型肝炎。功劳木也是傣族民间用药，单用治疗肝炎。现代药理研究发现功劳木具有抗癌、抗菌、消炎、抗病毒、抗心律失常、降血糖等药理活性［1－4］。本实验采用多种柱色谱手段对功劳木70%乙醇提取物的化学成分进行了分离纯化得到8个化合物，其中化合物1～4皆为首次从该属植物中分离得到，并且发现化合物3、6、8显示出不同程度的抑制肝癌HepG2细胞活性。

1 材料

闪式浓缩器(金鼐科技);AVANCE400M型核磁共振仪(德国Bruker公司);硅胶G，粒度200～300目(青岛海洋化工厂)。大孔树脂(沧州宝恩化工有限公司);葡聚糖凝胶Sephadex LH－20(GE Healthcare);所有化学试剂均为分析纯。

实验样品购于安徽亳州药材市场，由河南大学药学院中药研究室袁王俊副教授鉴定为阔叶十大功劳Mahonia bealei(Fort.)Carr.的干燥茎。

2 提取分离

功劳木干燥茎(切片)7.0 kg，用34 L 70%乙醇加热提取，提取5次，每次2.5 h，合并提取液，减压浓缩回收乙醇，得到乙醇提取物900 g，提取物经硅胶干柱色谱分离，用三氯甲烷－甲醇－水(8∶2∶0.2)展开，均分为8份，每份均用三氯甲烷－甲醇(3∶2→甲醇)梯度洗脱，回收溶剂浓缩。第2份经反复硅胶柱色谱，石油醚－丙酮(10∶1→9∶1)梯度洗脱分离得化合物5(20 mg)，第3、4、5份合并经硅胶柱色谱，用三氯甲烷－甲醇(200∶1→甲醇)梯度洗脱，500 mL/馏份，第85～89馏份经反复硅胶柱和大孔树脂柱分离，10%乙醇洗脱部分经硅胶柱纯化，洗脱剂三氯甲烷－甲醇(12∶1)得化合物7(62 mg)。第135～137馏份经大孔树脂柱，10% ～20%乙醇洗脱部分经硅胶柱纯化，洗脱剂为正丁醇－冰乙酸－水(7∶2∶1)得化合物6(50 mg);30%乙醇洗脱部分用甲醇洗涤得沉淀，经葡聚糖凝胶LH－20纯化得化合物3(15 mg)。第166～173馏份经硅胶柱色谱，洗脱剂为石油醚－丙酮(4∶6)，得化合物2(10 mg)。第177～181馏份经硅胶柱色谱，用石油醚－丙酮－甲醇(6∶4∶1→2∶3∶2)系统梯度洗脱，其中第8份经硅胶柱纯化，洗脱剂石油醚－乙酸乙酯－甲醇(4∶6∶0.8)得化合物4(24 mg)。第205馏份用35%甲醇水重结晶得化合物1(150 mg)。第212～213馏份经大孔树脂柱，5% ～10%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱分离，洗脱剂为三氯甲烷－甲醇(8∶2)洗脱(加少量36%乙酸，100 mL洗脱液加1 mL 36%乙酸)，得化合物8(76 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 白色粉末，ESI－MSm/z:429.1［M+Na］+，1H－NMR(C5D5N，400 MHz)δ:6.92(2H，s，H－2，6)，5.83(1H，Glc－1)，4.94(1H，d，J=3.6 Hz，H－7)，4.03(1H，d，J=3.2 Hz，Glu－6)，4.20～4.41(6H，m，Glc－2，Glc－3，Glc－5，8，9)，3.93(1H，m，Glc－6)，3.15(1H，m，Glc－4)，3.79(6H，2 × OCH3)。13C NMR(C5D5N，100 MHz)δ:153.7(C－3，5)，138.1(C－4)，135.2(C－1)，104.7(Glc－1)，104.6(C－2，6)，86.0(C－7)，71.3(C－8)，54.6(C－9)，56.4(2 × OCH3)，62.3(Glc－6)，72.0(Glc－4)，75.8(Glc－2)，78.1(Glc－3)，78.4(Glc－5)。经与文献［5］数据对照基本一致，因此鉴定该化合物为erythro－syringoylglycerol 8－O-β－D－glucoside。

化合物2 白色针晶，mp 200～202℃。ESI－MSm/z:369.2［M+Na］+，1HNMR(C5D5N，400 MHz)δ:6.78(2H，s，H－2，6)，5.60(1H，m，Glc－1)，3.83(3H，s，OCH3)，3.71(6H，s，2 × OCH3)。13C NMR(C5D5N，100 MHz)δ:155.0(C－1)，154.0(C－3，5)，133.7(C－4)，102.7(Glc－1)，95.2(C－2，6)，78.9(Glu－5)，78.5(Glc－3)，74.8(Glc－2)，71.4(Glc－4)，62.3(Glc－6)，60.4(OCH3)，55.7(2 ×OCH3)。以上数据与文献［6］报道3，4，5－三甲氧基苯酚 1－O-β－D－葡萄糖苷一致。

化合物3 白色粉末，ESI－MSm/z:417.0［MH］－，1H－NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.60(2H，s，H－2′，6′)，6.59(2H，s，H－2，6)，4.85(1H，d，J=5.2 Hz，H－7)，4.42(1H，d，J=7.2 Hz，H－7′)，4.14(1H，d，J=9.6 Hz，Ha－9′)，3.90(12H，s，3，3′，5，5′－OCH3)，3.86(2H，m，Hb－9，9′)，3.33(1H，m，H－8)，3.33(1H，m，Ha－9)，2.90(1H，m，H－8′);13C－NMR(CDCl3，100 MHz)δ:147.1(C－3′，5′)，147.0(C－3，5)，134.3(C－4′)，133.6(C－4)，132.1(C－1′)，129.4(C－1)，102.8(C－2′，6′)，102.3(C－2，6)，87.9(C－7′)，82.2(C－7)，71.0(C－9′)，69.7(C－9)，56.3(3，3′，5，5′－OCH3)，54.6(C－8′)，50.1(C－8)。结合文献［7］推断其结构为表丁香脂素。

化合物4 白色粉末，ESI－MSm/z:605［M+Na］+，1H－NMR(DMSO，400 MHz)δ:8.20(1H，s，OH)，6.53(2H，s，H－2，6)，6.51(2H，s，H－2′，6′)，4.84(1H，d，J=7.2 Hz，Glc－1)，4.65(1H，d，J=6.0 Hz，H－7)，3.91(1H，m，H－9′b)，3.67(1H，m，H－9b)，3.59(1H，m，H－9′a)，3.48(1H，m，H－9a)，2.63(1H，m，H－8′)，2.86(1H，dd，J=4.8，4.4 Hz，H－7′b)，2.46(1H，m，H－7′a)，2.22(1H，m，H－8)，3.74(2 × OCH3)，3.73(2 ×OCH3)，3.03 ～ 4.28(6H，m，Glc－2 ～ Glc－6)。13CNMR(DMSO，100 MHz)δ:152.4(C－3′，5′)，147.7(C－3，5)，136.6(C－4，1′)，132.6(C－1，4′)，106.7(C－2′，6′)，103.1(C－2，6)，102.7(Glc－1)，81.8(C－7)，77.0(Glc－5)，76.4(Glc－3)，74.1(Glc－2)，71.7(C－9′)，69.8(Glc－4)，60.7(Glc－6)，58.5(C－9)，52.3(C－8)，41.6(C－8′)，32.8(C－7′)，56.2(2 × OCH3)，55.8(2 × OCH3)。1H－NMR、13C－NMR数据和文献报道［8］基本一致，故确定为5，5′－二甲氧基落叶松脂醇 4′－O－β－D－葡萄糖苷。

化合物5 无色针状结晶，与β－谷甾醇对照品共薄层色谱，Rf值一致。鉴定该化合物为β－谷甾醇。

化合物6 黄色针晶，mp 189℃ ～191℃，碘化铋钾显色阳性。与小檗碱对照品对照，硅胶薄层色谱 Rf值完全一致。1H－NMR，13C－NMR 数据和文献报道［9－10］基本一致，故确定为小檗碱(berberine)。

化合物7 黄色针晶，mp 194℃ ～196℃，碘化铋钾显色阳性。ESI－MSm/z:353［M+H］+，1HNMR(DMSO，400 MHz)δ:9.86(1H，s，H－8)，9.00(1H，s，H－13)，8.20(1H，d，J=9.2Hz，H－12)，8.02(1H，d，J=9.2Hz，H－11)，7.69(1H，s，H－4)，7.08(1H，s，H－1)，4.93(2H，t，J=6.4 Hz，H－6)，4.09，4.06，3.93，3.86(4 × 3H，4 ×OCH3)，3.22(2H，t，J=6.4 Hz，H－5)，3.38(水峰)。13C－NMR(DMSO，100 MHz)δ:151.4(C－9)，150.2(C－3)，148.6(C－2)，145.3(C－13a)，143.5(C－10)，137.6(C－8)，133.0(C－12a)，128.5(C－13)，126.7(C－4a)，123.3(C－12)，121.3(C－4b)，119.8(C－8a)，118.8(C－1)，111.2(C－4)，108.6(C－11)，61.8(－OCH3)，56.9(C－6)，56.0(－OCH3)，55.8(－OCH3)，55.3(－OCH3)，25.9(C－5)。1H－NMR，13C－NMR 数据和文献［9－10］报道基本一致，故确定为巴马汀(palmatine)。

化合物8 黄色针晶，mp 198℃ ～199℃，碘化铋钾显色阳性。ESI－MSm/z:339［M+H］+，1H－NMR(DMSO，400 MHz)δ:10.09(1H，s，OH)，9.85(1H，s，H－8)，9.00(1H，s，H－13)，8.20(1H，d，J=9.2 Hz，H－12)，8.02(1H，d，J=9.2 Hz，H－11)，7.70(1H，s，H－4)，6.87(1H，s，H－1)，4.91(2H，t，J=6.4 Hz，H－6)，3.14(2H，t，J=6.4 Hz，H－5)，4.09，4.06，3.94(3 ×3H，3 ×OCH3)。13C－NMR(DMSO，100 MHz)δ:150.6(C－9)，150.5(C－3)，148.3(C－2)，145.6(C－13a)，144.0(C－10)，138.6(C－8)，133.7(C－12a)，129.3(C－13)，127.2(C－4a)，123.7(C－12)，121.6(C－4b)，119.8(C－8a)，117.4(C－1)，115.4(C－4)，109.9(C－11)，62.3(－OCH3)，57.5(C－6)，56.7(－OCH3)，49.0(－OCH3)，26.2(C－5)。1H－NMR，13CNMR数据和文献报道［9－10］基本一致，故确定为药根碱。

4 体外抗肿瘤活性

应用 MTT方法［11］检测化合物1～8对肝癌HepG2细胞的抑制作用。化合物 3，6，8对肝癌HepG2 细胞的 IC50值分别为 86.5，13.3，54.6 μM/L。其余化合物IC50值均大于100 μM/L。阳性对照丝裂霉素对肝癌 HepG2细胞的 IC50为1.62 μM/L。结果显示，化合物3，6，8对肝癌HepG2细胞具有不同程度的抑制作用，其中小檗碱活性最强。

［1］顾关云，蒋 昱.十大功劳属植物化学成分与生物活性［J］.国外医药·植物药分册，2005，20(5):185.

［2］邹 澄，张荣平，浦湘渝，等.傣族民间药尼泊尔十大功劳的化学成分研究［J］.中国民族民间医药杂志，1999，6(3):176.

［3］王天晓，李 明，雷凯健，等.功劳木抗肿瘤作用研究进展［J］.中国老年学杂志，2008，28(11):1143.

［4］Lin J G，Chung J G，Wu L T，et al.Effects of berberine on arylamineN－acetyltransferase activity in human colon tumorcells［J］.Am J Chin Med，1999，27(2):265.

［5］姚广民，王玉波，汪礼权，等.马醉木叶的酚性化学成分［J］.药学学报，2008，43(3):286.

［6］廖永红，郭 剑，徐丽珍，等.黑风藤的化学成分［J］.药学学报，1999，34(3):208.

［7］闫利华，徐丽珍，林 佳，等.裂叶铁线莲木脂素成分研究［J］.中国中药杂志，2008，33(15):1841.

［8］Wang Changzeng，Jia Zhongjian.Lignan，Phenylpropanoid and iridoid glycosides from pedicularis torta［J］.Phytochemistry，1997，45(1):159.

［9］江纪武，肖庆祥编.植物药有效成分手册［M］.北京:人民卫生出版社，1986:800.

［10］吕光华，陈建民，王立为，等.细梗十大功劳根的化学成分研究［J］.华西药学杂志，1995，10(4):202.

［11］刘明华，卿 晨，刘吉开，等.Albaconol的抗肿瘤活性及对DNA拓扑异构酶Ⅱ的影响［J］.中国药理学通报，2004，20(11):1224.